高效液相色谱法测定动物性食品中磺胺类药物多残留

我国食品安全在四个方面存在风险，其中兽药滥用是当前食品安全源头污染的主要来源，我国兽药应用依然处于无序状态。磺胺类药物是一种广谱抗菌药，其性质稳定、产量大、品种多、价格低、使用简便、供应充足等优点，在兽医临床和畜牧养殖业中作为饲料添加剂或动物疾病治疗药物广泛应用。但是磺胺类药物会引起人过敏性反应，并有“三致”作用。随着社会的发展，磺胺类药物的不合理使用，使其在动物性食品中残留引起食品安全问题已备受关注，成为食品安全监管领域的重点工作之一，而各类检测方法也随之应运而生。

本实验旨在建立一种高效液相色谱法测定动物性食品中磺胺类药物多残留的测定方法。该方法操作简单、快速、稳定、精密度高，适用于基层食品安全检测部门实验室应用。

实验部分

主要仪器与装置。高效液相色谱仪紫外检测器Alliance 2695- TUV（美国Waters公司）；MS105分析天平感量0.000001g，ME802E天平感量0.01g（瑞士Xcjkzxer Toledo公司）；涡旋振荡器MS1 MiniShaker（德国IKA公司）；离心机Multifuge X1R（美国Thermo公司）；均质机Scientz- 11L（宁波新芝生物科技股份有限公司）；旋转蒸发仪N- 1200BV- WD（日本理化器械株式会社）；氮吹仪N- EVAP（美国Organomation公司）；固相萃取装置20POS（美国Waters公司）。

主要试剂与材料。磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺二甲氧哒嗪对照品：Dr.Ehrenstorfer GmbH。含量均≥99.0%；乙酸乙酯（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、甲酸（色谱纯）：Thermo；盐酸（分析纯）、正己烷（分析纯）：北京化工厂；超纯水：默克Mlix Essential5+Milli- Q Reference纯水和超纯水联用系统。

标准溶液的配制。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

色谱分析条件。色谱柱：ODS- 2HYPERSIL：C18 5μm 250mm×4.6mm；紫外检测波长：270nm；进样量：100μL；柱温：35℃；流速：1mL/min；梯度洗脱。

前处理方法。称取5.00g经切碎匀浆的鲜猪肝样品于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入10g无水硫酸钠和乙腈20mL，参照《食品安全国家标准动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定高效液相色谱法》（GB 29694- 2013）进行样品前处理，过0.22μm的针筒有机滤膜，于进样瓶中供高效液相色谱测定。

结果与讨论

检测器的选择。本实验单独采用紫外检测器，其中10个峰按先后顺序分别是：磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺二甲氧哒嗪。

精密度试验。根据《实验室质量控制规范食品理化检测》（GB/T 27404- 2008）附录F.2的要求，结合《食品安全国家标准动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定高效液相色谱法》（GB 29694- 2013）。精密度实验选用30.0μg/kg、60.0μg/kg、120.0μg/kg三个水平进行，重复测定6次。实验结果表明，在紫外谱图中峰面积的RSD<5%。本法测定的精密度较好，实验结果见表1。

方法的线性范围、回收率和检出限。将前文中配制好的10～5000μg/L范围的系列混合标准溶液在前文所述的高效液相色谱条件下测定，以各药物的峰面积对质量浓度进行线性回归，得到10种磺胺类药物的线性方程及相关系数。在鲜猪肝样品中加入混合标准溶液（分别加15、30、60μL，即30.0、60.0、120.0μg/ kg3个水平）按上述前处理和检测方法进行测定，每个添加浓度重复6次，结果见表2。从表2可见，在10～5000μg/L质量浓度范围内10种抗菌药的线性关系良好，加标回收率范围80.53%～100.71%，可以满足日常分析的要求，10种磺胺类物质在本方法的回收率和检出限见表2。

样品前处理步骤主要参考GB/T29694-2013，实验表明完全按照标准进行前处理，加标回收较不稳定。本实验参考文献，试验选择比较了乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯等溶剂对10种磺胺的提取效果。结果表明乙腈提取可以沉淀蛋白，提取液中油脂含量也较少，对于目标检测物提取效率较高且浓缩净化较容易。因此选择用乙腈作为提取溶剂，超声提取5min，确定仪器的最佳工作条件为梯度洗脱；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；紫外检测波长：270nm；进样量：100μL。在此最佳条件下，10种磺胺类药物的回收率90%左右，RSD小于5%，相关系数达到0.999。随机抽取超市售卖的鲜猪肝3份，用所建立的方法进行检测，均未检出本文所分析的10种磺胺类药物。该方法操作简单、精密度高、线性范围宽，适用于基层食品安全實验室对于动物性食品中磺胺类药物多残留的日常监测。

作者简介：

刘丽（1986-），女，北京，北京市西城区食品药品监督管理局，食品工程师，研究生，从事食品药品检测工作。