鹿茸口服液质量标准的研究

张鹤婷，葛月

摘 要：目的：建立了鹿茸口服液质量标准的研究方法。方法：TLC法定性鉴别鹿茸，HPLC法测定10-羟基-2-癸烯酸含量，凯氏定氮法测定样品中氨基酸含量（以含氮量计）。结果：TLC法斑点清晰，分離度好。10-羟基-2-癸烯酸在15.41μg·mL-1～308.20μg·mL-1浓度范围内具有良好线性关系，R=0.99996；平均回收率为99.15%，RSD（%）=0.46%。氨基酸含量测定方法重复性、回收率良好。结论：该质量标准的方法准确可靠，可用于鹿茸口服液的质量控制。

关键词：鹿茸口服液；鹿茸；10-羟基-2-癸烯酸；氮；TLC；HPLC

鹿茸口服液功能是温肾，生精养血，补髓健骨。临床用于畏寒无力，血虚眩晕，腰膝痿软。主要成分为鹿茸、蜂蜜，辅料成分为枸橼酸钠和香精。其中鹿茸和蜂蜜均含有丰富的氨基酸（以含氮量计），是药效的主要成分。蜂蜜中含有10-羟基二癸烯酸成分，具有抗菌、强壮机体、增强免疫力的作用，为更好的控制产品质量，建立了其质量标准，并对质量标准进行了准确、科学的验证实验考察。

1 仪器、试药和材料

Thermo高效液相色谱仪；凯氏定氮蒸馏装置；10-羟基-2-癸烯酸（中国药品生物制品检定所，批号：110812-200506，含量：97.6%），氯化铵标准物质（中国标准物质中心，纯度：98.7%）；甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾、磷酸、硫酸铜、硫酸钾、硼酸、氢氧化钠、三氯醋酸、硫酸均为分析纯；鹿茸口服液（市售样品，规格：10ml/支）。硅胶G板（100mm×200mm，青岛海洋化工厂）。

2 方法

2.1 TLC定性鉴别

鹿茸。取鹿茸对照药材0.4g，加70%乙醇5ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液对照药材溶液。取本品10ml，置水浴上挥醇，再加水10ml溶解，加20ml正丁醇萃取，振摇，离心10min（3000r/min），取正丁醇层，挥干，残渣加70%乙醇溶解，作为供试品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇一冰醋酸一水（3：l：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%茚三酮丙酮溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

2.2 HPLC法定量测定

（1）10-羟基-2-癸烯酸。

2.2.1色谱条件：Diamond C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0）（75：25）；检测波长为210nm；流速：1.0ml/min；柱温：35℃。进样量：20μl。

2.2.2 对照品溶液的制备：取10-羟基-2-癸烯酸对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。（每1ml约含10-羟基-2-癸烯酸0.15mg）

2.2.3 供试品溶液的制备：精密量取本品10ml，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理15分钟，用甲醇定容至刻度，摇匀，离心5min（3000r/min），取上清液1ml，至10ml量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 线性关系考察：精密称取对照品适量，加甲醇制成每1ml约含1.5mg 10-羟基-2-癸烯酸的储备液。精密量取储备液，用甲醇稀释成一系列浓度的对照品溶液。分别进样20μl，记录峰面积，以浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归。回归方程为Y=5.1437X-13.452（r=0.99996），10-羟基-2-癸烯酸在15.41μg·mL-1～308.20μg·mL-1浓度范围内线性关系良好。

2.2.5 重复性试验：取同一批次样品，按供试品溶液制备方法，平行处理6份样品，精密吸取20μl注入液相色谱仪，测得6份样品各自含量，结果重复性试验含量RSD为0.74%，该方法重复性良好。

2.2.6 回收率试验：精密量取已知含量的本品5ml，共9份，分别加入已知量80%、100%、120%水平的对照品溶液各3份，按供试品溶液的制备方法，进行测定，计算回收率结果见表1。

结果表明，10-羟基-2-癸烯酸各浓度下的回收率均在98～102%之间，RSD小于2.0%，该方法准确可靠。

2.3 氮定量分析

2.3.1 供试品溶液制备：精密量取本品20ml，置500mL定氮瓶中，加硫酸钾8g、硫酸铜0.3g和硫酸20ml，将瓶以45°角斜置，开始用较低温度缓缓加热，使溶液温度保持在沸点以下，等泡沸停止后，逐步加大电力，待消化溶液沸腾，待溶液呈澄明的绿色后，继续加热30min，冷却后，转移至100ml量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用。同时做试剂空白试验。

2.3.2 蒸馏：取20g/L硼酸溶液10ml，置100ml锥形瓶中，加混合指示液（0.1%甲基红乙醇溶液2份，加0.2%溴甲酚绿乙醇溶液3份，混匀）3滴，将冷凝管尖端插入液面下，精密量取供试品溶液10ml，再加入400g/L氢氧化钠溶液10ml，用少量水洗漏斗数次，夹紧螺旋夹，进行水蒸汽蒸馏，从硼酸溶液开始由酒红色变为蓝绿色时起，蒸馏10分钟后，将冷凝管尖端提出液面，使蒸汽继续冲洗1分钟，用少量水冲洗尖端后，停止蒸馏。

2.3.3 滴定计算：将吸收液用馏出液用0.01mol/L盐酸标准溶液滴定至由蓝绿色变为灰紫色为终点。每1ml盐酸标准滴定液（0.01mol/L）相当于0.1401mg的N。

2.3.4 重复性试验：取同一批次样品，平行测定6次，计算含量，重复性试验RSD为1.22%，该方法的重复性良好。

2.3.5 回收率试验：精密量取已知含量的本品10ml，共9份，分别置500mL定氮瓶中，精密加入氯化铵纯度标准物质（约相当于上述已有含氮量的80%、100%、120%水平各3份），按供试品溶液的制备、蒸馏、滴定，计算回收率，结果见表2。

结果表明，氮定量测定方法下各浓度的平均回收率均在98～102%之间，回收率RSD为0.91%，该方法准确，符合规定。

3 讨论

3.1 TLC鉴别：由于萃取过程中，不易分层，所以必须采取离心的方法，离心后分层效果明显。供试品点样量超过5μl，已饱和有水印，确定点样量为5μl。展开剂中正丁醇粘度比较大，展开速度慢。

3.2 氮定量分析：样品放入定氮瓶内时，不要粘附颈上，万一沾附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果偏低。如硫酸缺少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，会形成硫酸氢钾，而不与氨作用。以硼酸为氨的吸收液，可省去标定碱液的操作，且硼酸的体积要求并不严格，可免去用移液管，操作比较简便。

参考文献

[1]姜汉硕，高岩，岩曲宁.高效液相色谱法测定王浆鹿茸口服液中10-羟基-2-癸烯酸的含量[J].中国卫生检验杂志，2008，18（5）：840.

[2]郑达敏，杜憬生.鹿茸饮片总氮、氨基酸的含量测定[J].中医中药，2008，5（5）：286～287.

[3]中华人民共和国药典（一部）[M].化学工业出版社，2015：323.