茶叶中草酸含量的测定

□ 许 瑶 安徽省食品药品检验研究院

茶叶中草酸含量的测定

□ 许 瑶 安徽省食品药品检验研究院

采用反相高效液相色谱法检测铁观音中草酸的含量。结果表明：采用C18色谱柱，在流动相为甲醇：0.02%（NH4）2HPO4溶液=5:95，检测波长为197 nm，柱温25 ℃，进样量20 µL，流速0.8 mL/min的色谱条件下，检测铁观音中草酸含量为0.27%。通过重复性试验、稳定性试验和加样回收实验来验证结果的稳定性和可靠性。本实验峰面积和浓度之间有良好的线性关系，R2=0.999 6。回收率范围为，RSD=1.09%～1.87%。

茶叶；草酸；反相高效液相色谱

草酸以草酸盐的形式普遍存在于大多数的植物中，其中在蔬菜、水果和饮品中含量很高，而它其实也是一种致命的危险的化学物质[1]。人若口服草酸即发生胃肠道炎、虚脱、抽搐和休克等症状以至死亡。吸入草酸蒸汽者会发生慢性中毒，而且草酸还会与人体内的Ca2+形成结石，对人身体造成伤害。草酸存在于很多食品中，其中茶叶中就含有较多的草酸[2]。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

草酸标准品、超纯水、磷酸氢二铵、铁观音、甲醇、高效液相色谱仪。

1.2 色谱条件

本实验采用高效液相色谱仪带紫外检测器，色谱柱为C18色谱柱，流动相为甲醇：0.02%的（NH4）2HPO4=5:95，检测波长为197 nm，柱温25 ℃，进样量 20 µL，流速 0.8 mL/min。

1.3 样品制备

1.3.1 标准品溶液的制备

精密称取草酸标准品25.00 mg，置于25 mL的容量瓶中，加入超纯水定容，摇匀使其充分溶解，逐级稀释后得0、20、100、200L、300、400、500 µg/mL的标准溶液。

1.3.2 供试品溶液的制备

精密称取待测茶叶1.000 0 g，分别加入50 mL沸水，浸泡20 min后倒出上层溶液，离心取上清液，过25 µm的微孔滤膜后，用HPLC分析。

1.4 草酸含量的测定

按照1.2所提供的色谱条件，来测定茶叶样品中草酸的峰面积。利用回归方程计算草酸浓度。草酸含量=（草酸浓度×提取液体积）/茶叶样品质量×100%

表1 回收率试验数据记录及处理

2 结果与讨论

2.1 检测波长的确定

通过实验，用紫外可见分光光度计对100 µg/mL的草酸溶液进行扫描，表明，在197 nm处有最大吸收峰，所以确定HPLC的检测波长为197 nm。

2.2 样品浸泡时间的确定

用沸水浸泡好茶叶后，分别在10、20、30、40、50、60 min的 时 间点处取出上清液，用高效液相色谱检测峰面积，依次为711.13、1000.75、1125.25、1027.38、1025.74、1021.36 mv.sec。从节约时间方面考虑，确定30 min为最佳浸泡时间。

2.3 线性关系的考察

用高效液相色谱仪测定草酸标准溶液峰面积。以浓度（µg/mL）为横坐标，峰面积（mv.sec）为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，在0～500 µg/mL的范围内，草酸标准品的浓度与峰面积有良好的线性关系，即Y=33.405X+749.32，R2=0.999 6。

2.4 精密度试验

准确吸取300 µg/mL的草酸标准品溶液20 µL，重复进样6次，所得峰面积数据表明，相对标准偏差为1.2%，小于2.0%，说明仪器的精密度良好。

2.5 稳定性试验

按照1.3.2所示方法配置供试品溶液，分别在0、1、2、4、8、12 h后注入高效液相色谱仪中，所测结果数据基本一致，RSD=1.2%。说明供试品溶液在12 h内基本稳定。2.6 样品含量的测定

将茶叶样品按照1.3.2所示方法来测定草酸的含量。通过标准曲线计算，草酸含量为0.27%。

2.7 回收率实验

取同一已知含量的铁观音茶叶供试品溶液5份，分别加入一定量的草酸标准品。在同一色谱条件下测定草酸峰面积，若草酸的平均回收率在95%～105%，则认定检测方法可靠。回收率试验数据记录及处理，见表1。

草酸回收率=（加入草酸标准品后的含量-未加草酸标品的含量）/加入草酸的含量×100%

3 结论

采用反相高效液相色谱法对铁观音中的草酸进行含量分析，结果表明，铁观音茶叶中草酸含量为0.27%。通过精密度试验、稳定性试验和加样回收试验来验证了检测方法的准确性。结果表明：该方法精确、简便，为草酸在茶叶中的含量的测定提供参考。参考文献

[1]张贵生.茶叶标准研究进展[J].茶叶通讯,2009(4):32-37.

[2]裴亭.高效液相色谱法测定茶叶中烟酸的含量[J].茶叶科学,2011(2):124-128.