Th1/Th2细胞因子谱对滤泡性淋巴瘤的临床意义

陈月苗　翁珊珊　郑翠苹　蔡小平　吴圣豪　石岳坚　黄健

[关键词] 淋巴瘤;滤泡性;细胞因子谱;白细胞介素类

[中图分類号] R733.1          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2021）23-0025-05

Clinical significance of Th1/Th2 cytokine profiles in follicular lymphoma

CHEN Yuemiao   WENG Shanshan   ZHENG Cuiping   CAI Xiaoping   WU Shenghao   SHI Yuejian   HUANG Jian

Department of Blood Chemotherapy， Wenzhou Central Hospital in Zhejiang Province， Wenzhou   325000， China

[Abstract] Objective To study the levels of Th1/Th2 cytokine profiles in peripheral blood of patients with follicular lymphoma at initial diagnosis， and to understand their significance in the development of disease. Methods A total of 30 patients with follicular lymphoma diagnosed in our hospital from January 2015 to June 2019 were selected. The levels of peripheral blood Th1/Th2 cytokine profiles in selected patients at initial diagnosis and after treatment were determined by CBA technology， and compared with those in 30 healthy persons in our hospital. The clinical significance of cytokine profiles was discussed. Results ①The levels of IL-2， IL-6， IL-10 and TNF in 30 patients with follicular lymphoma at initial diagnosis were higher than those in healthy persons.②In patients with follicular lymphoma， the levels of IL-2， IL-10 and IFN-γ in the lactate dehydrogenase （LDH） increased group were higher than those in the normal LDH group（Wilcoxon W values  were 102.500， 89.000， 95.500， and P values were 0.021， 0.004， 0.009）. The levels of IL-2， IL-4， IL-10 and IFN-γ in the β2 microglobulin （β2-MG） increased group were higher than those in the normal β2-MG group（Wilcoxon W values  were 76.500， 77.500， 69.500， 63.500， and P values  were 0.026， 0.029， 0.011， and 0.005）. The level of IL-2 in the high-risk group [Follicular Lymphoma International Prognostic Index （FLIPI） score 3 to 5] was significantly higher than that in the low-and middle-risk group （score 0 to 2） （Wilcoxon W value was 125.000， P value was 0.010）.③After treatment， the levels of IL-2， IL-6， IL-10 and TNF in the 30 patients with follicular lymphoma were significantly lower than those at initial diagnosis. Conclusion The levels of IL-2， IL-6， IL-10 and TNF in peripheral blood of patients with follicular lymphoma at initial diagnosis are higher than those in normal physical exam. The expression levels of cytokines and clinical characteristics of patients with follicular lymphoma are correlated.

[Key words] Lymphoma; Follicular; Cytokine profile; Interleukins

濾泡性淋巴瘤（Follicular lymphoma，FL）由不同比例的中心细胞和中心母细胞构成其肿瘤性滤泡[1]，约占我国非霍奇金淋巴瘤（Non-hodgkin lymphoma，NHL）的8.1%～23.5%[2]，在西方国家占20%左右，居东南亚NHL第二位[3]。FL的临床表现不一，以无痛性外周淋巴结肿大为主要症状，易引起骨髓侵犯。利妥昔单抗、氟达拉滨及苯达莫司汀[4-5]等药物的使用使FL的治疗效果明显改善。但FL在临床、遗传和分子水平上表现出明显的异质性[6]，且不可治愈，大部分患者经标准治疗后最终仍复发，甚至部分患者短期内迅速进展。细胞因子是由肿瘤细胞及周围的免疫细胞经刺激而产生分泌的小分子蛋白质，主要参与免疫应答调节、抗肿瘤、刺激造血功能及介导炎症反应等。本文检测初诊FL患者的外周血细胞因子水平，并研究其与FL疾病发展的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2019年6月期间经病理学证实的在我院血液科初诊的FL患者，排除标准：①免疫缺陷或免疫抑制的患者;②合并感染的患者。另外随机选取30例我院体检中心健康志愿者为对照组。FL组30例，其中男16例，女14例，年龄39～82岁，平均（65.27±12.33）岁;健康对照组30例，其中男20例，女10例，年龄34～82岁，平均（64.10±11.27）岁。两组患者的性别、年龄比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

采用标准治疗R-CHOP方案化疗，具体为：利妥昔单抗375 mg/m2 d1静脉滴注+环磷酰胺750 mg/m2 d2静脉滴注+长春新碱1.4 mg/m2 d2静脉滴注（最大量2 mg）+多柔比星50 mg/m2 d2静脉滴注+泼尼松100 mg d2～6口服。

1.3 观察指标

抽取患者初诊时、R-CHOP方案治疗2个疗程后和对照组的外周血，通过流式细胞微球阵列（Flow cytometric microsphere array，CBA）技术检测其细胞因子水平，并抽取FL患者初诊时的外周血检测血常规及血生化。所有患者均已知情同意。

1.4 细胞因子检测方法

检测试剂为流式细胞微球阵列（CBA）人Th1/Th2/Th17 试剂盒（BD CBA Human Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit，BD Biosciences）。检验步骤如下：取2 mL外周血标本在无菌条件下置于37℃的水浴箱，2 h后分离备用。人Th1/Th2/Th17 试剂盒放置在室温1 h后将白细胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）、白细胞介素-4（Interleukin-4，IL-4）、白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、白细胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）、肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor，TNF）、干扰素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）捕获微球混合，200×g离心5 min后弃去上清液，并加入同体积的血清样本增强缓冲液。重悬微球避光反应30 min，每FACS管加入50 μL待测血清，50 μL混合捕获微球和标准品，50 μL藻红蛋白（Phycoerythrin，PE）荧光抗体混匀。室温下避光反应3 h，每管加1 mL洗液，200×g离心5 min，每管加300 μL洗液，于4 h内在流式细胞分析仪（BD FACS Calibur，美国）上进行检测。用CBA软件检测分析获取的数据，从而计算出样本中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF及IFN-γ的含量。

1.5 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量数据采用[M（P25、P75）]表示，IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ各项指标的比较采用Wilcoxon秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 健康志愿者和初诊滤泡性淋巴瘤患者的外周血细胞因子水平比较

健康志愿者血液中细胞因子 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF和IFN-γ的表达水平分别为2.91（2.05， 4.21）pg/mL、2.95（1.79，4.52）pg/mL、6.31（4.15，16.75）pg/mL、6.72（3.57，13.75）pg/mL、4.05（2.54，6.53）pg/mL、5.35（3.15， 16.65）pg/mL，初诊FL患者外周血 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF及IFN-γ的表达水平分别为6.02（1.87， 19.65）pg/mL、3.49（2.05，8.95）pg/mL、13.15（9.98， 26.65）pg/mL、16.65（14.76，33.75）pg/mL、14.05（8.71， 31.65）pg/mL、9.17（5.35，18.34）pg/mL。初诊FL 组患者血液中的 IL-2、IL-6、TNF、IL-10表达水平均明显高于健康体检者，差异均有统计学意义（Wilcoxon W值分别为776.000、695.000、533.500、626.000，P值分别为0.040、0.001、0.000、0.000）。

2.2 初诊滤泡性淋巴瘤患者的外周血细胞因子表达水平和临床特征的相关性

在不同的性别或者年龄段，初诊FL 患者外周血的细胞因子水平与对照组比较，差异均统计学意义（P>0.05）。初诊 FL 患者中，乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase，LDH）升高组 IL-2、IL-10、IFN-γ的表达水平高于LDH正常组（Wilcoxon W值分别为102.500、89.000、95.500，P值分别为0.021、0.004、0.009）;β2微球蛋白（β2 microglobulin，β2-MG）升高组 IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ水平高于β2-MG正常组（Wilcoxon W值分别为76.500、77.500、69.500、63.500，P值分别为0.026、0.029、0.011、0.005）;高危组[滤泡性淋巴瘤国际预后指数（Follicular lymphoma international prognostic index，FLIPI）评分3～5分]IL-2水平明显高于低中危组[评分0～2 分]（Wilcoxon W值为 125.000，P值为0.010），其余两组细胞因子的差异比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.3 初诊FL患者治疗前与治疗后外周血细胞因子水平比较

FL 患者治疗前外周血IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF及IFN-γ的表达水平分别为6.02（1.87，19.65）pg/mL、3.49（2.05，8.95）pg/mL、13.15（9.98，26.65）pg/mL、16.65（14.76，33.75）pg/mL、14.05（8.71，31.65）pg/mL、9.17（5.35， 18.34）pg/mL。FL 患者治疗后外周血 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF及IFN-γ的表达水平分别为2.02（1.98， 4.95）pg/mL、3.75（1.94，8.05）pg/mL、8.55（5.32，22.65）pg/mL、8.05（4.17，19.25）pg/mL、4.53（2.45，10.05）pg/mL、5.21（3.24， 33.75）pg/mL。初诊FL患者经RCHOP方案治疗2个疗程后外周血 IL-2、IL-6、TNF、IL-10 的表达水平较治疗前下降，治疗前后两组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

细胞因子的表达失调被发现于各种血液系统恶性肿瘤。已有许多研究表明，免疫功能的改变与NHL发生的风险相关[7]。亦有报道显示，血液细胞因子水平的升高和弥漫大B细胞淋巴瘤（Diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）的发生存在一定相关性。Rambaldi等[8]的研究发现部分细胞因子水平的升高对发现侵袭性淋巴瘤有帮助。

TNF-α的细胞来源广泛，主要包括受激活的单核吞噬细胞、自然杀伤细胞及T细胞等。它作为IL-10分泌的诱导剂以促进疾病的进展，并在免疫应答过程中起中心作用。Lech-Maranda等[9]报道106例采用蒽环类药物治疗的DLBCL患者，IL-10和TNF-α联合升高组的完全缓解及总生存率明显降低，无进展生存期缩短，提示IL-10和TNF-α水平指数可作为国际预后指数（International prognostic index，IPI）预测DLBCL患者生存率的附加模型。本研究仅显示初诊FL患者外周血TNF-α的水平高于健康体检者。

IFN-γ的生物学活性具有高度种属特异性，主要来源于活化的T细胞及NK细胞。它除免疫调节外，还可促进巨噬细胞、细胞毒性T淋巴细胞的激活及功能，促进B细胞分化产生抗体，抗病毒等。有学者发现>60岁的淋巴瘤患者外周血IFN-γ水平较对照组明显降低，这可能与老年患者免疫力低下有关。IFN-γ作为最主要的抗肿瘤细胞因子成员被大量报道[10]后，Markovic等[11]研究结果显示，IFN-γ在肿瘤的发生与发展中起促进作用。部分学者认为恶性淋巴瘤患者的IFN-γ表达水平升高，与笔者在FL中的检测结果类似，但机制尚不明确[12-13]。

白介素-2又称为T细胞生长因子，来源于活化的T细胞、NK细胞等。IL-2R是IL-2膜受体的一部分，其可在淋巴瘤细胞表面表达。其促进NK细胞胞毒活性及T、B细胞增殖并产生细胞因子、抗体，激活单核/巨噬细胞。IL-2R由α、β及γ这3种多肽链形成，而可溶性IL-2Rα由IL-2R与IL-2水解产生。因其可反映T细胞的活性，常用于噬血细胞综合征的诊断。Charbonneau等[14]报道sIL-2Rα表达水平的升高和DLBCL及FL的发生有相关性。IL-2R是体现DLBCL肿瘤负荷的一项重要指标，在DLBCL患者中IPI评分高危组、存在B症状组、LDH升高组、β2-MG升高组和临床分期Ⅲ～Ⅳ组，IL-2R的表达水平均明显升高。徐海涛等[15]亦报道相似结论，但FL暂无相关报道。本结果显示，FLIPI评分中高危组、LDH及β2-MG升高组，IL-2水平高于对照组。

白介素-4是致敏的Th2细胞产生，它可抑制单核巨噬细胞产生TNF-α、白介素-1、白介素-6和白介素-8，抑制单核巨噬细胞内的核因子-κB的转位抑制II型白介素-1受体的表达，但目前对恶性肿瘤特别是恶性淋巴瘤的白介素-4水平变化研究较少。

白介素-6来源于单核/巨噬细胞、T淋巴细胞（主要是Th2）、B细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞，多数正常人的白介素-6水平极低，目前临床在感染方面应用较广。Duletic-Nacinovic等[16]等研究显示，IL-6升高是弥漫大B细胞淋巴瘤患者CR率和DFS率的独立预后因素，本研究结果亦发现治疗后的FL患者IL-6表达水平相比治疗前有所下降。周建尧等[17]亦发现弥漫大B细胞淋巴瘤患者外周血的IL-6水平较正常人升高。Dlouhy等[18]发现sIL2-R、IL-6和TNF-α与DLBCL的临床特征及预后不良有关。

白介素-10是一种双抑制的反馈因子，主要来源于活化的单核/巨噬细胞分泌，T淋巴细胞、肥大细胞也可分泌，对Th1细胞及Th2细胞增殖有双向调节作用。IL-10在肿瘤逃逸中起重要作用，重组IL-10使肿瘤细胞避免被特异性细胞毒T淋巴细胞攻击，抑制各种免疫细胞及其分泌细胞因子。同样，IL-10也可經以上机制使恶性淋巴瘤进展。Silva等[19]认为在霍奇金淋巴瘤患者中，IL-6、IL-10、TNF-α和sCD25水平高于健康对照组，治疗后IL-6、IL-10和sCD25水平逐渐降低。大量文献[20]显示IL-10水平的升高同恶性淋巴瘤的进展存在相关性，本研究显示，初诊FL患者LDH及β2-MG升高组IL-10表达水平升高，经治疗后下降，IL-10可能与FL不良预后有关。

细胞因子失衡已成为NHL发生及发展的重要机制，但升高的具体模式因NHL的分型不同存在差异。本研究数据表明，初诊滤泡性淋巴瘤患者血液中的大部分细胞因子表达水平均明显高于健康对照组，而且细胞因子的表达水平高低和滤泡性淋巴瘤患者的临床特征具有相关性，这可能有助于识别高危患者，进一步完善预后评估指数，为他们提供更准确、更适合风险的治疗建议。

[参考文献]

[1] 权小英，张智慧.2148例淋巴瘤临床病理分析[J].四川医学，2019，40（4）：334-339.

[2] 中华医学会血液学分会，中国抗癌协会淋巴瘤专业委员会.中国滤泡性淋巴瘤诊断與治疗指南（2020年版）[J].中华血液学杂志，2020，41（7）：7273-2727.

[3] Intragumtornchai T，Bunworasate U，Wudhikarn K，et al. Non-Hodgkin lymphoma in South East Asia：An analysis of the histopathology，clinical features，and survival from Thailand[J]. Hematol Oncol，2017，36（1）：28-36.

[4] Hill BL，Nastoupil L，Winter AM，et al. Maintenance rituximab or observation after frontline treatment with bendamustine-rituximab for follicular lymphoma[J].Br J Haematol，2019，184（4）：524-553.

[5] Kahl BS，Burke JM，Vanderjagt R，et al. Assessment of maintenance rituximab after first-line bendamustine-rituximab in patients with follicular lymphoma：An analysis from the BRIGHT trial[J].Blood，2017，130：484.

[6] Ljn B，Chen C，Qian Y，et al.Prognostic role of peripheral blood lymphocyte/monocyte ratio at diagnosis in diffuse large B-cell lymphoma：A meta-analysis[J].Leuk Lymphoma，2015，56（9）：2563-2568.

[7] 王秀梅，王淋，廖永梅.不同类型恶性淋巴瘤患者体内免疫指标水平分析[J].海南医学院学报，2017，23（12）：1690-1696.

[8] Rambaldi A，Boschini C，Gritti G，et al.The lymphocyte to monocyte ratio improves the IPI-risk definition of diffuse large B-cell lymphoma when rituximab is added to chemotherapy[J].Am J Hematol，2013，88（12）：1062-1067.

[9] Lech-Maranda E，Bienvenu J，Broussais-Guillaumot F，et al. Plasma TNF-alpha and IL-10 level-based prognostic model predicts outcome of patients with diffuse large B-cell lymphoma in different risk groups defined by the international prognostic index[J]. Arch Immunol Ther Exp （Warsz），2010，58（2）：131-141.

[10] Glasnerl A，Levi A，Enk J，et al.NKp46 receptor-mediated interferon-γ production by natural killer cells increases fibronectin 1 to alter tumor architecture and control metastasis[J].Immunity，2018，48（1）：107-119，e4.

[11] Markovic O，Popovic L，Marisavljevic D，et al. Comparison of prognostic impact of absolute lymphocyte count，absolute monocyte count，absolute lymphocyte count/absolute monocyte count prognostic score and ratio in patients with diffuse large B-cell lymphoma[J].Eur J Intern Med，2014，25（3）：296-302.

[12] 许彭鹏，钱樱，陈秋生，等.滤泡性淋巴瘤国际预后指数2在利妥昔单克隆抗体维持治疗滤泡性淋巴瘤患者中的预后意义[J].中国实验血液学杂志，2017，25（2）：426-430.

[13] Wang J，Gao K，Let W，et al.Lymphocyte-to-monocyte ratio is associated with prognosis of diffuse large B-cell lymphoma：Correlation with CD163 positive M2 type tumor-associated macrophages，not PD-1 positive tumor-infiltrating lymphocytes[J].Oncotarget，2017，8（3）：5414-5425.

[14] Charbonneau B，Maurer MJ，Ansell SM，et al. Pretreatment circulating serum cytokines associated with follicular and diffuse large B-cell lymphoma：A clinic-based case-control study[J]. Cytokine，2012，60（3）：882-889.

[15] 徐海濤，姚福生，梁虹，等.初诊弥漫大B细胞淋巴瘤患者外周血细胞因子水平及其临床意义[J].白血病·淋巴瘤，2018，27（3）：168-171.

[16] Duletic-Nacinovic A，Stifter S，Marijic B，et al. Serum IL-6，IL-8，IL-10 and beta2-microglobulin in association with international prognostic index in diffuse large B cell lymphoma[J]. Tumori，2008，94（4）：511-517.

[17] 赵建治，周建尧，王国芳，等.白细胞介素 6 和 hepcidin 在弥漫大B 细胞淋巴瘤中的表达及其与贫血的相关性[J].白血病·淋巴瘤，2017，26（1）：37-40，45.

[18] Dlouhy I，Filella X，Rovira J，et al. High serum levels of soluble interleukin-2 receptor （sIL2-R），interleukin-6 （IL-6） and tumor necrosis factor alpha （TNF） are associated with adverse clinical features and predict poor outcome in diffuse large B-cell lymphoma[J]. Leukemia Research，2017，59（1）：20-25.

[19] Silva，Priscilla B，Perini，et al. Impact of treatment on IL-4， IL-6， IL-10 and sCD25 levels in patients with Hodgkin′s Lymphoma[J]. Clinical Lymphoma Myeloma and Leukemia，2015，15：S222-S223.

[20] Pernot B，Gyan E，Maillot F，et al.Lymphomas diagnosed in an internal medicine department compared to lymphomas diagnosed in other departments：Clinical and outcome differences[J].Medicine，2018，97（47）：e13 228.

（收稿日期：2021-03-31）