慢性乙型肝炎患者外周血调节性T淋巴细胞检测的临床意义分析

徐燕 任建敏 刘思宇

[摘要] 目的 探析慢性乙型肝炎患者外周血调节性T淋巴细胞（Treg）检测的临床意义。 方法 选取2016年1月～2018年6月我院收治的60例慢性乙型肝炎患者为观察组，选取同期体检的60例健康者为对照组，均给予外周血检测，比较两组检验结果。 结果 观察组Treg、TrI、Th17百分比均高于对照组，差异显著（P<0.05）。观察组IL-10、IL-17水平高于对照组，差异显著（P<0.05）。观察组CD3+、CD4+百分比低于对照组，CD8+百分比、CD4+ C25+ Treg百分比高于对照组，差异显著（P<0.05）。 结论 慢性乙型肝炎患者外周血Treg水平明显升高，且Th17参与致病过程，因此，通过临床检测及调控，有助于提高患者诊治效果，临床应用与借鉴价值极高。

[关键词] 慢性乙型肝炎;外周血;调节性T淋巴细胞;病因

[中图分类号] R446          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2018）35-0139-03

[Abstract] Objective To explore the clinical significance of detection of peripheral blood regulatory T lymphocytes（Treg）in patients with chronic hepatitis B. Methods Sixty patients with chronic hepatitis B admitted to our hospital from January 2016 to June 2018 were enrolled in the observation group. Another 60 healthy subjects who underwent physical examination during the same time period were selected as the control group. All subjects were tested for peripheral blood and the results of the two groups were compared. Results The percentages of Treg， TrI and Th17 in the observation group were significantly higher than those in the control group （P<0.05）. The levels of IL-10 and IL-17 in the observation group were significantly higher than those in the control group（P<0.05）. The percentages of CD3+ and CD4+ in the observation group were lower than those in the control group， and the percentages of CD8+ and CD4+ C25+ Treg were higher than those of the control group， and the differences were significant（P<0.05）. Conclusion The level of Treg in peripheral blood of patients with chronic hepatitis B is significantly increased， and Th17 is involved in the pathogenesis process. Therefore， through clinical detection and regulation， it is helpful to improve the diagnosis and treatment of patients， and the clinical application and reference value are extremely high.

[Key words] Chronic hepatitis B; Peripheral blood; Regulatory T lymphocytes; Etiology

慢性乙型肝炎是一種全球性流行疾病，发病机制十分复杂。有关学者研究认为，乙型肝炎病毒不会直接损伤肝细胞，引起肝细胞损伤的决定性因素是肝细胞表面乙型肝炎病毒抗原引起的宿主细胞免疫应答[1-3]。经临床研究发现，外周血调节性T淋巴细胞（Treg）数量变化可在一定程度上体现细胞免疫状态[4-6]。因此，在慢性乙型肝炎患者诊治中，可加强对外周血Treg进行检测，从而确保临床诊治安全、可靠。本文现对2016年1月～2018年6月我院收治的60例慢性乙型肝炎患者予以研究，探讨外周血Treg的检测意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月～2018年6月我院收治的60例慢性乙型肝炎患者为观察组，选取同期体检的60例健康者为对照组。观察组中，女29例，男31例;年龄24～69岁，平均（40.45±6.52）岁。纳入标准：均符合《慢性乙型肝炎防治指南》[7]中有关诊断标准。排除标准：合并代谢性肝病或乙型肝炎以外的其他类型肝炎;伴有其他自身免疫性疾病;肝癌及其他肿瘤;3个月内使用过免疫调节剂或者激素。对照组中，女27例，男33例;年龄23～69岁，平均（40.15±6.13）岁;ALT平均（19.40±4.55）U/L，AST平均（15.45±3.75）U/L。两组受检者性别、年龄资料比较，无显著性差异（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1仪器与试剂  GF 500流式细胞计数仪;高速冷冻离心机;连续可调移液器;FZQ-2型漩涡混合器;淋巴细胞分离剂;CD3+、CD4+、CD8+及CD4+ C25+试剂。

1.2.2 检测方法  采用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管采集全血1 mL，吸取CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞三色试剂10 μL;吸取CD4+ C25+试剂10 μL，分别放入洁净试管中，加入全血50 μL，充分混合均匀，放于避光、室温处，时间为20 min。添加红细胞裂解液1 mL，充分混合均匀，放于避光、室温处，时间为15 min。肉眼可见试管中红色液体透亮，表示红细胞彻底裂解，添加磷酸缓冲盐溶液2 mL，充分混合均匀，给予离心处理，离心率1000 r/min，时间为5 min，除去上层清液，用吸水纸吸干管口残余液体。向试管底部白色沉淀中添加磷酸缓冲盐溶液0.5 mL，充分混合均匀，给予流式细胞计数仪检测。

1.3 观察指标

比较两组检验结果。检验指标：调节性T淋巴细胞（Treg）、Ⅰ型调节性T淋巴细胞（TrI）、辅助性T淋巴细胞17（Th17）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-17（IL-17）、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+ C25+。

1.4 统计学方法

应用软件SPSS 20.0处理临床数据，计数资料用[n（%）]表示，予以χ2检验，计量资料用（x±s）表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 結果

2.1 两组Treg、TrI、Th17表达比较

观察组Treg、TrI、Th17百分比均高于对照组，差异显著（P<0.05）。见表1。

2.2两组IL-10、IL-17表达比较

观察组IL-10、IL-17水平高于对照组，差异显著（P<0.05）。见表2。

2.3两组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+ C25+表达比较

观察组CD3+、CD4+百分比低于对照组，CD8+百分比、CD4+ C25+百分比高于对照组，差异显著（P<0.05）。

3 讨论

慢性乙型肝炎指的就是乙型肝炎病毒检验呈阳性，病程超过6个月或者发病日期不明而临床出现慢性肝炎的病症[8]。经相关研究显示[9-11]，引发慢性乙型肝炎的原因主要包括以下几点：（1）家族性传播。针对我国乙型肝炎高发的现状来说，家族性传播是主要原因，其中母婴垂直传播最为常见。一般而言，如果母亲乙型肝炎e抗原阳性，那么未注射乙型肝炎疫苗的子女多数为乙型肝炎病毒携带者。而精液能够检测出乙型肝炎病毒，所以，可经由性传播。上述情况是导致我国乙型肝炎家庭聚集的重要因素。（2）婴幼儿期感染病毒。最初感染乙型肝炎病毒的年龄与慢性乙型肝炎的关系十分密切。胎儿、新生儿一旦感染乙型肝炎病毒，约90%～95%会成为慢性乙型肝炎病毒携带者;儿童时期感染乙型肝炎病毒，约20%会成为慢性乙型肝炎病毒携带者;成年人感染乙型肝炎病毒，约3%～6%会成为慢性乙型肝炎病毒携带者[12-14]。（3）预防意识不强。在乙型肝炎垂直传播中，乙型肝炎疫苗是主要手段。因为经济条件有限，预防意识不强，致使乙型肝炎疫苗接种工作落实不到位，导致乙型肝炎预防工作很难贯彻实施，在一定程度上增加了慢性乙型肝炎病例[15-16]。（4）免疫功能低下。白血病、肾移植、肿瘤等患者感染乙型肝炎病毒后，易进展为慢性乙型肝炎。乙型肝炎发病急性期患者应用肾上腺糖皮质激素等治疗后，导致患者体内免疫平衡受到破坏，进而使急性肝炎转变成慢性乙型肝炎[17]。

慢性乙型肝炎的潜伏期通常在6周～6个月之间。潜伏期指的就是从肝炎病毒侵入到临床出现症状之前。在潜伏期中，根据病原体种类、毒力、数量及人体免疫状态差异，长短不一[18]。经临床研究显示[19-20]，慢性乙型肝炎的临床表现主要包括以下方面：（1）全身表现。身体乏力，易疲劳，且伴有轻微发热症状。失眠、多梦等症状可能与此有关。（2）消化道表现。肝功能异常，胆汁分泌减少，常出现恶心、厌食、腹胀、上腹不适等症状。（3）黄疸。病情严重时，肝功能受损，胆红素摄取、分泌、结合、排泄等障碍，血液中胆红素水平升高。黄疸最初表现为胆红素经由尿液排出，尿液呈黄色。血液中胆红素水平持续升高，导致皮肤、眼睛黄染。因为胆汁酸排出障碍，导致血液中胆汁酸水平升高，沉积在皮肤，刺激末梢神经，导致皮肤瘙痒。（4）肝区疼痛。慢性乙型肝炎通常无剧烈疼痛，部分患者出现右季肋、右上腹隐痛、不适、压痛。倘若肝区疼痛剧烈，应警惕是否为胃肠疾病、胆道疾病及肝癌，以免误诊[21-22]。本研究显示，观察组Treg、TrI、Th17百分比及IL-10、IL-17水平均高于对照组，差异显著（P<0.05），慢性乙型肝炎患者外周血中Treg、Th17高表达与有关文献报道十分相似，而TrI高表达则首次在报道中提出。尽管有关IL-10高表达是否源自TrI有待证实，但在慢性乙型肝炎疾病进展中，TrI可能发挥了重要作用。TrI是一种可产生高浓度IL-10的Treg及Th17表达失衡受到了有关研究学者高度重视，IL-10是一种具有免疫调节功能的抑炎因子，在众多免疫性疾病中发挥了重要作用，可抑制幼稚型T淋巴细胞分化成Th17。所以，TrI、Th17表达情况与慢性乙型肝炎病情程度呈正相关。此外，T淋巴细胞是人体的主要免疫细胞，其数量变化可体现机体免疫水平。CD3+水平可体现机体整体免疫状态;在免疫应答中，CD4+具有清除病毒的作用;CD8+ T淋巴细胞可激活与抑制严格依赖CD4+ T淋巴细胞。有关研究发现[23-25]，CD4+ C25+能够抑制乙型肝炎病毒细胞增殖，降低其活性。本研究提示，观察组CD3+、CD4+百分比低于对照组，CD8+百分比高于对照组，差异显著（P<0.05）。由此说明，相较于健康者，慢性乙型肝炎患者的CD3+、CD4+百分比明显降低，CD8+百分比明显升高，与相关文献报道十分相似。CD3+百分比降低原因为乙型肝炎病毒携带者血清中DNA载量升高，在一定抗原刺激后，导致T淋巴细胞凋亡，降低其水平;CD4+ 百分比降低原因为长期感染乙型肝炎病毒，导致T淋巴细胞大量损耗，使其水平降低;CD8+百分比升高原因为乙型肝炎病毒抗原慢性刺激，致使其水平升高。此外，本研究提示，观察组CD4+ C25+百分比高于对照组，差异显著（P<0.05）。由此说明，CD4+ C25+可对乙型肝炎病毒特异性免疫应答予以抑制，导致机体不能有效抵抗病毒，进而持续感染。所以，CD4+ C25+百分比升高，可作为慢性乙型肝炎诊断的参考指标。

综上所述，在慢性乙型肝炎诊断中，外周血Treg检测意义重大，值得临床应用与借鉴。

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（收稿日期：2018-08-08）