疑似遗传代谢病串联质谱检测结果和临床分析

王衍俊

【摘要】目的：探讨串联质谱技术在高危新生儿代谢病筛查的结果，分析遗传代谢病发病率、疾病分布情况。方法：对2021年1月—2022年10月于我院就疑似遗传代谢病寻求医疗措施的儿童一共500例作为本次研究的全部观察对象。针对所有儿童通过串联质谱检测技术进行遗传代谢检测；针对所有初筛阳性、高度怀疑存在遗传代谢病的病例召回复查，随后结合其他检测措施开展临床分析。结果：针对500例开展检测的儿童中，初筛阳性病例一共存在30例，阳性暴露率为6%，结合其他监测措施分析，最终被确诊存在遗传代谢病的患者只有2例，占比率为0.4%。所罹患的遗传代谢病分别为：苯丙氨酸氢化酶缺乏症：1例；甲基丙二酸血症：1例。结论：在本次研究中，针对存在类似状况的家庭的孩子就遗传代谢病的检测，总体上的发病率较高，但针对遗传代谢病的检出病种较少，因此需要更大样本容量的儿童进行检测。

【关键词】串联质谱检测技术；遗传代谢病；发病率；分布

Results and clinical analysis of suspected genetic metabolic disease by tandem mass spectrometry

WANG Yanjun

Taian Maternal and Child Health Hospital， Taian， Shandong 271000， China

【Abstract】Objective： To explore the results of tandem mass spectrometry in high-risk neonatal metabolic disease screening， analyze the incidence of genetic metabolic disease， disease distribution. Methods： A total of 500 children who sought medical treatment for suspected genetic metabolic diseases in our hospital from January 2021 to October 2022 were all observed in this study. Genetic metabolism was detected by tandem mass spectrometry in all children. All cases with positive initial screening and high suspicion of genetic metabolic disease were recalled for re-examination， and then clinical analysis was carried out in combination with other detection measures. Results： Among the 500 children tested， there were 30 positive cases in the initial screening， with a positive exposure rate of 6%. Combined with analysis of other monitoring measures， only 2 patients were finally diagnosed with genetic metabolic disease， accounting for 0.4%. The genetic metabolic diseases were phenylalanine hydrogenase deficiency （1 case） and glycogen storage disorder （1 case）. Conclusion： In this study， the detection of genetic metabolic diseases among children from families with similar conditions showed a higher incidence on the whole， but fewer diseases were detected for genetic metabolic diseases， so a larger sample size of children was needed for detection.

【Key Words】Tandem mass spectrometry detection technology； Genetic metabolic disease； Incidence of disease； Distribution

遺传代谢病也被称之为遗传代谢紊乱（Inherited metabolic disease LMD），该疾病的发生在很大程度上受到遗传缺陷的影响；串联质谱检测技术（Tandcm Mass Spectrometry MS/MS MS2）在当前是一种特异性生化代谢物测定技术，该检测技术的应用步骤大致是针对标本的质荷比、湘阴离子强度完成测定之后，以该结果为依据针对物质进行定量分析[1]。MS2涉及到质谱选择的多个步骤，MS2作为一种化学分析技术，在实验研究、临床实践中主要被应用于鉴定未知化合物且阐明该物质的分子结构[2]。MS2也可以被适用于分子种类的定量，因为其应用效果，MS2被认为是一种非常敏感的技术，适用于微量样品（低至10～12g，10～15moL）的定量分析，并且易于与色谱分离方法配合使用，以鉴定混合物中的成分[3]。在生物医学研究、临床实践中，MS2有几种应用途径，即：临床试验、毒理学、先天性代谢缺陷---儿童筛查、癌症病理筛查、药物应用结果检测等；MS2的这些特点为早期识别遗传代谢病并为其及时干预提供了依据[4]。据此，本文就串联质谱技术在高危新生儿代谢病筛查的结果进行分析。

1 资料和方法

1.1 一般资料

对2021年1月—2022年10月于我院就疑似遗传代谢病寻求医疗措施的儿童一共500例作为本次研究的全部观察对象。患儿家属中的直系亲属、旁系亲属在三代之内存在代谢性疾病的情况；于我院寻求MS2技术检测的患儿均存在反复呕吐、抽搐、喂养困难、黄疸、肝脏体积和肌张力异常的情况。儿童年龄区间（3～6个月）。

1.2 研究方法

1.2.1 样本采集 确保样本采集发生在儿童出生48h且喂养活动达到6次的情况下进行的。通过儿童的足跟采集血液并制作成干滤血片，然后从样本中采集4个血液斑点，血液斑点的采集要求是：所采集血液斑点的直径必须达到8mm，针对血片，依次开展平置、悬空、充分阴干的程序，再确认针对上述血片样本完成上述程序工作之后，将这些血片标本送到本院新生儿疾病筛查中心备检。

1.2.2 MS2检测 进行MS2检测的仪器为；仪器为Waters公司生产的TQD 525以及PE公司生产的试剂盒：肉碱好琥珀酰丙酮测定试剂盒、非衍生化多种氨基酸试剂盒。针对LMD的筛查指標总共达到80项，其涉及到：琥珀酰丙酮、氨基酸、碱基肉碱及上述几种指标的相应比值，以便对于迄今发现的所有LMD进行检测；配药设施还包括内标准品、质控品。通过Neo Base测试程序针对氨基酸、琥珀酰丙酮、酰基和游离肉碱；其具体测量过程包括但不限于：针对血片使用溶液对其开展萃取，随后通过串联质谱系统开展分析，而每一种样本对于内标准的响应程度应当和其之间的浓度成比例；在针对非衍生化多种氨基酸、肉碱、琥珀酰丙酮开展定量分析时，应通过多反应监测模式获得数据，在测定时间内针对分析物在碰撞诱导后的产物的定量分析应当完成；采用系统内软件包执行数据采集、处理；而每一份报告应当由遗传专科医师负责审核、发放。

1.2.3 初筛阳性个体复查 在确认患者阳性之后，令其家属携带其于我院复查，该阶段检查还应当配合血尿常规、血糖、乳酸、脑电图、CT、血氧数值的检查；在获得结果之后，医生针对患者建立档案，并且定期追踪、复查。

2 结果

2.1 MS2检测结果、LMD确诊情况统计

针对500例开展检测的儿童中，初筛阳性病例一共存在30例，阳性暴露率为6%，结合其他监测措施分析，最终被确诊存在遗传代谢病的患者只有2例，占比率为0.4%。所罹患的遗传代谢病分别为：苯丙氨酸氢化酶缺乏症：1例、甲基丙二酸血症1例。见表1、2。

3 讨论

如上所言，针对LMD的医疗措施倡导尽早检查、干预；LMD作为一种遗传疾病，多数学者认为针对孩子的干预应当在1岁以前完成，这样不仅仅改善预后，且对于患者家属而言，所耗费的治疗成本也更少[5]。

在本次研究中，500例存在类似情况的患者经过MS2、其他检测之后，在最终被确认为存在LMD的患者只有两例；一例为糖原贮积症，另外一例为苯丙氨酸氢化酶缺乏症。苯丙氨酸氢化酶缺乏症被归类为氨基酸代谢病，在早期不能及时进行干预，往往会在进展到几个月之后出现小便鼠尿、喂养困难、肌力异常，达到晚期会发展为神经系统并发症，本次研究中，该例患者的临床症状不典型，在后续经过干预的，当前情况稳定，可能表明其病情正处于早期；这显示了MS2联合其他检测在诊断早期苯丙氨酸氢化酶缺乏症中发挥的重要价值[6]。

甲基丙二酸血症属于常染色体隐性进，在临床上被归类为有机酸代谢异常疾病；甲基丙二酸包括异亮氨酸、缬氨酸、苏氨酸、奇数链脂肪酸等在代谢途径中由甲基丙二酰辅酶产生，一般是因为甲基丙二酰辅酶A缺陷或者维生素B12的作用造成甲基丙二酸、丙酸等代谢物质异常积累，进而导致神经、肝脏、骨髓等重要器官出现损伤。该疾病发展到后期，患儿会出现脱水、生长发育迟缓、肝脏肿大、昏迷、智力异常等危险信号明显的症状；重度患者在症状出现后，生存期可能在一年，但是这种情况较少，尽管甲基丙二酸血症是一种治疗难度较高的遗传性疾病，但是大多数情况能得到有效控制，而早期的诊断非常重要；就临床症状而言，该例患者也不典型，这对于先天性疾病的诊断要求很高，这也在一定程度上显示了MS2诊断技术的优势[7]。

MS2联合基因检测可以帮助LMD的诊断，在近几年，随着测序技术的改善，MS2受此影响针对LMD的诊断准确性也在提高；本研究中两例LMD患者均被找到致病基因，且对于被查出致病定位点的患者进行家系基因检查有助于满足家属今后的生育需要；本研究两例患者的父母均被查出是基因携带者，均为常染色体隐性遗传病，可以根据MS2、基因检测结果指导如何健康生育下一胎[8]。

参考文献

[1] 韩连书.遗传代谢病检测技术及应用选择[J].临床儿科杂志，2023，41（2）：81-85.

[2] 胡勤，何艺，韦懿.新生儿遗传代谢病串联质谱筛查影响因素和基因检测结果分析[J].中国妇幼保健，2022，37（10）：1891-1895.

[3] 万智慧.新生儿遗传代谢病串联质谱筛查带教思考[J].中国优生与遗传杂志，2022，30（3）：531-532.

[4] 赵娜，王金玮，李雪燕.廊坊地区41062例新生儿遗传代谢病串联质谱筛查结果分析[J].中国优生与遗传杂志，2022，30（3）：504-508

[5] 王菊，周玉侠.串联质谱与二代测序联用在新生儿遗传代谢病诊断中的应用价值[J].中国优生与遗传杂志，2021，29（12）：1739-1741.

[6] 龚易晓，宋晓红，徐娟，等.新生儿遗传代谢病串联质谱筛查病种探讨[J].中国公共卫生，2022，38（1）：20-24.

[7] 鲁文东，王洪祥，朱敏.串联质谱技术联合高通量测序对新生儿遗传代谢病的筛查分析[J].中国优生与遗传杂志，2021，29（3）：413-415.

[8] 于爱真，冯雪，王欣.质谱检测联合下一代测序在新生儿遗传代谢病诊断中的应用[J].海南医学，2021， 32（2）：177-180.