食用玫瑰和土壤中啶酰菌胺残留量的测定研究

姚福泉，侯禄怀，赵 云，孟文俊，张 琼，和顺琴*

（1.中国建筑材料工业地质勘查中心云南总队，云南昆明 650500；2.云南医药健康职业学院，云南昆明 650106）

食用玫瑰含有丰富的氨基酸、膳食纤维、维生素及各种微量元素，具有很高的营养保健价值，可作食用和药用[1]。云南省是食用玫瑰的主要产区，经不断发展已形成完整的产业链，其已被广泛应用于鲜花饼、鲜花酱、花茶等产品的加工，带来了明显的经济、社会效益[2]。但受气候环境、种植模式、区域分布等因素的影响，食用玫瑰的病害发生日益频繁，危害严重。在玫瑰花开时节气候环境普遍低温、高湿，易引起灰霉病、根腐病等病虫害的发生[3]。啶酰菌胺（Boscalid）是德国巴斯夫公司开发的一种新型烟酰胺类内吸性杀菌剂，是一种低毒杀菌剂[4]。其作用机制是通过叶面渗透在植物中转移，抑制线粒体琥珀酸酯脱氢酶的生成，阻碍三羧酸循环，使氨基酸、糖缺乏，能量减少，干扰细胞的分裂和生长，因此对植物病害具有防治作用。啶酰菌胺杀菌谱较广，几乎对所有类型的真菌病害都有活性，对防治白粉病、灰霉病、菌核病和各种腐烂病、褐腐病和根腐病等非常有效，对其他药剂的抗性菌亦有效，与多菌灵、速克灵等无交互抗性[5-7]。其主要用于油菜、葡萄、草莓、果树、蔬菜和大田作物等病害的防治，对作物安全、活性高、渗透传导作用优良，是一种应用前景广阔的杀菌剂[8-9]。

啶酰菌胺为目前最常用的琥珀酸脱氢酶抑制剂（Succinate Dehydrogenase Inhibitors，SDHIs）化学农药，具有低毒、高效的优点，但目前对于食用玫瑰病虫害防治方面的应用尚未见报道[10-14]。考虑到食用玫瑰的实用性及病虫害影响，本文对云南省安宁市八街镇种植的食用玫瑰进行施药处理，对啶酰菌胺在食用玫瑰和土壤中的残留量检测方法进行研究，以期为探索啶酰菌胺产品在食用玫瑰灰霉病等病虫害防治中的可行性应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

气相色谱仪（Agilent 7890A，配ECD 检测器）；色谱柱（Agilent，HP-5，30 m×0.32 mm，0.25 μm）；旋转蒸发仪（BUCHI R-300 型）；粉碎机；低速大容量离心机（TDL-5-A，上海安亭），50 mL 塑料离心管；超声波萃取器。

啶酰菌胺标准品（纯度≥99.97%，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；50%啶酰菌胺水分散粒剂，巴斯夫®股份公司；所用有机溶剂、无水硫酸钠、氯化钠等均为分析纯（市售）。

1.2 试验方法

1.2.1 田间试验方法

供试作物为滇红玫瑰（Dian Hong Rose），露天种植，试验地点为云南省昆明市安宁市八街镇，试验时间 为2021 年4 月14 日至2021 年5 月15 日。种植期间分别设置低剂量（375 g a.i.·hm-2）、高剂量（750 g a.i.·hm-2）以及3 次和4 次施药处理，施药间隔期为5 d，并设空白对照。最后一次施药后3 d、5 d、7 d 时分别取玫瑰茎叶、花瓣和土壤样品测定啶酰菌胺残留量。

1.2.2 样品处理

将玫瑰花瓣、茎叶及土壤充分粉碎后，取10 g样品至50 mL 磨口三角瓶中，加入20 mL 乙腈（0.1%醋酸），密封后置于超声波萃取器中提取5 min。静置5 min 后加入1 g NaCl，再置于超声波萃取器中提取5 min。萃取液转移至离心管，于6 000 r·min-1离心5 min，取10 mL 上清至三角瓶中，无水硫酸钠干燥后，过滤，取1 mL 滤液至样品瓶备用。

1.2.3 标准曲线绘制

将啶酰菌胺标准品溶解于乙腈，配制100 mg·L-1的母液。用乙腈将啶酰菌胺母液稀释成0.01 mg·L-1、0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.50 mg·L-1、1.00 mg·L-1和5.00 mg·L-1的系列标准工作溶液。

1.2.4 色谱检测条件

参考已报道的条件[15-16]并加以优化确定本次色谱检测条件，具体参数为气相色谱仪（Agilent 7890A，ECD 检测器）；色谱柱（Agilent，HP-5， 30 m×0.32 mm，0.25 μm）；恒压模式：100 kPa；升温程序：初始柱温150 ℃，保持1 min，以10 ℃·min-1升温至260 ℃，保持10 min；进样口温度：260 ℃；检测器温度：280 ℃；进样量：1.0 μL；进样模式：分流进样，分流比1 ∶10；载气：高纯氮气（纯度≥99.999%），流量：2 mL·min-1；ECD 尾吹： 30 mL·min-1。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

测定系列标准工作溶液，以啶酰菌胺浓度为x轴，峰面积为y轴，绘制标准曲线（图1），并进行回归分析。啶酰菌胺在0.01 ～5.00 mg·L-1线性关系良好，回归方程为y=854 035x+9 365.6，R2=0.999 5。啶酰菌胺的最低检出浓度为0.01 mg·kg-1。

图1 啶酰菌胺标准工作曲线

2.2 方法回收率及精密度试验结果

将不同浓度的啶酰菌胺标样溶液分别加入未施用啶酰菌胺的玫瑰花瓣、茎叶及土壤空白样品中，进行样品处理，添加水平分别为0.01 mg·kg-1、 1.00 mg·kg-1、5.00 mg·kg-1，每个添加浓度重复检测5 次，计算方法回收率，结果如表1 所示。结果表明，使用本方法测得啶酰菌胺在玫瑰花瓣、茎叶及土壤中的回收率均分别为94.80%～97.00%、94.69%～96.71%、94.25%～100.14%，变异系数分别为1.42%～7.05%、2.29%～4.41%、1.14%～4.99%。本方法准确度和精密度符合农药残留分析的要求。

表1 啶酰菌胺在食用玫瑰及土壤中的加标回收率及精密度试验结果（n=5）

2.3 啶酰菌胺在玫瑰和土壤中的残留检测结果

最后一次施药后3 d、5 d、7 d 时分别取玫瑰茎叶、花瓣和土壤，按照1.2.2 样品处理方法进行前处理，根据1.2.4 色谱检测条件进行检测，试验共重复3 次，结果如表2 所示。施用量为750 g a.i.·hm-2时，啶酰菌胺在玫瑰花瓣、茎叶和土壤中的残留量整体高于施用量为375 g a.i.·hm-2时的残留量。施药次数对啶酰菌胺在玫瑰花瓣、茎叶和土壤中的残留量无明显影响。《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》（GB 2763—2021）规定啶酰菌胺在黄瓜中的最大残留量（Maximum Residue Limit，MRL）为5 mg·kg-1，在苹果中的最大残留量为2 mg·kg-1，草莓和甜瓜等水果中的最大残留量为3 mg·kg-1[17-18]。本研究开展的试验中，在最后一次施用375 g a.i.·hm-2和750 g a.i.·hm-2剂量的啶酰菌胺水分散粒剂后3 d，玫瑰花瓣中啶酰菌胺残留量多大于水果的MRL；最后一次施药5 d后，啶酰菌胺残留量有所下降，但仍高于苹果的MRL；最后一次施药7 d 后，玫瑰花瓣中的农药残留低于水果中（除苹果外）啶酰菌胺的MRL。

表2 啶酰菌胺在食用玫瑰和土壤中的最终残留量（n=3）

3 结论

本文建立了食用玫瑰和土壤中啶酰菌胺残留量的气相色谱分析方法。该方法对啶酰菌胺的最低检出浓度为0.01 mg·kg-1，在0.01 ～5.00 mg·L-1线性关系良好，相关系数R2为0.999 5，方法的回收率和精密度符合农药残留分析要求。对田间试验的食用玫瑰花瓣、茎叶和土壤中啶酰菌胺残留量进行检测，最后一次施药7 d 后，玫瑰花瓣中的农药残留低于水果中（除苹果外）啶酰菌胺的MRL。本方法可应用于食用玫瑰和土壤中啶酰菌胺的残留量检测及后期消解动态研究。