超高效液相色谱-质谱法测定动物源性食品中23种磺胺类药物残留

傅雅丽

（黄石市食品药品检验检测中心，湖北黄石 435000）

磺胺类药物是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物[1]。磺胺类药物抗菌谱较广，被广泛地用于兽医临床和畜牧养殖业中动物疾病治疗。磺胺类残留能破坏人的造血系统，磺胺二甲嘧啶等甚至有潜在致癌性，人体中长期存在磺胺会导致许多细菌对磺胺药物产生抗药性[1]。因此，针对动物组织及牛奶中的磺胺类抗生素，欧盟规定其最大残留量为100 μg·kg-1[2]；日本规定食品中不得检出磺胺类药物[1]。我国国家标准GB 31650—2019 制订了在动物性食品中磺胺二甲嘧啶的限量为25 ～100 μg·kg-1，其他磺胺类抗生素残留总和为100 μg·kg-1[3]。

目前，GB/T 21316—2007 检测动物源性食品中磺胺药物残留的方法是采用微波提取法，使用不方便；GB 31658.17—2021 中只包含16 种磺胺药物残留的检测方法，范围比较局限。为了提高检测效率，本文建立了一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法同时检测动物源性食品中23 种磺胺药物残留含量的分析方法，该方法简单快速、灵敏度高。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

乙腈中23 种磺胺溶液标准物质（北京坛墨质检科技有限公司）；甲醇（质谱纯，默克公司）；甲酸（色谱纯，安谱科技）；乙腈（分析纯，国药集团）；实验室用水来自Milli-Q 超纯水系统。

1.2 仪器与设备

Waters Xevo TQD 三重四极杆液质联用仪（沃特斯公司）；超声仪（鼎泰恒胜）；离心机（Backman coulter）。

1.3 标准溶液的配制

精密量取0.100 mL 乙腈中23 种磺胺溶液标准物质（100 μg·mL-1），用乙腈定容至10 mL 容量瓶中，作为1 000 ng·mL-1的混合标准中间液。分别精密量取上述混合标准中间液0.05 mL、0.10 mL、 0.25 mL、0.50 mL、0.75 mL 和1.00 mL，用经提取和净化的空白试样基质定容至10 mL 容量瓶中，配制的系列标准工作溶液浓度为5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、25 ng·mL-1、50 ng·mL-1、75 ng·mL-1和100 ng·mL-1。

1.4 仪器条件

1.4.1 色谱条件

色谱柱：Waters Acquity UPLC BEH C18（2.1 mm ×50 mm，1.7 μm）；进样量：5μL；柱温：40 ℃；流动相：A为0.1%甲酸水溶液，B为甲醇；梯度洗脱：0～ 0.3 min 95%A；0.3 ～8.0 min 95%A ～50%A；8.0 ～ 9.0 min 50%A ～0%A；9.5 ～9.6 min 0%A ～95%A；9.6 ～13.0 min 95%A；流速：0.2 mL·min-1。

1.4.2 质谱条件

离子源：ESI；扫描方式：正离子扫描；毛细管电压：3.0 kV；源温度：150 ℃；脱溶剂温度： 450 ℃；锥孔气体流量：50 L·Hr-1；脱溶剂气体流量：1 000 L·Hr-1；检测方式：多反应监测扫描模式（MRM）。

1.5 样品处理

称取试料5 g（准确至0.01 g），加入0.1%甲酸乙腈10 mL，涡旋1 min，超声20 min，于4 ℃以下、10 000 r·min-1离心5 min，收集上清液。取上述上清液5 mL 过固相萃取柱（6 cc，Oasis PRiME HLB），收集洗脱液，45 ℃水浴氮气吹近干。加入0.1%甲醇-甲醇（95 ∶5）1 mL，涡旋溶解残余物，0.22 μm 微孔滤膜过滤，待测。23 种磺胺类化合物MRM 模式质谱优化参数及保留时间见表1。

表1 23 种磺胺类化合物MRM 模式质谱优化参数及保留时间

2 结果与分析

2.1 提取方法的选择

目前，国标中检测动物源性食品中磺胺药物残留的提取方法有微波提取法[4]、液-液萃取法[5]和QuEChERS 法[6]等，但操作步骤多。本次采用Oasis PRiME HLB 这种填料的SPE，能清除样品中99%的磷脂和脂肪，且无需活化，处理过程简单、方便、快速。

（续表1）

2.2 各物质线性范围及检出限

各目标物质在5 ～100 ng·mL-1，线性相关良好，相关系数均≥0.995 0，满足日常检测浓度的需求。以信噪比（S/N）为3 计算检出限，结果见表2。

表2 23 种磺胺类化合物的线性方程、相关系数及方法检出限

2.3 方法回收率及精密度

在空白猪肉中添加磺胺混合标准中间液，按1.5 法处理，进行添加回收率测定，添加水平分别为 2 μg·kg-1、20 μg·kg-1、32 μg·kg-1，每份样品分别测定6 次。由表3 可知，23 种磺胺类化合物的回收率在75.6%～101.5%，相对标准偏差在2.0%～11.8%。

表3 空白样品中添加23 种磺胺类化合物回收率、相对标准偏差（n=6）

（续表2）

3 结论

本文建立了同时检测动物源性食品中23 种磺胺类化合物残留量的超高效液相色谱-串联质谱方法，该方法快速、高效、准确，检出限和检测范围均满足《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》（GB 31650—2019）对23 种磺胺类化合物的要求，可满足日常检测，为监管部门提供了强有力的技术 支撑。