CYP2C19基因多态性与氯吡格雷抗血小板作用的关系研究

高枫 苏伟 徐斌

[摘要] 目的 探讨CYP2C19基因多态性与氯吡格雷抗血小板作用的关系。 方法 收集2017年12月25日～2018年10月9日我院治疗的250例冠心病患者，通过基因芯片检测试剂盒鉴定CYP2C19基因型，根据CYP2C19基因多态性检测结果将患者分为野生型组和突变型组。通过光比浊法测定两组患者的血小板抑制率，并比较两组患者的氯吡格雷抵抗情况。 结果 250例患者中，CYP2C19野生型145例（58.00%），突变型105例（42.00%）。野生型组的血小板抑制率（75.96±11.50）%显著高于突变型组（47.13±7.97）%（P<0.05）。250例患者中共有59例（23.6%）发生氯吡格雷抵抗现象，其中野生型组13例（8.97%），突变型组46例（43.81%），差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论 CYP2C19基因多态性、糖尿病、体质指数是氯吡格雷抵抗的重要影响因素，检测CYP2C19基因多态性、是否患有糖尿病、体质指数有助于指导患者的抗血小板治疗。

[关键词] CYP2C19基因;基因多态性;氯吡格雷;抗血小板

[中图分类号] R541.4          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2019）21-0039-04

Relationship between CYP2C19 gene polymorphism and anti-platelet effect of clopidogrel

GAO Feng SU Wei XU Bin

Department of Cardiology， Wuxi Traditional Chinese Medicine Hospital in Jiangsu Province， Wuxi   214000， China

[Abstract] Objective To investigate the relationship between CYP2C19 gene polymorphism and anti-platelet effect of clopidogrel. Methods A total of 250 patients with coronary heart disease who were treated in our hospital from December 25， 2017 to October 9， 2018 were enrolled. The CYP2C19 genotype was identified by the gene chip detection kit. And the patients were divided into wild type group and mutant group according to the CYP2C19 gene polymorphism test results. The platelet inhibition rate of the two groups was determined by turbidimetry， and the clopidogrel resistance of the two groups was compared. Results Of the 250 patients， 145 cases（58.00%） had CYP2C19 wild type and 105 cases（42.00%） had mutant type. The platelet inhibition rate of the wild type group（75.96±11.50）% was significantly higher than that of the mutant group（47.13±7.97）% （P<0.05）. A total of 59 cases（23.6%） of the 250 patients developed clopidogrel resistance， including 13 cases in the wildtype group（8.97%） and 46 cases in the mutant group（43.81%）. The difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion CYP2C19 gene polymorphism， diabetes and body mass index are important factors influencing clopidogrel resistance. Detection of CYP2C19 gene polymorphism， diabetes， and body mass index can help guide patients with antiplatelet therapy.

[Key words] CYP2C19 gene; Gene polymorphism; Clopidogrel; Antiplatelet

冠心病（coronary atherosclerotic heart disease）是一類因血管狭窄或阻塞造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病。近年来，冠心病的发病率呈逐年上升的趋势，已成为我国城乡人口主要的死亡和伤残原因[1-3]。目前冠心病的治疗方法有限，疗效不佳，因此如何有效防治冠心病是当前研究的重点。

有研究显示，氯吡格雷能够有效降低动脉粥样硬化性血管疾病患者血栓形成的风险，是冠心病预防的推荐药物[4-5]。氯吡格雷是种噻吩并吡啶类衍生物，需经体内代谢转化为活性物质才能发挥抗血小板的作用。而细胞色素P450酶系的CYP2C19参与氯吡格雷的两步代谢，是氯吡格雷代谢的关键酶[6-7]。尽管氯吡格雷能够有效抗血小板，但是仍有部分患者使用氯吡格雷后发生临床血栓栓塞事件[8-9]。本研究旨在通过对250例来我院进行治疗的冠心病患者行CYP2C19基因多态性检测，研究其对血小板抑制率及氯吡格雷抵抗现象的影响，以明确其是否对冠心病患者的抗血小板治疗有指导作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2017年12月25日～2018年10月9日我院治疗的250例冠心病患者为研究对象，诊断符合冠心病的诊断标准，并经头颅CT或核磁共振证实。排除标准：（1）对氯吡格雷过敏、不耐受或者近期使用过氯吡格雷者;（2）血小板计数<1.0×1011个/L;（3）凝血功能异常者;（4）近期有脑出血等出血性疾病者。本研究均获得患者的许可，且所有患者均签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 CYP2C19基因型检测  利用基因芯片检测试剂盒检测原理，根据说明书提取2 mL静脉血中的脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA），通过Primer5软件对CYP2C19基因引物进行设计。PCR反应条件为：94℃预变性5 min，94℃变性30 s、60℃退火30 s、72℃延伸60 s，30个循环，72℃延伸5 min，4℃保温。程序结束后将PCR产物用1%琼脂糖凝胶进行电泳。收集电泳产物进行纯化测序以鉴定CYP2C19的基因型。根据CYP2C19的基因型，将患者分为野生型组和突变型组。

1.2.2 两组患者临床资料比较  制作病历表格，并详细记录患者的年龄、性别、身高、体重、糖尿病史以及入院时的血小板计数、高低密度脂蛋白等一般临床资料。待CYP2C19基因型鉴定分组后，比较两组患者的临床资料。

1.2.3血小板凝集功能检测  所有患者入院后均口服氯吡格雷[生产企业：赛诺菲（杭州）制药有限公司，批号：J20171029]，用药前空腹采集静脉血，置于抗凝管中，以5 μmol/L ADP作为血小板凝集诱导剂，并通过光比浊法测定血小板抑制率，以百分比表示。用药7 d后再次测定血小板抑制率。所有血样均在2 h内完成检测。

1.3 统计学分析

所有数据均采用SPSS 20.0软件分析。其中计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验;计数资料以率（%）表示，采用χ2检驗。筛选出差异有统计学意义的变量后，进一步采用多自变量Logistic回归分析分析影响氯吡格雷抗血小板的危险因素;P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CYP2C19基因型检测结果

250例患者中，CYP2C19的3种基因型GG、GA、AA分别为145例（58.00%）、94例（37.60%）、11例（4.40%），其中GG为野生型（CYP2C19*1/*1），GA和AA为突变基因型（CYP2C19*1/*2，*1/*3，*2/*2，*2/*3，*3/*3）。根据基因型检测结果，将250例患者分为野生型组（n=145）和突变型组（n=105）。

2.2 两组患者临床资料比较

比较两组患者的年龄、性别、体质指数、吸烟史、高血压、糖尿病、甘油三酯、总胆固醇、HDL-C、LDL-C、血肌酐以及血小板计数等临床资料，结果显示两组患者以上临床数据差异无统计学意义（P>0.05），表明两组患者具有可比性。见表1。

2.3 血小板凝集功能检测结果

通过光比浊法测定两组患者的二磷酸腺苷诱导的血小板抑制率分别为野生型组（75.96±11.50）%和突变型组（47.13±7.97）%，且野生型组的血小板抑制率显著高于突变型组（P<0.05），见表2。

2.4两组患者发生氯吡格雷抵抗比较

250例入选的患者中共有59例（23.6%）发生氯吡格雷抵抗现象，其中野生型组13例（8.97%），突变型组46例（43.81%）。见表3。

2.5 影响氯吡格雷抗血小板的危险因素Logistic回归分析

影响氯吡格雷抗血小板的危险因素为体质指数、糖尿病和CYP2C19突变基因。见表4。

3讨论

氯吡格雷目前被广泛应用于抗血小板的治疗中，是冠心病的预防药物。但近年来有较多的研究表明，氯吡格雷的临床疗效存在个体差异，有些患者服用氯吡格雷后发生氯吡格雷抵抗现象，即氯吡格雷不发挥抗血小板作用，增加患者疾病复发的概率[10]。实际上氯吡格雷是一种前体药物，本身不具有活性，需要经过肝脏P450酶系进行两次氧化代谢转化为有活性的代谢产物才能发挥抗血小板的作用，且是不可逆的作用[11]。因此，氯吡格雷抵抗发生在氯吡格雷代谢转化过程中。有研究表明，CYP2C19的基因多态性与氯吡格雷的疗效存在密切关系。CYP2C19是肝脏细胞P450酶系中的一种，参与氯吡格雷的两步氧化代谢过程，是氯吡格雷活化的主要酶[12]。CYP2C19酶编码的基因为CYP2C19基因，位于人类10号染色体上，含有42个等位基因，其中CYP2C19*1为野生型等位基因，其编码的酶具有正常活性，其余为突变型等位基因[13-14]。目前研究较多的突变型等位基因主要是CYP2C19*2和*3，其编码的酶活性降低。

本研究对250例冠心病患者进行CYP2C19基因型检测，结果野生型（CYP2C19*1/*1）145例（58.00%），突变型（CYP2C19*1/*2，*1/*3，*2/*2，*2/*3，*3/*3）105例（42.00%），表明冠心病可造成CYP2C19基因的突变，与许多学者的研究一致[15]。本研究对所有患者进行了血小板抑制率检测，结果发现野生型组的血小板抑制率（75.96±11.50）%显著高于突变型组的血小板抑制率（47.13±7.97）%（P<0.05），表明CYP2C19基因突变可导致氯吡格雷的抗血小板作用降低。通过比较发现，突变型组氯吡格雷抵抗现象的发生比例（43.81%）明显高于野生型组（8.97%）（P<0.05），结果表明CYP2C19基因突变是导致氯吡格雷抵抗现象的重要原因。此外，本研究发现，合并糖尿病患者是出现抵抗氯吡格雷的危险因素，这可能与糖尿病患者血小板聚集性和反应性增强有关，与Nakaquwa等[16]研究结果一致。此外，体质指数增高亦可能使抵抗氯吡格雷的风险增高，可能与肥胖者氯吡格雷药量不足或是肥胖者体内的凝血因子活性增高引起血小板聚集性和反应性增强有关。

綜上所述，CYP2C19基因多态性与氯吡格雷的抗血小板作用密切相关，CYP2C19基因突变可降低氯吡格雷的抗血小板作用，加大氯吡格雷抵抗现象的发生。冠心病患者的氯吡格雷抵抗现象主要与CYP2C19基因突变、糖尿病、体质指数有关。临床上可通过检测CYP2C19基因的多态性、是否患有糖尿病、体质指数，合理选择抗血小板作用药物，提高治疗疗效。本研究仅对正常基因组和变异基因组进行研究，未对CYP2C19的单核苷酸位点的多态性进行分类研究，也尚未探讨CYP2C19基因突变、氯吡格雷的抗血小板作用与长期随访的不良心血管事件的关系，有待以后研究。

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