水产品中硝基呋喃代谢物液相色谱串联质谱测定方法

□ 侯冰 林威 宋文 宋之光 金枫清 丹东市检验检测认证中心

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

提取液、快速衍生试剂：广州润坤生物科技有限公司；AOZ：100μg/mL，农业部环境保护科研监测所；AHD、SEM：纯度≥99.0%，Dr.Ehrenstorfer；AMOZ、D4-AOZ、D5-AMOZ、13C3-AHD、13C-15NSEM：纯度≥98.0%，WITEGA。

XEVO TQD液相色谱-串联质谱仪：美国Waters公司；ME2002电子天平：瑞士梅特勒-托利多公司。

1.2 试验方法

1.2.1 样品的前处理

1.2.1.1 水解和衍生化

称取试样2g（精确至0.01g），加入混合内标溶液100μL，加入1mL水震荡3min，加入1mL提取液，震荡混合1min，在4000r/min下离心5min。倒出上清液，加入100μL快速衍生试剂，置于55～60℃的恒温水浴锅中衍生60min。

1.2.1.2 提取和净化

取出水解和衍生化样液冷却至室温，加入5mL 0.1mol/L的磷酸氢二钾，并用1mol/L的氢氧化钠溶液调pH至7.4，混匀。用8000r/min离心10min，以小于2mL/min的流速过PEP-2小柱(规格为60mg/3mL，用5mL甲醇、5mL水活化)，并用10mL的水洗涤固相萃取小柱，负压抽干柱子15min。用5mL乙酸乙酯洗脱，60℃下氮气吹干。用流动相定容至1mL，上机分析。

表1 4种硝基呋喃类代谢物的标准曲线

1.2.2 仪器条件

1.2.2.1 色谱条件

色谱柱：C18色谱柱（2.1×50mm，1.7μm）；流动相：A为0.1%甲酸的水溶液，B为乙腈；流速：0.45mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL；梯度洗脱程序：0～ 0.2min，A为 90%，B为 10%；0.2～ 3min，A为 10%，B为 90%；3～5min，A为10%，B为90%；5～7min，A为90%，B为10%。

1.2.2.2 质谱条件

毛细管电压：2.6kV；离子源温度：150℃；去溶剂温度：350℃；离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子模式，多反应监测模式（MRM）。

2 结果与讨论

2.1 标准工作曲线

配制适当浓度的硝基呋喃代谢物标准混合溶液，除不加样品外，余下操作同样品前处理步骤。结果显示，各曲线线性关系良好（相关性系数＞0.99）。以该4种物质在仪器上的信噪比S/N=3作为方法检出限，4种硝基呋喃类代谢物的标准曲线见表1。

2.2 回收率试验和精密度试验

取阴性三文鱼样本进行加标试验，加标量为0.5μg/kg，平行测试3个样本（n=3）,回收率试验和精密度试验结果见表2。结果表明，本方法准确度较高，4种硝基呋喃类代谢物的加标回收率在90%～105%之间，重复性较好（RSD＜5%）。

3 研究结论

表2 回收率试验和精密度试验结果（n=3）

水产品用提取液提取，快速衍生化试剂衍生，经固相萃取小柱净化后，分析物采用液相色谱—串联质谱仪测定，内标法定量。4种硝基呋喃代谢物工作曲线线性关系良好（R2＞0.99）；方法的检出限均为0.5μg/kg；方法测定准确度较高，加标回收率在90%～105%之间,重复性较好（RSD＜5%）。