黄豆苷元的含量测定及理化性质考察分析

周燕燕+韩永超+尹桂丽

摘 要：为了更好的了解和研究中药药品葛根的成分及含量，为葛根入药时提供更精准的药理依据。本文对葛根中的黄豆苷元进行了分析探究。本文主要是采用紫外分光光度法对黄豆苷元固体脂质纳米粒中黄豆苷元的含量进行考察，并对理化性质进行分析，为后续的黄豆苷元制剂研究提供参考。

关键词：黄豆苷元；含量测定；理化性质考察；分析

黄豆苷元属于中药的一种，是葛根的提取物，属于异黄酮化合物。我国对于葛根中异黄酮化合物的提取方法主要有纯现代中药提取和中药分离技术方法，这种提取物可以对高血压和心脑血管类疾病进行有效治疗，服用后病情控制效果显著，并且无副作用和不良反应，也不会在体内沉积，目前只有我国对于黄豆苷元有技术性的研究，此项目在国外没有意向，而我国现在对于黄豆苷元的还处于口服药品阶段，但口服药品需要一定的快速溶解性，这样才可以让药物在胃中短时间内吸收对病情起到作用，但黄豆苷元较为难溶于水，它在人体的吸收情况并不理想，如果遇见病人的肠胃功能较差，更会影响黄豆苷元的吸收，降低了其临床的应用作用。所以制药方面考虑黄豆苷元制成固体脂质纳米粒，固体脂质纳米粒与普通的制剂相比较，具有更高的载药量和包封率、毒性低和生物利用率较高等优点。

1 黄豆苷元体外分析方法的建立

1.1 制备黄豆苷元SLN

在黄豆苷元SLN准备过程中，首先要将单硬脂酸甘油酯进行加热，温度要达到70℃使其溶化，再加入主体药物黄豆苷元，充分搅拌让药物均匀的分散至单硬脂酸甘油酯中，而后加入同样温度的其中含有豆磷脂的水溶液，再进一步进行机械搅拌，一直到初乳的形成方可停止，然后将其在500W的功率下进行超声分散5min，从0.45μm的为微孔中过滤，在原有量的基础上附加注射用水，将其体积补充到处方量，放置室内进行冷却，温度与室内相同后就可以得到黄豆苷元SLN。

1.2 选择波长检测

提取黄豆苷元对照片适量，将其和无水乙醇一起溶解，进行定量稀释，成为适当浓度的溶液，与此同时，用同样的方法在进行空白脂质纳米粒的乙醇溶液的配置，无水乙醇溶液为空白，按照分光光度法，将其放置紫外扫描，紫外扫描的波长范围在200～400之间，在检测中发现黄豆苷元对紫外扫描的最大吸收波长为249nm，因为同样浓度的空白纳米粒在这样的波长范围内没有被干扰的，所以就可以确定黄豆苷元的检测波长为249nm。

1.3 制备标准曲线

取黄豆苷元对照品进行精密量需10mg，将取出的黄豆苷元对照品放进100mL的量瓶中，用无水乙醇进行溶解并稀释至刻度，精密量取上述5mL置50mL的量瓶中，在此加入无水乙醇进行稀释到刻度作为储存液。对储存液进行精密量取，分别取出1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL置10mL量瓶中，之后用无水乙醇进行定容，用分光光度法，在249nm的波长处测定其吸收度，线性回归以吸收度A对浓度C方式进行，得出的回归方程为Y= 0. 1146X-0.018，R2=0.9995。得出结果表明在1.0～6.0μg/mL范围黄豆苷元内线性关系良好。

1.4 精密度试验

取黄豆苷元适量精密称定，将其分为两份，两份分别使用无水乙醇制成1.0，3.0，6.0μg/mL浓度的溶液，使用0.45μm滤膜进行过滤，对其分别在日内和日间进行重复测定，对其精密度进行考察，结果表明其精密度考察结果符合方法学的要求。

1.5 回收率试验

首先从黄豆苷元的对照品中取精密称取10mg，放进100mL的量瓶中，使用无水乙醇将其溶解，然后进行稀释到一定刻度。取溶解稀释后的溶液5mL放至准备好的空的50mL量瓶中，然后再使用无水乙醇对其进行定容。制备好这种溶液后，留做对照品的储备液。然后，再取空白SLN混悬液5mL，置3个25mL棕色容量瓶中，依次加入对照品储备液2.5，7.5，15.0mL，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为1.0、3.0、6.0μg/mL的样品溶液，分别测定吸收度，代入标准曲线中计算回收率。结果表明，该分析方法的回收率符合方法学要求。

1.6 样品含量的测定

精密量取适量SLN混悬液3mL，置25mL量瓶中，加适量无水乙醇，超声约5min，加无水乙醇稀释至刻度。摇匀，滤过。精密量取续滤液5mL，置25mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。以无水乙醇为空白，于249nm波长处测定吸收度A样，另取已知浓度黄豆苷元对照品溶液同法测定吸收度A对，按照公式计算供试液浓度C样：C样=C对×A样/A对。

2 黄豆苷元基本理化性质研究

2.1 黄豆苷元在不同pH值磷酸盐缓冲液中的溶解度：将过量黄豆苷元原料投入pH值为2.0，5.8，6.5，7.2，7.8的磷酸盐缓冲液的锥形瓶中，涡旋15min，置空气恒温振荡器中，37℃、120次/min恒温振荡12h，平衡48h后，在规定时间取样，用0.45μm微孔滤膜保温过滤后，测定溶液吸收度，根据標准曲线计算药物的浓度，结果黄豆苷元在不同pH值磷酸盐缓冲液中的溶解度分别为1.643，2.064，2.567，5.179，6.876μg/mL。结果表明黄豆苷元的溶解度随着pH值的升高而增加。

2.2 黄豆苷元在不同介质中油水分布系数的测定：本文采用摇瓶法测定黄豆苷元的油/水分配系数。本实验选择正辛醇为油相，pH2.0，5.7，6.5，7.8的磷酸盐缓冲液及蒸馏水为水相，在经水饱和过的正辛醇溶液中定量加入黄豆苷元溶解后，0.45μm滤膜过滤，与经正辛醇饱和的不同pH值水相各15mL装入锥形瓶中，密塞，于涡旋振荡器上剧烈振荡30min后，放入37℃空气恒温振荡器中，在120r/min下振荡72h，静置后两相分层，分别吸取水相和油相，紫外分光光度法测定黄豆苷元在水相中的浓度（Cw），计算油相的浓度Co=（m总-Cw·Vw）/V，油相和水相中药物浓度的比值即为油/水分配系数P=C油相/C水相=Co/Cw，每种介质重复测定3次取平均值。

结果如下：水相为pH2.0，5.7，6.5，7.8的缓冲液及蒸馏水时，测得的油/水分配系数P分别为120.4，82.3，76.8，18.4和48.6，表明黄豆苷元油水分配系数随pH值升高而降低。

3 讨论

由本文上述分析可以得知，在对黄豆苷元的含量进行测定和分析时，可以采用体外分析法进行测定和分析，并且这样的测定方法符合药典相关规定和要求。在本研究中，对黄豆苷元的测定采取了紫外分光光度法的测定方法，并确定其检测波长是249mm。本次测定试验结果显示，分析方法不但可行，且重现性非常好。除此之外，准确度也十分高，因而可以将本体外分析法当做黄豆苷元的测定方法推广使用。希望本文的研究分析可以为药学工作人员的工作提供一些借鉴和帮助。

参考文献

[1]李忠亮，王晓波，宋晓楠，袭荣刚，姚文，石焱.黄豆苷元胶囊在健康人体的药动学研究及生物等效性评价[J].药学服务与研究，2015（04）.

[2]李忠亮，王文博.黄豆苷元在健康人体内的药动学研究[J].解放军药学学报，2015（01）.

[3]王艳梅，吕立勋.黄豆苷元的药理作用及临床应用[J].中国药师，2014（09）.

[4]韩文全，李艳芹，何志松.黄豆苷元的研究与开发[J].食品与药品，2016（05）.