快速检测片在食品微生物检测中的应用

张阳

摘要：近年来，食品安全问题日渐严峻，人们对食品安全检测的要求也越来越高，微生物污染问题是食品安全中很重要的一部分，如何让微生物检测在实践中获得准确度高的结果，并且实现快速检测成了人们关注的问题。快速检测片的出现为我们提供了检测新思路，本文将对快速检测片在食品微生物检测中的应用做个简单概括。

关键词：快速检测片；食品微生物检测

一、快速检测片在食品微生物检测中的应用优点

第一，快速检测片可以实现少样检测，相较于传统方法而言，快速检测片不再需要繁杂的检测过程---不断按顺序加入试剂，需要的检测玻璃器具少，这样就减少了对器具的清洗消毒和保存等繁复的工作。快速检测片体型小、对保存条件也不严苛，利于市场运输，也节省了人力物力财力。快速检测片检测后不会对环境产生二次污染，没有试验废液或废渣。与其他检测方法相比，快速检测法不仅适用于实验室检测，也同样可以用在户外或生产现场多种环境中使用。

第二，快速检测片检测时，取样和接种工作几乎无间隔交替进行，这样避免了不必要的微生物污染，避免接种时间过长出现微生物大量繁殖对检测结果造成大的误差，这样使得检测结果更加准确。

第三，传统检测方法检测速度较慢，而且对检测条件也有较高要求，一般的小企业和基层单位不具备这样的检测条件，所以很难开展检测工作，或者即便开始了检测工作也难以达到既定的检测效果。快速检测片的检测时间被大大缩短，而且用快速检测法与传统方法检测金黄色葡萄球菌、霉菌酵母菌、大肠杆菌等的实验数据表明，快速检测法的检测结果准确有效，说明检测片法的确可以通过缩短接种时间而防止微生物繁殖，从而达到优良的检测属性。

二、在食品微生物检测中较为常见的测试片[2]

1.以滤纸为载体的检测片

以滤纸为载体的检测片是目前市面上最常见也是使用最多的一种，滤纸要选白色、密度分布均匀、无毒且吸附能力合适的作为检测的载体。

菌落总数检测片的检测是利用氯化三苯四氮唑的氧化还原性，它在接受氢后可以形成不溶水的红色产物，滤纸上的红色点状物的多少即为细菌总数。但由于滤纸纤维较大，所以部分菌株会在纤维缝隙中生长，所以检测结果会比实际结果小。

大肠杆菌检测片的检测原理同样也是氯化三苯四氮唑的氧化还原性，以及指示剂的显色，大肠杆菌生长时产生的酶可以将氯化三苯四氮唑还原生成不溶水的物质，即红色菌落；细菌分解代谢产酸，使得指示剂变黄。所以结果如果是在黄色背景上有红色菌落或者红色菌落有黄色晕圈，即可显示为阳性；反之为阴性。

大肠菌群、大肠杆菌纸片荧光法通过在检测片上构建一个理想化的酶反应系统，加入待测菌所需营养物质、酶促底物以及抑制杂菌生长的成分，检测微生物产生的相关酶的活性来判断菌的数量。

2.以Petrifilm为载体的检测片

由美国3M公司发明的Petrifilm的检测片载体，是两层薄膜组成，上层薄膜为聚丙烯薄膜，下层为有网格且覆盖有培养基的聚乙烯薄膜，培养基中含有微生物生长所需要的营养物质和试样所需要的试剂，两层薄膜通过一种特殊的凝胶剂连接。用该Petrifilm作为载体的检测片检测待测物时，不需要再培养增菌，直接将检测片放入适宜的环境中一定时间，既可计数。

细菌总数检测只需要将样品地道检测片中央，用压板轻压，是样品均匀布满培养基，直接培养既可计数，该方法也可以用来做乳酸菌数量的检测。

霉菌、酵母菌检测片与细菌总数检测有所不同的地方在于，需要在培养后观察菌落形态来判断是什么菌落，酵母菌菌落通常为小菌落，菌落边缘清晰，颜色通常为灰色或蓝绿色，菌落凸起，而霉菌菌落一般为大菌落，菌落边缘模糊不清，颜色不均，中间颜色暗，菌落为扁平状。

大肠菌群、大肠杆菌检测片的检测原理是利用大肠杆菌能产生葡萄糖苷酸酶，检测片中含有葡萄糖苷酶指示剂，若样品中含有大肠杆菌，指示剂会显示为蓝色围绕在菌落周围，因为表面覆盖的胶膜会将乳糖代谢产生的二氧化碳圈住，形成一个个气泡和菌落；而大肠菌群产酸，会使指示剂变红，因此根据菌落颜色即可一次分辨出大肠杆菌和大肠菌落。

金黄色葡萄球菌检测片中的培养基对金黄色葡萄球菌有很高的选择性，培养后可看到暗紫色菌落。如發现可疑菌落，可利用金黄色葡萄球菌能产生耐高温的脱氧核糖核酸酶的特性，对可疑菌落进行高温处理，如果是金黄色葡萄球菌则会显示粉红色环。

三、快速检测片在食品微生物检测的研究进展

近几年来，虽然快速检测片在食品微生物检测上有很大的成就和进步，但仍然存在许多缺点等待解决。比如滤纸缝隙过大，用滤纸作为载体时，滤孔中的菌落与滤纸背面的菌落无法计数；滤纸持水力差，难以维持微生物生长所需要的湿度，滤纸上营养物质不能均匀分布，所以菌落生长也会不均，造成计数难度以及最后结果的不准确。Petrifilm载体检测片面积小，菌数量较多时难以计数，两层薄膜在产气产粘液过多是会影响菌落的生长，还有就是如果人力条件下为能在培养前将样品挤压均匀，样品会从边缘漏出，影响最后结果[2]。

因此为了弥补快速检测片的缺点，我们将快速检查法与其他方法想结合，做到取长补短、互为补充的检测方法。如果待测物DNA中有目的基因，需要结合聚合酶链式反应（PCR）对目的基因进行复制，该方法检测结果精确度极高[1]。

参考文献：

[1]张瑛.快速检测片在食品微生物检测中的应用[J].食品安全导刊，2018（13）：62-63.

[2]吴清平，孙永，蔡芷荷，郭伟鹏.快速测试片在食品微生物检测中的应用[J].中国卫生检验杂志，2006（05）：635-637.