HPLC法测定注射用乳糖酸阿奇霉素的含量

王雷

摘 要：本文采用高校液相测定了注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），0.045mol/L磷酸二氢铵-乙腈9∶4（pH=7.1）为流动相，检测波长为210nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。阿奇霉素在0.5～5.0mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。阿奇霉素的平均回收率为99.3%，RSD为0.81%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量测定。

关键词：注射用乳糖酸阿奇霉素；阿奇霉素；含量

阿奇霉素（Azithromycin）是一种属于大环内酯的抗生素，是一种在临床上使用非常普遍的抗生素。注射用乳糖酸阿奇霉素适应于由沙眼衣原体、淋病双球菌、人型支原体引起的需首先采取静脉给药治疗的盆腔炎或由肺炎衣原体、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、卡他摩拉菌、嗜肺军团菌或肺炎链球菌引起的需要首先采取静脉给药治疗的社区获得性肺炎。本文采用高校液相测定了注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量。

1 仪器与试药

FR224CN奥豪斯电子天平（上海书培实验设备有限公司）；HH-601超级恒温水浴（江苏金坛市亿通电子有限公司）；屹谱仪器U-1810准双光束紫外可见分光光度计（屹谱仪器制造（上海）有限公司）；Aurora-F1实验室自动洗瓶机（杭州喜瓶者生物技术有限公司）；1810-B石英自动双重蒸馏水器（上海康路仪器设备有限公司）；LC-5520高效液相色谱仪（北京东西分析仪器有限公司）；SCQ-7201E双频加热型超声波清洗机（上海声彦超声波仪器有限公司）；HYYTH-10小型实验室污水处理设备（潍坊浩宇环保有限公司）；UV2800双光束紫外可见分光光度计（四川汇巨仪器设备有限公司）。阿奇霉素对照品由中国药品生物制品检定所提供。磷酸二氢铵（德州润昕实验仪器有限公司）、乙腈（德州润昕实验仪器有限公司）、磷酸二氢钾（德州润昕实验仪器有限公司）、磷酸（德州润昕实验仪器有限公司）、三乙胺（德州润昕实验仪器有限公司）、磷酸（廊坊鹏彩精细化工有限公司）、甲醇（廊坊鹏彩精细化工有限公司）、醋酸（廊坊鹏彩精细化工有限公司）、醋酸铵（廊坊鹏彩精细化工有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件

依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[3-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；0.045mol/L磷酸二氢铵-乙腈9∶4（pH=7.1）为流动相；检测波长为210nm。理论板数按阿奇霉素峰计算应不得低于2000。

2.2 供试品溶液的制备

取注射用乳糖酸阿奇霉素，精密称取，加60毫升流动相超声处理10分钟，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用流动相分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取阿奇霉素对照品约20mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含2mg的溶液，作为对照溶液。

2.4 阴性溶液的制备

依照处方取除阿奇霉素外等的辅料及阿奇霉素合成过程中原辅料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在阿奇霉素出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

2.5 准曲线的制备

制备浓度为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0mg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，阿奇霉素对照品在0.5～5.0mg·mL-1范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

依照2.3项下制备对照品溶液，精密吸取阿奇霉素对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.67%。结果表明，本实验精密度良好。

2.7 重现性试验

称取同一批的注射用乳糖酸阿奇霉素样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.63%，结果表明此方法的重现性良好。

2.8 稳定性试验

依照2.2项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品阿奇霉素峰面积积分值的RSD为0.66%。结果表明阿奇霉素至少在4小时内稳定。

2.9 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的阿奇霉素对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.81%。

2.10 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定注射用乳糖酸阿奇霉素三批样品中阿奇霉素的含量，含量为标示量的100.1%、100.3%、99.8%。

3 讨论

分别考察0.045mol/L磷酸二氢铵-乙腈9∶4（pH=7.1），0.02moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈（90∶10），1%醋酸0.025mol.L-1醋酸铵溶液-乙腈（75∶25），乙腈-0.05mol.L-1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至2.0）（30∶70），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈（95：5），乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液（含三乙胺0.5%，磷酸调pH至3.0）（40：60），磷酸盐缓冲液一甲醇（70：30），0.05mol/L磷酸二氢钠溶液∶甲醇（95∶5）不同比例的流动相，结果以0.045mol/L磷酸二氢铵-乙腈9∶4（pH=7.1）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用0.045mol/L磷酸二氢铵-乙腈9∶4（pH=7.1）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量测定。注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量应为标示量的95-105%。

参考文献

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[2]余剑英，饶均明，陈本美，刘劭刚，邓富良.高效液相色谱电化学检测法测定阿奇霉素及相关组分[J].理化检验（化学分册），2009（06）.

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[4]刘葆林.微生物法和高效液相色谱法测定注射用阿奇霉素含量的比较[J].安徽医科大学学报，2000（05）.

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