快速测试板在饮用水微生物检测中的应用

□ 汪 新 浙江方圆检测集团股份有限公司

微生物快速检测技术在应用中主要划分为两种。其一就是在传统微生物检测中，改良培养方式及鉴定手段，简化样品的处理，包括微生物快速测试板及试剂盒等多种方法。其二就是借助生物工程、遗传学及荧光法等诸多高科技，能够直接对微生物细胞及代谢物特异化进行微生物检测，如PCA以及ATP荧光法等。这两类方法，第一种方法能够有效简化操作步骤，在一定程度上有效提升了检测的整体特异度及敏感度，在一定程度上缩短了检测时间，增加了一定的检测成本。第二种方法的优点就是无须培养或只需较短的培养时间，具体的检测时间缩短，配置部分精密仪器及具备一定经验的检测人员。

1 微生物检测在水质检测方面的现状

我国的《生活饮用水卫生标准》中所规定的常规微生物指标，包括总大肠菌群、菌落总数以及大肠埃希氏菌。在开展饮用水的微生物检测过程中，应当确保生物检测处于无菌环境下，在完成对检测实验室的常规消毒步骤之后，需要重视培养基的配置，完成多种药剂混合后的消毒处理。在快速微生物检测过程中，根据水质的检测情况，采用快速测试板检测具有经济实用、快速优势，适合运用于水质检测中。

2 快速测试板的检测原理及操作方法

2.1 快速测试板的检测原理

微生物快速测试板是一种事先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基及吸水凝胶。培养基有效结合了酶及底物反应的特异性和菌落颜色的可视化信息，可以在自然环境中检测和鉴定不同的微生物个体，还可以对混合生长的多种微生物进行检测。此种显色培养基是一类利用微生物自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色的原理来检测微生物的新型培养基。这些相应的显色底物由产色基因和微生物部分可代谢物质组成，在特异性酶作用下，游离出产色基因显示一定颜色，直接观察菌落颜色即可鉴定菌种。此种新型分离性培养基，具备较高的反应灵敏度及特异性。

2.2 快速测试板的操作步骤

采取快速检测板检测方法，有效减去了水样的处理、实验室及使用设备的消毒以及培养基制备等较为烦琐的步骤。在完成水样采集之后，在无菌条件下，在实验面上放置微生物测试板，揭开上层膜，采用消过毒的吸管，抽取1 mL的饮用水水样，将其缓慢静滴至纸片上，缓慢覆盖上层膜，在静置10 s之后培养基凝固。将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内。依照相应的微生物检测项目具体需求，按照既定的时间及培养温度加以培养。最后能够鉴定具体的菌落颜色及特点。

3 微生物快速测试板实际运用

将快速测试板测试方法运用于某公司的水质检测工作中，针对400份水样完成了四种菌体的分批检测，并且针对5%的水样，完成了精密度试验及对比传统检测方法试验。

依照《生活饮用水标准检验方法》GB/T5750.12-2006，借助平皿计数法完成菌落总数检测，将水样置于37 ℃营养琼脂的有氧条件下共计48 h，得出1 mL水样中所存在的菌落总数，能够直接用眼睛观察。菌落的总数测试板应用原理，与国际标准测试方法一致。取出1 mL的水样，实验前将营养琼脂培养基涂抹于测试板之上，后添加脱氢酶指示剂TTC，菌落在测试片上呈现红色，从而有效缩短计数时间，同时，还能够提升计数效果。

3.1 总大肠菌群检测

总大肠菌群主要指的是在一群在37 ℃培养24 h后，能发酵乳糖并产酸产气的革兰阴性无芽孢杆菌。依照生活饮用水的检测指标方法，针对总大肠菌群的具体监测方法包括：滤膜法、多管发酵法以及酵底物法。

3.2 耐热大肠菌群检测

通过提升该菌群的培养温度，从而有效区分处于自然温度环境下的大肠菌群，以及粪便中的大肠菌群。耐热大肠菌群即在44.5 ℃温度下，仍然存活的大肠菌群。生活饮用水的具体检测方法中，针对耐热大肠菌群的检测方法，主要包括两种：滤膜法及多管发酵法。

3.3 大肠埃希氏菌检测

该种菌体通常也被称为大肠杆菌，能够在人体内产生病原体生成病原性，极易导致婴幼儿及牲畜腹泻。因此，应当更进一步检测大肠杆菌及耐热大肠菌群。

4 结语

水资源逐步匮乏的情况下，饮用水微生物检测工作开展尤为重要。快速测试板运用于饮用水微生物检测中更好克服了培养基批次不同、配制条件不同及操作人员不同等问题，且整体检测操作也较为简单，方便携带，方便取样，同时，还省时省力，加快了饮用水微生物的检测速率，提升了检测准确性。