马铃薯淀粉中磷酸寡糖检测方法

时间：2024-05-14

□ 佟丽娜徐明亮高金波北大荒黑土薯业有限公司

马铃薯淀粉中磷酸寡糖检测方法

□ 佟丽娜徐明亮高金波北大荒黑土薯业有限公司

磷酸寡糖属于新型功能性低聚糖类，除了具备低聚糖的基本特点外，还具有其他功能，比如促进钙铁等矿物质吸收的主要功能。本次分析马铃薯淀粉中磷酸寡糖的检测方法和结果，并对结果展开相应分析，旨在为今后实际生产应用奠定基础。

马铃薯；淀粉；磷酸寡糖；检测

磷酸寡糖即属于功能性低聚糖，具有促进双歧杆菌增值，使人和动物的肠道环境改善的效果，另外还具备抑制体内毒素、使集体免疫特性增强，抗肿瘤的特点[1]。磷酸寡糖属于新兴起的一种低聚糖类，具备低热量、地腐蚀性等特点，常用于日用化工、保健食品和淀粉食品加工业等方面，应用市场相对比较广泛[2]。

1 材料和主要设备

实验材料：磷酸寡糖（从马铃薯淀粉中分离提取）；碱性磷酸酯（生物科技公司）；芽低聚糖标准品（Sigma公司）。

实验设备：分光光度计、微量进样器。

2 具体检测方法

2.1 处理磷酸寡糖的方法

选择一定数量的磷酸寡糖，加水定容至一定体积，选择2 mL磷酸寡糖溶液，分别添加碱性磷酸酯酶溶液（10μL 400 μm/ml），pH值为9.4左右的碳酸盐缓冲溶液（20 mL），将溶液混合后放置在37 ℃的水浴锅中保温，之后取出，再向其中添加3滴苯酚溶液，使酶失活，用水定容，容积为50 mL。

2.2 磷酸寡糖的鉴别方法

（1）薄层色谱法检测方法。选择一定数量的硅胶，添加水，硅胶和水的比例控制在1∶2.5左右，再使用玻璃棒进行搅拌，等到硅胶浆液均匀分散之后，确保溶液的黏稠度处于适中状态，再将浆液均匀的涂抹在玻璃板上，玻璃板的面积为（10 cm×15 cm），室温环境下晾干。使用之前需要在110℃的环境下活化1 h，在使用微量点样器点样，然后取出薄层板，将其放在盛有展开剂的层析缸中，再展开。

（2）碱性磷酸酯酶检测法。使用DNS法测定吸光度值，选择的溶液分别为1、2、3 mL，测定次数为3次，然后选取平均值，检测磷酸寡糖的含量。

3 结果

3.1 展开剂选择比较结果

本次研究中所选择的展开剂类型比较多样，但主要比较两种类型的展开剂分离效果，类型1：水+乙醇+正丁醇；类型2：吡啶+乙酸乙酯+水。实验结果显示，类型1展开剂可以对麦芽糖一直到麦芽七糖等能够实现分离，分离斑点清晰，总体效果较好。类型2展开剂无法将各糖组进一步分离，而且整个显色为蓝色带状，分离效果整体较差。

3.2 显色剂的比较结果

本次研究中显色剂分别选择了3种.类型1：磷酸+二苯胺+苯胺；类型2：浓度20%硫酸的乙醇溶液；类型3：氨水+氢氧化钾+硝酸银。三种类型显色剂的显色结果比较见表1。

表1 三种类型显色剂显色效果比较

3.3 马铃薯淀粉中磷酸寡糖检测结果

本次研究中分别使用显色剂和展开剂检测磷酸寡糖，最终的检测结果显示，马铃薯淀粉中的磷酸寡糖包含以下几种糖类，分别是麦芽三糖、麦芽七糖、麦芽糖和葡萄糖等，其中麦芽三糖到麦芽六糖斑点面积较大，颜色较深，说明在马铃薯淀粉中的磷酸寡糖中，麦芽三糖至六糖为最主要的成分。

3.4 马铃薯淀粉中磷酸寡糖回收率检测结果

碱性磷酸酯酶能够在特定的条件下水解磷酸寡糖中的磷脂键，并且游离出糖，条件相对温和，并不会产生破坏作用。本次研究显示践行磷酸酯酶法测定马铃薯淀粉中的磷酸寡糖，样品的回收率可达到8.7%左右，误差相对较小，这说明此种方式的准确性比较高。

4 讨论

我国属于典型的马铃薯生产大国，每年马铃薯的种植面积大约为500万公顷，产量位于世界之首，马铃薯主要种植区域分布在西南、华北、东北和西北等地区，但是受到加工水平的影响，加工转化率水平比较低，甚至达不到5%，但是在发达国家的转化率却已经达到了80%左右，所以必须积极研发相关的生产工艺，拓宽农民的收入途径[3]。本次主要分析马铃薯淀粉中磷酸寡糖检测方法，可得出以下结论：①展开剂选择类型1，显色剂选择类型1，点样原点直径小于2mm，点样量浓度为2 μg/μL时，可以将磷酸寡糖中麦芽糖中进一步的细分，分为麦芽一糖至七糖，最终的分离效果整体较好，斑点为圆形、清晰。因此最佳点样量浓度为2 μg/μL。②麦芽三糖至六糖为马铃薯淀粉中磷酸寡糖的主要成分。