浅析细菌内霉素在药品检验中的作用

顾 佳，张 斌，崔晓懿

哈尔滨市食品药品检验检测中心

浅析细菌内霉素在药品检验中的作用

顾 佳，张 斌，崔晓懿

哈尔滨市食品药品检验检测中心

在药品的生产和流通过程中，内霉素污染问题是不可能完全避免的。由于细菌内霉素对人体的严重危害，药品细菌内霉素的检测程序就必不可少。现如今细菌内霉素的检测方法，主要有凝胶法、动态浊度法、显色基质法三种方法。

药品检测；内霉素；凝胶法；浊度法；显色基质法

细菌内霉素作为外源性致热源，可以激活人体内的中性粒细胞，从而导致体温调节中枢的发热现象。内霉素通过消化道进入人体时并不能产生危害，可是一旦通过注射的途径进入血液，就会使人体产生“热原反应”引起不同的疾病。因此在医药检测领域，无论是注射用药剂、放射性药物还是抗生素、疫苗等的药品都必须进行细菌内霉素含量的检测。

一、细菌内霉素的检测手段

现在的细菌内霉素检测手段，主要有凝胶法和光度测量法两种。

1.1 、凝胶法

凝胶法是利用鲎试剂产生凝集反应来检测药品中是否含有过量细菌内霉素的方法。凝胶法操作简单，即便离开实验室也能对细菌内霉素的含量进行检测。

1.2 、光度测量法

光度测量法分为浊度法和显色基质法在药品的试剂检测中，我们通常使用的方法是动态浊度法。动态浊度法是通过检测反应混合物的浊度到达某一吸光度的速率计算样品内霉素含量的一种方法。

二、细菌内霉素检测几种方法的对比

为了保证数据的一致性和准确性，我们所引用的主要数据就是依次使用凝胶法、动态浊度法、显色基质法对乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液进行检测。

2.1 、凝胶法和动态浊度法细菌内霉素检测对比

所需主要仪器和试剂：BET-32M细菌内霉素检测仪；UV-2550型紫外分光光度计；PHS-3C型酸度计；ZH-2型自动漩涡混合器；细菌内霉素检查用水（bet）；鲎试剂；内霉素标准品（ces）。

样品：乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液。

2.1.1.细菌内霉素限值的确定

已知L＝K/M，K为人用每kg体重每小时最大可接受的内霉素剂量，K＝5 EU/（kg·h）。考虑到药品使用安全性要求及一般大容量输液细菌内霉素限值要求，将本品的L定为0.5 EU/mL为宜。

2.1.2.标准曲线的可靠性试验

用细菌内霉素检查用水对内霉素标准品进行稀释为四个浓度的样品，于鲎试剂混合均匀后插入细菌内霉素检测仪内进行检测，经过测量整理可得系数r＞0.980，故标准曲线成立。

2.1.3.样品最大稀释倍数和干扰性试验

按照公式MVD=L/λ，计算得样品实验时MVD为16倍。将乳酸左氧氟沙星注射液分别稀释为2、4、6、8倍进行回收实验。分别取上述各液0.15ml加到预先加有0.15ml的鲎试剂反应管，混合均匀在同上检测条件下进行测定，测定结束后按照标准曲线回归方程计算出内霉素含量。通过实验可知，样品的回收率均在规定范围之间，符合相关要求。

2.1.4.动态浊度法与凝胶法检测结果比较

按照《中国药典》中用动态浊度法和凝胶法对乳酸左氧氟沙星进行检测可知两种方法结果均符合规定，详表如下：

动态浊度法与凝胶法检测结果

动态浊度法和凝胶法比较来说，有着操作简便，结果直观可见的优点。针对药品的细菌内霉素检测领域要求高、批量大的特点是非常实用的。

2.2 、显色基质法与动态浊度法细菌内霉素检测实验比较

所需主要仪器和试剂：涡旋混合仪；紫外可见分光光度计；璃比色杯；定量可调移液器；显色基质鲎试剂盒；显色基质；内霉素标准品（CES）；细菌内霉素检测用水（BET）；Hcl反应终止剂。

样品：乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液

2.2.1.细菌内霉素限值的确定

原理同实验2.1，通过计算可得，本样品的细菌内霉素限制L= 0.5EU/mg

2.2.2.标准曲线可靠性试验

用和试验2.1中标准曲线的可靠性试验2.1.2中的方法对样品的标准曲线进行可靠性试验，得到r≥0.980，故标准曲线有效。

2.2.3.样品的干扰实验

将三组实验用乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液加入BET，稀释4种比例的稀释级原液，在四个稀释级原液中加入0.2EU/ml的内霉素标准品。用分光光度计测量出稀释原液与内霉素标准品的吸光度。根据结果计算稀释原液除1：5的一组有轻微增强作用外，其余均没有抑制或增强作用，回收率都在规定的要求之内。

2.2.4.样品的测定

选择1：7的稀释液测定，三组乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液的检测结果，都符合规定。

通过实验对比可，显色基质法除了对实验用品和稀释液要求无热源外，对鲎试剂灵敏度也有着比较高的要求。但而且显色基质法与凝胶法相比，抗干扰能力更强。相比于动态浊度法，显色基质具有更好的重复性和可操作性，这种方法却有着比凝胶法和动态浊度法更快速、更灵敏。因为它仅需要可见分光光度计和玻璃比色皿就能够得出结论，在实验条件比较简单的地方也可以展开，因此对于医药检测领域的细菌内霉素的测定，也有着很大的现实意义。

综上所述，传统的凝胶法有着测量简单方便的特点；动态浊度法有着测量结果数据化更准确的优点；显色基质法更是兼有着测量准确和测量工具简单的特点。这三种方法各有优点，因此无论是凝胶法，动态浊度法，显色基质法目前都是在药品内霉素测量领域常用的方法。所以在日常的药品检测当中，就应该根据具体的需要灵活巧妙的选择和运用这几种方法。

[1]李春燕.定量检测香丹注射液中的细菌内霉素的方法分析[J].中国药物经济学.2014(03)

[2]潘宇虹,钟岩.细菌内霉素检查法在疫苗生产检查中的应用[J].生物技术世界.2014(03)