结核性胸腔积液中干扰素γ、干扰素α及可溶性程序性死亡配体1的表达及临床意义

智日增 刘华生 张哲恩

浙江省舟山医院感染科，浙江舟山316004

结核性胸腔积液中干扰素γ、干扰素α及可溶性程序性死亡配体1的表达及临床意义

智日增 刘华生 张哲恩

浙江省舟山医院感染科，浙江舟山316004

目的探讨结核性胸腔积液（TPE）中IFN-γ、IFN-α及sPD-L1的表达及意义。方法选择2011年1月～2014年 6月间30例TPE、30例恶性胸腔积液患者为研究对象；检测受试者胸腔积液中IFN-γ、IFN-α及sPD-L1水平。结果结核性胸腔积液组IFN-γ、sPD-L1水平高于恶性胸腔积液组和对照组（P＜0.01），结核性胸腔积液组IFN-α水平低于恶性胸腔积液组和对照组（P＜0.01）；IFN-α阻断后TPE中IFN-α的水平明显低于IFN-α阻断前，IFN-γ、sPD-L1的水平明显高于IFN-α阻断前（P＜0.01）。结论IFN-γ、IFN-α、sPD-L1的表达与结核性胸膜炎的发生及进展密切相关。

结核性胸腔积液；干扰素γ；干扰素α；可溶性程序性死亡配体1

结核病是全球高死亡率和高感染率的一种感染性疾病[1]，近年来发展中国家结核病的发病人数呈上升趋势[2]。胸腔积液分为渗出液和漏出液，渗出性胸腔积液以结核性胸腔积液（tuberculosis pleural effusion，TPE）较常见[3-5]，TPE是肺外结核的另一种表现形式，仅次于淋巴结结核[6]，可严重影响患者健康及日常生活，因此对TPE进行尽早诊治具有重要意义[7-9]。研究显示[8，9]，干扰素γ（IFN-γ）、干扰素α（IFN-α）及可溶性程序性死亡配体1（sPD-L1）在感染性疾病中可呈异常表达。本研究通过检测TPE中IFN-γ、IFN-α及sPD-L1的水平，旨在探讨TPE中IFN-γ、IFN-α及sPD-L1的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2011年1月～2014年6月期间我院收治的30例TPE患者为研究对象（结核性胸腔积液组），年龄25～75岁，平均（45±3）岁，男18例，女12例，体质量指数（BMI）（21.79±3.18）kg/m2，平均病程（4±1）年，经我院病理科病理确诊为TPE，符合TPE的诊断标准[4]；选择同期被我院收治的恶性胸腔积液患者30例为恶性胸腔积液组，年龄36～75岁，平均（49±5）岁，男16例，女14例，BMI为（22.56±3.26）kg/m2，平均病程（5±1）年，经我院病理科病理确诊，符合恶性胸腔积液的诊断标准[4]；另选择同期我院收治的非结核性、非恶性胸腔积液患者30例为对照组，年龄25～75岁，平均（47±5）岁，男20例，女10例，BMI为（23.17± 3.52）kg/m2，平均病程（4±1）年，经我院病理科病理确诊。各组在年龄、性别、BMI、病程方面差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究获得伦理委员会审批通过，受试者均知情并签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集入院24 h内胸穿抽取受试者积液50 mL，肝素抗凝，2000 r/min离心10 min，于-80℃保存待测；常规分离获取TPE中单个核细胞（PBMCs），调整细胞至1×106个/mL，加终浓度为100 μg/mL的植物血球凝集素，37℃孵箱（5%CO2）中培养；PBMCs采用终浓度为10 μg/mL的小鼠抗人IFN-α单克隆抗体（IFN-α阻断剂）处理6 h后，收集上清，于-20℃保存待测。

1.2.2 标本检测采用双抗体夹心ELISA法检测所有受试者胸腔积液中IFN-γ、IFN-α及sPD-L1含量，试剂盒购自于上海华大科技有限公司；上述检测均严格按照说明书操作[1]。

1.3 观察指标

统计受试者胸腔积液中IFN-γ、IFN-α及sPDL1水平，并对TPE中IFN-γ、IFN-α及sPD-L1的表达与年龄、病程、BMI进行相关性分析。

1.4 统计学处理

采用SPSS 19.0统计学软件进行分析，计量资料采用t检验或方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验，采用Pearson检验进行相关性分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组血清IFN-γ、IFN-α、sPD-L1水平比较

采用ELISA法检测三组IFN-γ、IFN-α、sPD-L1水平，组间两两比较采用SNK-q检验，检测结果显示，结核性胸腔积液组IFN-γ、sPD-L1水平高于恶性胸腔积液组和对照组，差异有高度统计学意义（P＜ 0.01），结核性胸腔积液组IFN-α水平低于恶性胸腔积液组和对照组，差异有高度统计学意义（P＜0.01），恶性胸腔积液组IFN-γ、sPD-L1水平高于对照组，差异有高度统计学意义（P＜0.01），恶性胸腔积液组IFN-α水平低于对照组，差异有高度统计学意义（P＜0.01），见表1。

2.2 结核性胸腔积液组中各指标的表达与年龄、病程、BMI的相关性

对结核性胸腔积液组中IFN-γ、IFN-α、sPD-L1的表达与年龄、病程、BMI等因素进行相关性分析，结果显示，结核性胸腔积液组中IFN-γ、sPD-L1的表达之间呈正相关（P＜0.05），IFN-γ、sPD-L1的表达与IFN-α的表达呈负相关，见表2。

表1 三组IFN-γ、IFN-α、sPD-L1比较

表1 三组IFN-γ、IFN-α、sPD-L1比较

组别nIFN-γIFN-αsPD-L1结核性胸腔积液组恶性胸腔积液组对照组F值P值30 30 30 1261.27±32.59 338.56±28.15 18.92±5.78 58.7261 0.0000 121.91±20.87 176.48±21.69 251.69±25.78 27.2619 0.0000 4205.29±121.72 1698.71±109.62 998.26±97.58 70.0982 0.0000

表2 结核性胸腔积液组中各指标的表达与年龄、病程、BMI的相关性

2.3 IFN-α阻断前、后TPE培养细胞上清中IFN-γ、IFN-α、sPD-L1水平比较

IFN-α阻断前、后结核性胸腔积液组中PBMCs上清中IFN-γ、IFN-α、sPD-L1的水平存在显著差异（P＜0.01）；IFN-α阻断后结核性胸腔积液组中IFN-α的水平明显低于IFN-α阻断前，IFN-γ、sPD-L1的水平明显高于IFN-α阻断前，差异有高度统计学意义（P＜0.01），见表3。

表3 IFN-α阻断前、后TPE PBMCs上清中IFN-γ、IFN-α、sPD-L1水平比较

表3 IFN-α阻断前、后TPE PBMCs上清中IFN-γ、IFN-α、sPD-L1水平比较

注：与IFN-α阻断前比较，*P＜0.01

阻断前后nIFN-γIFN-αsPD-L1 IFN-α阻断前IFN-α阻断后30 30 t值P值1261.27±32.59 1812.56±36.72*30.9258 0.0000 121.91±20.87 105.67±16.71*9.6782 0.0000 4205.29±121.72 4879.58±137.21*22.8127 0.0000

3 讨论

TPE确诊的依据是在患者的痰液中、胸膜活检标本以及积液中检测出结核分枝杆菌，同时结合其他检测方法亦有助于TPE的诊断[10]。目前临床检测TPE的方法较多，但各种诊断方法均存在一定的不足，因此探寻一种理想的诊断方法对TPE的诊治具有重要意义[11-15]。目前有关IFN-α、sPD-L1在中国结核性胸膜炎人群中表达情况的相关研究较少，因此本研究重点探讨IFN-α、sPD-L1在结核性胸膜炎患者TPE中的表达及其临床意义。

TPE能够以原发病变和继发病变两种形式存在，其主要的发病机制是肺组织靠近胸膜下的干酪样坏死组织溃破而进入胸膜腔间隙内导致胸腔积液发生，进入胸膜腔的分枝杆菌抗原引起主要是由CD4+T细胞介导的迟发型超敏反应[16]。由其产生的各种细胞因子便会充当炎性介质，在循环中的各种细胞因子（主要是淋巴细胞），到发生病变且向组织间隙侵润，而胸腔内的积液多含淋巴细胞成分，从而形成胸腔内富含淋巴细胞的渗出液[17]。本研究中TPE中IFN-γ出现高表达，其表达水平高于恶性胸腔积液和对照组，与既往文献[18]报道一致。TPE中IFN-γ水平出现异常升高，推测与下述机制有关：Th1型细胞介质可将巨噬细胞激活，进而启动结核分枝杆菌的杀灭过程，其途径之一是Th1型细胞免疫可分泌IFN-γ，对结核分枝杆菌的生长起到抑制作用[18]。研究[19]发现，TPE中IFN-α的表达对IFN-γ的分泌起抑制作用，IFN-α可阻断IFN-γ的表达和分泌。本研究亦进一步证实了这一观点。本研究显示，TPE中IFN-α呈低表达，其表达水平低于恶性胸腔积液和对照组。而相关性分析结果亦显示，TPE中IFN-α的表达与IFN-γ的表达呈负相关，与既往研究[19]报道一致。

本研究亦重点探讨了TPE中sPD-L1的表达情况，结果显示，TPE中sPD-L1的表达水平高于恶性胸腔积液和对照组，与文献[19，20]报道一致。TPE中sPDL1出现高表达，表明sPD-L1的分泌可能参与了结核性胸膜炎的发病及进展，其可能机制为：IFN-γ可在干扰素调节因子1的介导下诱导细胞sPD-L1的表达，而sPD-L1的表达与T细胞表面PD-1受体结合可对T细胞免疫应答进行负性调控[19，20]。而本研究中相关性分析结果亦显示，IFN-γ的表达与sPD-L1的表达呈正相关，进一步证实了IFN-γ对sPD-L1表达的调控作用，IFN-γ和sPD-L1共同参与了结核性胸膜炎的免疫调控过程，IFN-γ参与免疫应答的途径之一是上调sPD-L1的表达进而起到免疫调控的作用[19，20]。有文献[20]报道，肺癌患者体内sPD-L1水平可出现异常升高，且sPD-L1的表达与肺癌的进展、转移及预后密切相关。本研究亦显示，恶性胸腔积液中sPD-L1的表达强度高于对照组，与既往研究[20]结果一致。提示sPD-L1的表达可能亦参与了恶性肿瘤的免疫调控过程。

本研究采用IFN-α阻断剂对IFN-α的表达进行阻断，并检测了IFN-α阻断前及阻断后TPE培养细胞上清中IFN-γ、IFN-α、sPD-L1的表达水平，检测结果显示，IFN-α阻断后TPE中IFN-α的水平明显低于IFN-α阻断前，IFN-γ、sPD-L1水平明显高于IFN-α阻断前，即IFN-α的表达明显受到抑制，而IFN-γ、sPD-L1的表达则上调。本研究结果表明，可对结核性胸膜炎患者体内IFN-α进行靶向调控，可以调控患者体内的免疫调控方向，抑制结核性胸膜炎患者的负性免疫应答，进而提高患者免疫应答水平。

本研究不足之处在于未对TPE中IL-4等Th2型细胞因子的表达情况进行检测，因此尚无法了解Th2型细胞因子在结核性胸膜炎发病及进展中的作用以及IFN-α、sPD-L1的表达对Th2型细胞因子的调控影响，因此本研究组后期打算对结核性胸膜炎患者体内免疫调控机制进行进一步深入研究。

综上所述，TPE中IFN-γ、sPD-L1呈高表达，IFN-α呈低表达，IFN-γ、IFN-α、sPD-L1的表达与结核性胸膜炎的发生及进展密切相关。

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Expression and its clinical significance of interferon γ,interferon α and soluble apoptosis ligand 1 in tuberculous pleural effusion

ZHI RizengLIU HuashengZHANG Zheen
Department of Infection,Zhoushan Hospital in Zhejiang Province,Zhoushan316004,China

ObjectiveTo study expression and its clinical significance of interferon γ,interferon α and soluble apoptosis ligand 1 in tuberculous pleural effusion.MethodsFrom January 2011 to June 2014,30 cases of patients with TPE and 30 cases malignant pleural effusion were selected as the research objects.Pleural effusion IFN-γ,interferon α and sPD-L1 level were tested.Results IFN-γ,the sPD-L1 level in TPE group were higher than that of malignant pleural effusion group and the control group(P＜0.01),the interferon α level in TPE was lower than that of malignant pleural effusion group and the control group(P＜0.01),malignant pleural effusion group’s IFN-gamma,the sPD-L1 levels were higher than that in the control group(P＜0.01),and in malignant pleural effusion group interferon α level was lower than that in the control group(P＜0.01);Interferon α level in TPE after being blocked was obviously lower than that before interferon α blocking,and the level of IFN-γ,the sPD-L1 were obviously higher than that of interferon α before the block(P＜0.01).Conclusion IFN-γ,interferon α,sPD-L1 expression are closely related with the incidence of tuberculous pleurisy and development.

Tuberculous pleural effusion;Interferon γ;Interferon α;Soluble apoptosis ligand 1

R521；R73

A

1673-9701（2015）18-0007-03

2015-03-18）