农产品中农药残留检测能力验证实施方案及关键控制点分析

时间：2024-05-14

王玮，刘宪丽

（邹城市检验检测中心，山东济宁 273500）

现以山东省农业农村厅组织开展的种植业领域能力验证活动为例，将实施方案及关键控制点分析如下。

1 材料与方法

1.1 考核样品

本次考核共发放A和B两组样品，每组样品均包括1份考核样和1份空白样，每份样品的质量约200 g。A组样品的基质为甘蓝，B组样品的基质为芹菜。样品发放采用邮寄的方式，收到快递立即检查样品状态，仍为冷冻匀浆状态[1]。

1.2 考核项目及检测方法

蔬菜中农药残留检测项目及检测方法见表1。

表1 蔬菜中农药残留检测项目及检测方法

1.3 检测仪器设备

根据给定的考核项目及检测方法确定每个项目所用仪器及检测方法，有无检测资质，依托检测方法以气相色谱仪、液相色谱仪定量为主，气相色谱-三重四极杆质谱联用仪、液相色谱质谱联用仪定性为辅，多个仪器比对来定量为原则，综合考量，确定上报结果，检测项目所用的比对仪器见表2。仪器型号为安捷伦8890A-7000D气相色谱-三重四极杆质谱联用仪、液相色谱质谱联用仪、WATERS液相色谱仪和安捷伦7890A气相色谱仪。

表2 蔬菜中农药残留检测项目所用的比对仪器

2 考核前的准备工作

2.1 购买有证标准物质

按给定的农药残留检测项目购买农业农村部定制的有证标准物质。

2.2 确定前处理方法

前处理方法按照《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法》（NY/T 761—2008）进行处理。

2.3 前处理用品准备

申请新的未拆封甲醇、正己烷、丙酮和氯化钠（可140 ℃烘4 h）；玻璃器皿如样品分装瓶、具塞量筒（做好检漏测试）、漏斗、称量勺、移液管、10 mL玻璃离心管清洗干净备用（最后用三级水清洗）；移液管助吸器充满电备用；标液配制专用针校准清洗备用；检查均质机和氮吹仪，清洗干净刀头和氮吹针，洗刀头的杯子4个，清洗顺序为超纯水→乙腈→丙酮→超纯水[2]。

2.4 仪器维护

GC及GC-MS的维护：①检查仪器设备所用气源压力是否正常，所使用载气、助燃气能够满足检测需要，检查气体管路是否有漏气；②更换进样口的衬管、隔垫、O型圈；③更换进样针，保证洗针溶剂与进样溶剂相匹配，洗针瓶和废液瓶清洗干净备用；④检查色谱柱两端是否需要截取，柱子是否需要老化；⑤检查分流平板是否需要清洗或更换；⑥检查气质离子源和灯丝并进行调谐。

HPLC的维护：清洗系统，拆卸色谱柱，按水∶乙腈∶甲醇∶异丙醇=1∶1∶1∶1的比例输送液体，清洗后，用水∶甲醇=1∶1的比例充分清洗。

LC/MS/MS的维护：检查离子化、喷雾是否正常、清洗离子源、检查碰撞器、氮气发生器、做质量调谐。

2.5 准备空白基质

准备空白基质（不含农药残留且与考核样品同类型的空白样品）供后期模拟实验及添加回收实验使用（添加回收实验可在添加后冷冻过夜后再做）。

2.6 配制标准溶液

配制高浓度（10 mg·L-1）的农药混合标准储备溶液，作为加标溶液使用（上机前继续稀释成1.0 mg·L-1的混合溶液作为配制标准使用溶液用，标准使用溶液要使用基质配制）。配标原则是逐级稀释。

2.7 建立仪器检测方法

优化检测方法，使被检测的化合物在色谱柱上尽可能分开，气相色谱仪、气相色谱-三重四极杆质谱联用仪上新换的衬管要反复进标准溶液，使称管稳定饱和后再测定样品。

2.8 模拟能力验证

进行能力验证的模拟实验，提前熟悉实验过程，发现问题及时解决。

3 样品前处理过程

3.1 上机标液的配制

两人合作进行，一人配标一人辅助洗针。

3.2 样品分装

样品有1个考核样，1个空白样，每盒约200 g。样品到达实验室后应避光、室温解冻，然后由2～3人将样品分装到50 mL具塞广口瓶中，每个瓶中称25.0 g，瓶上做好标记并记录好质量。称样时用勺子搅拌均匀后再称，样品不要沾到具塞广口瓶壁上。

3.3 样品提取

样品要在刚刚解冻的状态下进行提取，前处理方法采用NY/T 761—2008的方法。

（1）第一次实验：初筛。每组做3个空白、4个样品，其中一个空白做空白样品CK，另两个空白样品用于配基质标，再做3个预先准备的空白基质来做加标回收验证，两组共计20个样品。25 g样品加入50 mL乙腈（容量瓶量取），均质2 min，然后过滤到加有10～14 g氯化钠的具塞量筒中（多放氯化钠保证盐析效果，过滤时保证滤液尽可能多，足够使用），剧烈振摇2 min，避光静置30 min（静置时提前调节好氮吹仪，温度设到40 ℃）。吸取静置好的乙腈溶液1 mL到10 mL容量瓶，用甲醇-水溶液（1∶9）定容后进小瓶上液相色谱质谱联用仪测定，然后用移液管再吸取30 mL乙腈溶液到3个玻璃离心管中，每个离心管10 mL，分别用于氮吹复溶后上气相色谱仪的FPD检测器、ECD检测器和液相色谱仪的紫外检测器测定，吸取上层液时要避免吸到下层液体，氮吹时气流不要过大，后期要勤观察，固定1～2人看氮吹，保证不吹干，大约剩半滴，微微湿润；上气相ECD的样品用针吸取正己烷2 mL复溶，上气相FPD和气质质的共用一个样品，用针吸4 mL丙酮复溶，上液相的样品用针吸2.5 mL乙腈-水溶液（1∶9）复溶，进小瓶后准备上机测定；序列编辑顺序为试剂空白（丙酮、正己烷或甲醇）→样品空白（CK）→白标→基质标→样品溶液→加标回收→白标→基质标→样品溶液→加标回收[3]。

（2）第二次实验。经过初筛确定了所加农药的种类，每组做了5个空白，4个样品。其中，2个空白用于基质配标，3个空白用于加标回收，两组共计18个样品。根据第一次的定量结果，加标样的浓度应与样品浓度接近，配标浓度也应和样品浓度接近[4]。

4 关键控制点

①整个能力验证实验包括前处理过程和仪器分析过程。前处理实验过程中要保证操作过程准确，避免发生对结果造成重大误差的不规范操作，要求操作人员细心、准确和操作平稳；而仪器分析过程则要求检测项目在仪器上有很好的分离度和响应。②进行前处理时，多放氯化钠保证盐析效果，均质均匀，过滤时保证滤液尽可能多，足够使用，振摇要剧烈充分，静置时间要足够，吸取上层液时要避免吸到下层液体，氮吹后期要勤观察，保证不吹干，大约半滴微微湿润[5]。③多次能力验证结果均发现第一次结果定量最为准确，可以第一次实验时尽量多处理几个样品，避免后续样品由于冷冻时间过久和反复解冻造成农药降解，使定量结果偏小。④液质上农药残留可先配不加基质的大混标对待测样快速定性和初步定量，再根据目标物浓度准确配制与之浓度接近的基质标来单点校正，这样可以节省很多配标时间。为提高回收率，最后一步进样品瓶前可不过滤膜。⑤气质质上农药残留定量必须用基质标，可降低基质效应，且峰形较好。