益生菌对结肠癌化疗患者肠道菌群及化疗相关并发症影响的研究

邵云娣 路娜娜 赵敏

[摘要] 目的 觀察益生菌对于结肠癌化疗患者肠道菌群及化疗相关并发症的影响。 方法 选择2015年5月～2016年11月收治的90例结肠癌术后需要化疗的患者（化疗方案均采用奥沙利铂联合亚叶酸钙、氟尿嘧啶），随机分为治疗组和对照组，每组45例。治疗组在开始化疗的同时开始服用双歧杆菌四联活菌片，每次3粒，每天3次；对照组在开始化疗时不给予双歧杆菌四联活菌片干预。观察两组化疗期间不良反应的发生率。收集两组患者的粪便，检测化疗前后双歧杆菌、乳酸杆菌、肠球菌、大肠杆菌、葡萄球菌的含量变化；检测两组化疗前后血中CD4+、CD8+T细胞的比例及CD4+/CD8+比值水平。 结果 在化疗期间，与对照组相比，治疗组患者的恶心、呕吐，腹泻，食欲下降的发生率明显下降（P<0.05）。化疗后，治疗组的双歧杆菌、乳酸杆菌高于对照组，而肠球菌、大肠杆菌、葡萄球菌的含量明显低于对照组（P<0.05）；化疗后，与对照组相比，治疗组CD4+T细胞的比例明显升高，CD8+T细胞比例下降，CD4+/CD8+比值水平明显高于对照组。 结论 益生菌有利于调整结肠癌化疗患者的肠道菌群，提高患者的免疫力，减少化疗相关并发症的发生。

[关键词] 益生菌；结肠癌；化疗；肠道菌群；免疫功能

[中图分类号] R735.34 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）02-0023-04

[Abstract] Objective To observe the effect of probiotics on intestinal flora and chemotherapy-related complications in patients with chemotherapy of colon cancer. Methods 90 patients with colon cancer needing postoperative chemotherapy who were treated in our hospital from May 2015 to November 2016 were enrolled in this study. All patients were treated with chemotherapy regimen of oxaliplatin combined with leucovorin calcium and fluorouracil. The patients were divided into treatment group and control group， with 45 cases in each group. The treatment group was given bifidobacterium tetravaccine tablets at the same time of starting chemotherapy， with 3 capsules each time for 3 times a day. The control group was not given bifidobacterium tetravaccine tablets at the beginning of chemotherapy. The incidence of adverse reactions in both groups was observed. The feces of both groups were collected. The content changes of bifidobacterium， lactobacillus， enterococcus， escherichia coli and staphylococcus were detected before and after chemotherapy. The ratios of CD4+， CD8+ T cells and CD4+/CD8+ between the two groups before and after chemotherapy were detected. Results During chemotherapy， the incidence of nausea， vomiting， diarrhea and loss of appetite decreased significantly in the treatment group compared with that of the control group（P<0.05）. After chemotherapy， the content of bifidobacterium and lactobacillus in the treatment group were higher than that of the control group， while the content of enterococcus， escherichia coli， staphylococcus aureus was significantly lower than that of the control group（P<0.05）. In the treatment group， the ratio of CD4+ T cells was significantly increased， the proportion of CD8+ T cells was decreased after chemotherapy， compared with that of the control group. The ratio of CD4+/CD8+ was significantly higher than that of the control group. Conclusion The probiotics are beneficial to adjust the intestinal flora of patients with chemotherapy of colon cancer， improve the immunity and to reduce the incidence of chemotherapy-related complications.

[Key words] Probiotics； Colon cancer； Chemotherapy； Intestinal flora； Immune function

結肠癌是最常见的癌症之一，在亚洲国家有逐年增加的趋势[1]。然而，由于手术方式及后续治疗措施（比如放疗、化疗）的发展，结肠癌的5年存活率有稳步上升[2]。化疗是结肠癌后期治疗的重要方法之一，其可导致患者出现肠道菌群失调，从而引起恶心、呕吐，腹泻，食欲下降等并发症，这些并发症严重影响了结肠癌患者的化疗期间的生活质量，甚至可能导致化疗终止[3]。益生菌是一种影响宿主中肠道微生物平衡的活微生物的食物补充剂，已知对人类健康具有许多有益效果[4]。本研究探讨益生菌对于改善结肠癌患者化疗期间肠道菌群及免疫力是否有影响，观察益生菌是否能减少结肠癌患者化疗期间的并发症的发生，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择我院肿瘤内科2015年5月～2016年11月收治的90例结肠癌术后需要化疗的患者为研究对象，随机双盲分为对照组和治疗组，每组45例。其中男53例，女37例，年龄55～77岁，术前均无恶心、呕吐，腹泻，食欲下降等并发症。两组术前功能状态评分（KPS分级评分，均在90 分以上）、性别、年龄、病程比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。本研究经本院医学伦理委员会批准实施。

1.2 方法

四联活菌片0.5 g/粒（杭州远大生物制药有限公司，国药准字S20060010）；奥沙利铂100 mg/支（江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字H20000337）；亚叶酸钙 25 mg/支（广东岭南制药有限公司，国药准字H20090052）；氟尿嘧啶 250 mg/支（上海旭东海普药业有限公司，国药准字H31020593）；流式细胞仪（美国Beckman公司）。完善入院辅助检查，所有患者均接受mFOLFOX6方案：奥沙利铂：100 mg/m2 iv gtt（2 h）d1；亚叶酸钙：400 mg/m2 iv gtt（2 h）dL；氟尿嘧啶：400 mg/m2 iv dL，其后2400 mg/m2持续滴注46 h；每两周重复1次，2次为1个疗程。治疗组在进行化疗的同时服用双歧杆菌四联活菌片，每次3粒，每天3次。对照组在进行化疗时不给予双歧杆菌四联活菌片干预。

1.3 观察指标

1.3.1 观察化疗期间并发症的发生率 两组患者开始化疗后，观察两组患者恶心、呕吐，腹泻，食欲下降的发生情况。

1.3.2 肠道菌群的检测 化疗前及化疗后，采集两组患者的新鲜粪便4～6 g，半个小时内送检，根据要求选择各检查菌的培养基板，根据需氧菌和厌氧菌的特点，严格按照其生长环境对细菌进行培养，然后鉴别菌落。最后对粪便稀释液中的细菌量进行计算，结果以log10N表示每克粪便中的细菌数。

1.3.3 血清中CD4+、CD8+ T细胞比例及CD4+/CD8+比值水平的测定 化疗前及化疗后，采集两组患者的血液。取流式细胞仪专用的falcon试管，各管中分别加入100 μL混匀的血液，在各管中加入CD4-APC、CD8-PE流式抗体试剂各0.5 μL，低速涡流混匀试剂和血液3 s，室温避光反应10～15 min。在各试管中加入FACS溶血素1×Lysing Solution 2 mL，低速涡流混匀器混匀，室温避光放置10～15 min。室温条件下300 r/min离心5 min，弃上清，控干，再加入2 mL 1×PBS洗涤，低速涡流混匀器混匀，300 r/min离心5 min，弃上清，控干。制备完成的样本，使用流式细胞仪检测CD4+、CD8+ T细胞百分比并计算CD4+/CD8+比值。

1.4 统计学方法

所有数据均用Gradphad Prism 5.0及SPSS18.0统计学软件进行统计学分析，计数资料采用百分比（%）表示，采用χ2检验。计量资料以均数±标准差（x±s）表示；符合正态分布及方差齐性的多组数据比较采用单因素方差分析，多组之间任两组间比较采用Dunnet t检验；不符合正态分布或方差齐性两者任一条件的数据采用Kruskal Wallis非参数检验方法比较多组间差异，任两组间比较采用Dunnet t检验。P<0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者化疗期间不良反应发生率比较

化疗期间，与对照组相比，治疗组的恶心、呕吐，腹泻，食欲下降发生率明显低于对照组（P<0.05）。见表1。

2.2 两组患者化疗前后肠道菌落比较

化疗前，两组患者肠道双歧杆菌、乳酸杆菌、肠球菌、大肠杆菌、葡萄球菌的含量差异无统计学意义（P>0.05）。化疗后，治疗组的双歧杆菌、乳酸杆菌较对照组明显增加（P<0.05）；化疗后，与对照组相比，治疗组的肠球菌、大肠杆菌、葡萄球菌的含量明显减少（P<0.05）。见表2。

2.3两组患者化疗前后CD4+、CD8+ T细胞比例及CD4+/CD8+比值比较

化疗前，两组患者CD4+、CD8+细胞比例[对照组：CD4+（23.75±2.85）%，CD8+（22.87±3.28）%；治疗组：CD4+（24.53±2.18）%，CD8+（29.28±4.15）%]比较，差异无统计学意义（P>0.05）；化疗后，与对照组[CD4+：（27.63±3.57）%]相比，治疗组的CD4+细胞比例[（36.57±2.63）%]明显升高（P<0.05），CD8+细胞比例[对照组（27.63±4.85）%；治疗组（19.67±3.26）%]下降（P<0.05）（图1）。化疗后，与对照组相比，治疗组的CD4+/CD8+比值更高，见表3。

3 讨论

结肠癌是许多国家最常见的癌症之一，最近的研究显示，我国的结肠癌的发病率为56/10万，并且在逐年上升[5]。化疗是结肠癌患者手术后提高其生存率一个重要的方法，但是化疗药物易引起胃肠道反应，如恶心、呕吐，腹泻，食欲下降等，主要原因有心理因素、免疫力下降等，严重影响了化疗期间患者的生活质量，有时甚至致化疗中断[6，7]。益生菌主要是双歧杆菌和乳酸杆菌等，研究表明，益生菌具有缓解患者腹泻及改善胃肠道不适的作用[8，9]。在本研究中，我们发现益生菌能够明显减轻结肠癌患者化疗期间胃肠道的反应，改善患者在化疗期间的生活质量。

化疗药物的使用主要因为其能杀死肿瘤细胞，达到治疗的作用，但是治疗疾病的同时，由于它对正常细胞也有毒性作用，所以也带来了很多副作用。研究表明，化疗药物在使用期间能对肠道的上皮细胞产生破坏，造成肠道的菌群失调，致使肠道菌群异位[10-13]。在我们的研究中，发现对照组化疗后，双歧杆菌、乳酸杆菌明显减少，而肠球菌、大肠杆菌、葡萄球菌的含量明显增加，化疗药物可导致肠道菌群失调，这个结果与文献的报道相似。大量研究表明，肠道菌群失调会导致呕心、呕吐，腹泻等并发症，严重者甚至会发生内源性的感染，治疗非常棘手[14]。在合理使用抗生素的同時，对肠道微生物环境的调节也显得十分重要[15]。王占锋等的研究发现，益生菌能够抑制病原菌的生长，改善肠道菌群失调[16]。另外还有研究证实，益生菌的使用并不会增加细菌感染的风险[17]。Gratz SW的研究证实，益生菌能够改善动物的肠道菌群种类，防治肠道菌群的异位[18]。在本研究中，我们发现，使用益生菌干预的患者，化疗后，双歧杆菌、乳酸杆菌较对照组明显增加，而肠球菌、大肠杆菌、葡萄球菌的含量明显减少。这个结果说明益生菌有利于调整肠道的菌群的失调，对化疗患者的肠道起到保护作用，从而减少并发症的发生。

文献报道，接受化疗的患者，机体的免疫力往往会有明显的下降，这主要与化疗药物对机体细胞非选择性的毒性作用有关，在杀死肿瘤细胞的同时，也对正常的免疫细胞（例如粒细胞）产生了毒性作用[19，20]。化疗期间患者免疫力下降的主要临床表现为食欲下降，身体疲乏，容易患感染性疾病等，所以提高化疗患者的免疫力是临床十分关心的问题[21]。文献报道，益生菌有利于调节机体T细胞的数量和活性，并直接影响T细胞介导的免疫应答，提高机体的免疫功能[22，23]。王天群等的研究证实，益生菌能提高结直肠癌术后患者的免疫力，减少术后感染的机率[24]。Rizzardini G等[25]报道，益生菌能够增加血浆中抗体的水平，提高机体的免疫力。在本研究中，我们观察了两组患者化疗前后CD4+，CD8+T细胞比例的变化，结果发现，化疗前，两组患者CD4+、CD8+细胞比例及CD4+/CD8+比值比较，差异没有统计学意义，但是，在化疗后，与对照组相比，使用益生菌干预的治疗组患者，CD4+细胞比例明显升高，CD8+比例下降，CD4+/CD8+比值升高，这个结果提示，益生菌有助于增加化疗患者的CD4+细胞比例，恢复CD4+/CD8+比值水平，达到提高化疗患者免疫力的作用。

综上所述，本研究证实，结肠癌患者在化疗期间使用益生菌对机体有很大的益处，它能减少患者化疗期间的胃肠道反应，预防化疗药物所致的肠道菌群失调，还能提高患者的免疫力，改善患者化疗期间的生活质量。但是，本研究还存在一定不足，首先，本研究是单中心的研究，样本量较小，还需要多中心，大样本的研究重复证实。另外，本研究对于益生菌通过什么途径提高机体的CD4+T细胞比例并没有深入阐述，也没有探讨益生菌是否能改善T细胞的功能，这些还需要进一步的深入研究来阐述。

参考文献

[1] Lertkhachonsuk AA，Yip CH，Khuhaprema T，et al.Cancer prevention in Asia：resource-stratified guidelines from the Asian Oncology Summit 2013[J]. Lancet Oncol，2013， 14（12）：e497-e507.

[2] Jemal A1，Siegel R，Ward E，et al. Cancer statistics，2008[J].CA Cancer J Clin，2008，58（2）：71-96.

[3] 龙兴敬，邓泽虎，蒋玉春.直结肠癌术后并发症预防与治疗[J].成都医学院学报，2012，7（2）：306-307.

[4] 余建新，韩春茂.益生菌的作用机制及临床应用前景[J].中国微生态学杂志，2002，14（6）：371-372.

[5] Ferlay J，Soerjomataram I，Dikshit R，et al. GLOBOCAN 2012 v1.1，Cancer incidence and mortality worldwide： IARC Cancer Base No. 11 （Internet） International Agency for Research on Cancer；Lyon，France：2013，2016. Accessed.

[6] 段庚仙.恶性肿瘤化疗的毒副作用及其防治[J].肿瘤研究与临床，2004，16（5）：353-354.

[7] 周宏锋 张玉新 程黎阳等.洛铂、氟尿嘧啶与亚叶酸钙联合化疗的临床毒副作用[J].世界华人消化杂志，2007， 15（1）：86-87.

[8] 赵东，徐桂芳，邹晓平.益生菌的作用机制[J].国际消化病杂志，2012，32（2）： 71-73.

[9] Shadnoush M，Shaker Hosseini R，Mehrabi Y，et al. Probiotic yogurt affects pro-and anti-inflammatory factors in patients with inflammatory bowel disease[J]. Iran J Pharm Res，2013，12（4）：929-936.

[10] 曾幼波，陳琴.肿瘤化疗药物的毒副作用及防治措施[J].海峡医药，2003，15（4）：98-100.

[11] 陈晓慧，鱼芳，陈志盛，等.化疗引起的消化道黏膜炎与肠道菌群相关性的研究进展[J].中国微生态学杂志，2016，28（8）： 991-992.

[12] 许春进，韩敏，徐峰，等.化疗药物对胃癌患者肠道菌群谱的影响及益生菌干预作用的临床研究[J].中华消化病与影像杂志（电子版），2016，6（4）：154-159，

[13] 焦海波. 肿瘤化疗药物的不良反应分析[J].当代医学，2014，20（7）：46.

[14] 陈春华，邱立华.消化道肿瘤化疗相关性腹泻的菌群分布及治疗研究[J].临床消化病杂志，2006，18（2）：89-90.

[15] 张华玲，谭周进，蔡光先，等.肠道菌群失调调控技术研究进展[J].中国微生态学杂志，2011，23（11）：1033-1036.

[16] 王占锋，张萍，魏萍援.肠道益生菌抗病毒作用及其机制研究进展[J].中国微生态学杂志，2010，22（2）：184-185.

[17] 张海英，吕欣，李玉珍.微生态制剂的安全性及其临床应用[J].药物不良反应杂志，2008，10 （5）：340-345.

[18] Gratz SW，Mykkanen H，El-Nezami HS，et al. Probiotics and gut health： A special focus on liver diseases[J].World J Gastroenterol，2010，16（4）：403-410.

[19] 展富琴，冯萍.恶性肿瘤患者化疗前后免疫功能的变化[J].中国血液流变学杂志，2007，17（1）：137-138.

[20] 孙曦：杨云生.益生菌与肿瘤化疗相关研究进展[J].中国实用内科杂志，2016，36（9）：739-743，

[21] 陈丽，焦顺昌.化疗对肿瘤免疫功能影响的研究进展[J].临床肿瘤学杂志，2011，16（9）：853-856.

[22] 董珂，刘晶星，郭晓奎.益生菌增强机体免疫和抗肿瘤作用的分子机制[J].中国微生态学杂志，2005，17（1）：79-80.

[23] Redman MG，Ward EJ，Phillips RS. The efficacy and safety of probiotics in people with cancer：A systematic review[J]. Ann Oncol，2014，25（10）：1919-1929.

[24] 王天群，毕铁男.益生菌对结直肠癌术后患者免疫力和炎性反应的影响[J].河北医科大学学报，2011，32（12）：1389-1391.

[25] Rizzardini G，Eskesen D，Calder PC，et al. Evaluation of the immune benefits of two probiotic strains Bifidobacterium animalis ssp. lactis，BB-12R and Lactobacillus paracasei ssp. paracasei， L. casei 431R in an influenza vaccination model：A randomised，double-blind， placebo-controlled study[J].Br J Nutr，2012，107（6）：876-884.

（收稿日期：2017-05-16）