液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中氯霉素的不确定度评定

文 李旭平 杜平 李海亮 陕西省果蔬及加工产品质量检验检测中心

氯霉素是一种广谱抗生素，对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有一定的抑制作用，被广泛作为抗生素使用，但是它同时有严重的副作用，有的人对它很敏感，只需摄入少量，就能对骨髓造成伤害，不能产生足够的红细胞、白细胞或血小板，也就是再生障碍性贫血。我国实验室对于氯霉素的检测主要采用液相色谱-串联质谱法，测量氯霉素检验结果的不确定度可以让实验室检测更加准确。本次不确定度评定参照JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》和CNAS-GL06《化学分析中不确定度的评估指南》的测定方法。本次对蜂蜜中氯霉素的不确定度进行测量评定，可以为实验结果的准确度提供依据和参考。

1.材料与方法

1.1 材料与试剂

甲醇（色谱纯赛孚瑞）、乙腈（色谱纯赛孚瑞）、乙酸乙酯（色谱纯赛孚瑞）、氯霉素标准物质（农业部环境保护研究所）

1.2 仪器与设备

液相色谱-质谱联用仪（美国赛默飞世尔公司TSQQuantum Access Max）、电子分析天平（梅特勒-托利多ME204/02）

1.3 色谱条件

色谱柱：C18柱，1.7μm ，100mm×2.1mm；流动相：甲醇、水；流速：0.25mL / min；进样量：10μL；柱温：35℃。

1.4 质谱条件

离子源：电喷雾电离源（ESI-）。碰能量撞：21eV；扫描方式：多反应监测（MRM）；扫描定量离子：321.068>151.645；定性离子对：321.068>256.796；

液相色谱梯度洗脱条件（实验温度：20±2℃）

1.5 实验方法

称取5g样品于50mL离心管中，加入5mL水，快速混匀溶解。加入15mL乙酸乙酯，振荡离心。取上清液12mL于鸡心瓶，55℃旋转蒸干。加入5mL水溶解残渣。将提取液倒入已活化的Qasis HLB柱中，待溶液完全流出后，用10mL水洗过柱，再用5mL乙腈+水（1+7）洗柱弃去。最后用5mL乙酸乙酯洗脱，并收集氮吹干。用乙腈+水（20+80）定容至1mL，上机测定。

2.测量数学模型

试样中氯霉素（以氯霉素计）按下式计算：

式中：X---样品中氯霉素含量（以氯霉素计），单位为微克/千克（μg/kg）； m---样品质量，单位为克（g）；c---由标准曲线得出的样液中氯霉素的浓度，单位为纳克/毫升（ng/mL）；f---稀释倍数。V---样液最后定容体积，单位为毫升（mL）；根据数学模型分析，影响不确定度来源有以下几个方面：样品称量引入的不确定度；样品定容引入的不确定度；样品平行测定引入的不确定度；标准系列溶液引入的不确定度；标准曲线拟合引入的不确定度。

3.不确定度评定

4.测量不确定度结果

相对标准不确定度一览表

根据上表计算合成不确定度为

合成标准不确定度为U(X)=X*Uml ( X )= 2.215*0.01293= 0.02863

综上，测量不确定度结果为： 取置信区间为95%，k=2，为扩展不确定度U=U(X) k= 0.02863*2 = 0.05726μg/kg；则样品中氯霉素的含量为2.215 + 0.057μg/kg。

5.结论和讨论

从本次实验的结果看，不确定度影响程度依次是标准曲线拟合＞标准溶液配制＞测量重复性。通过此次评定，相关实验可以从以下几个方面进行改进实验：（1）应最大程度让被测样品浓度落在标准曲线的线性范围中间位置，线性越高，降低曲线拟合引入的不确定度。（2）不确定度大小与被测样品浓度呈负相关，被测组分含量低时，测得结果的不确定度会增大。（3）应采用合适的标准溶液范围校正被测组分，配置标准曲线使用的器皿扩展不确定度值越小，测得结果的不确定度越小。（4）为保证实验的准确度，要注重标准曲线的线性和标准溶液的配制。此外，选择精度高的液相色谱-质谱联用仪、国家有证标准物质和计量检定合格且扩展不确定度小的计量器具开展实验，也会进一步保证实验结果的准确度。