气相色谱串联质谱法测定果蔬中赤霉素

时间：2024-05-14

□赵海玲邱宏萌雷琼朱丰秀江西省赣州市疾病预防控制中心

赤霉素，是一种广谱性的植物生长调节剂，被广泛应用于植物生长和发育的各个阶段。赤霉素虽属于低毒的植物生长调节剂，但大量使用时会产生一定的毒性。美国、欧盟和日本等国家规定水果和蔬菜中赤霉素最高残留限量为0.2mg/kg[1]。

目前，检测赤霉素方法有高效液相色谱法[2-3]、气相色谱法[4]、气相色谱串联质谱法[5]、液相色谱串联质谱法[6]、液相色谱-质谱/质谱法。赤霉素是内源性激素之一，在植物中含量很少。质谱检测灵敏度高，重复性好，尤其适合痕量植物样品的检测。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

2010SE气相色谱质谱联用仪，日本岛津公司；HC-3018R高速冷冻离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司；PB303-S电子天平，梅特勒-托利多公司；vorter-genie2涡旋混匀器，美国SI公司；匀浆机；超声波清洗器；氮吹仪。

MCS固相萃取柱，500mg/6mL；HLB固相萃取柱，200mg/6mL。

甲酸（分析纯），氯化钠（分析纯），盐酸（优级纯），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯）。

标准物质：赤霉素购自Dr.EhrenstorferGmbH（Germany）。

1.2 样品处理

1.2.1 提取

称取5.00g试样于50mL离心管中，加入20μL甲酸和20mL乙腈，匀浆1min，10000r/min冷冻离心5min，移取上清液至新的50mL离心管中，加入3g氯化钠（饱和有结晶），涡旋混匀2min，10000r/min冷冻离心2min，吸出5mL乙腈相于15mL离心管中，40℃氮气吹干，加入0.2mL甲醇涡旋溶解，再加入3mL40mmol/L的盐酸溶液混匀，10000r/min冷冻离心5min，上清液待净化。

1.2.2 净化

用5mL甲醇、5mL水、5mL40mmol/L的盐酸溶液活化MCS柱，将上清液转移至MCS柱内，待样品过柱后，用5mL水淋洗除杂质，真空抽干5min，加入3mL甲醇洗脱收集于15mL离心管中，抽干得洗脱液，40℃氮气吹干，加入1.0mL甲醇超声溶解残留物，待GCMS测定。

1.3 色谱质谱条件

气相色谱质谱仪条件：Rts-5ms毛细管色谱柱，30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度，230℃；柱温，初温100℃，以15℃/min升至280℃保持2min；载气，氦气，纯度≥99.999%，流速1mL/min；电离模式，电子轰击源（EI），电子能量70eV；离子源温度，200℃；传输线温度，280℃；溶剂延迟，4min；进样方式，不分流进样；进样量，1μL；检测方式，选择离子扫描（SIM）采集，选择离子m/z为 121、136、284、328、346。

2 结果与分析

2.1 提取液的选择

本方法选取了乙腈和80%甲醇-水溶液提取，回收率分别为91.5%和85.2%。考虑到固相萃取柱净化，甲醇提取液容易堵柱，而乙腈干扰物质少，所以选用乙腈作为提取液，提取过程中加入氯化钠进行盐析，有利于分析物提取。

2.2 净化条件的选择

2.2.1 净化方式

本方法选用MCS固相萃取柱和HLB固相萃取柱净化，回收率分别为91.2%和87.5%。两种萃取柱的损失都比较少，基于MCS萃取柱去除杂质的效果更好，所以选用MCS固相萃取柱净化。

2.2.2 洗脱液

分别用3mL100%甲醇、80%甲醇-水溶液、50%甲醇-水溶液洗脱，回收率均能达90%以上，100%甲醇洗脱，氮吹干，效率高，所以选用100%甲醇作为洗脱液。

2.3 方法评价

2.3.1 方法的线性范围和检出限

空白基质样品经1.2样品前处理后，配制 0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL赤霉素标准溶液，其相关系数为0.996，线性范围在0.1～10μg/mL，方法检出限为0.1μg/mL（S/N=3）。

2.3.2 方法的回收率和精密度

选取3种果蔬样品黄瓜、苹果、葡萄添加高、中、低3个浓度的赤霉素标准溶液，进行回收率和精密度实验，结果见表1。

2.4 实际样本检测

2016年采集了赣州市市售水果样品75份，检测6种植物生长调节剂残留量（4-氯苯氧乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、多效唑、赤霉素、噻苯隆、氯吡脲），9份样品检出，其中2份检出4-氯苯氧乙酸，5份检出2,4-二氯苯氧乙酸，3份检出多效唑，5份检出氯吡脲，未检出赤霉素和噻苯隆。检测结果与2015年吉林省市售水果中植物生长调节剂残留量监测结果接近。

表1 3种蔬菜水果中赤霉素回收率和精密度（n=6）