食品中微生物检测能力验证结果

□ 谢静玲 靖边县食品检验检测中心

1 材料方法

1.1 检测样品

检测对象是3个冷冻干燥样品，分别是PTA菌落总数、沙门氏菌PTB—1，沙门氏菌PTB—2[1]。分别在样品中加入10 mL生理盐水，混合均匀即为待测原液。培养基包括平板计数琼脂（PCA）、沙门氏菌显色培养基等；细菌微量鉴定管包括赖氨酸生化管、氰化钾对照管、蛋白胨水等；肠炎沙门氏菌阳性标准菌株，由中国工业微生物菌种保管中心提供；革兰氏阴性菌鉴定卡，来源于法国梅里埃公司；沙门氏菌诊断血清，来源于天润药物公司。

1.2 仪器设备

检测仪器包括生物安全柜、细菌鉴定仪、生化培养箱、全自动微生物鉴定/药敏分析系统等。

1.3 PTA菌落数计数方法

在PTA菌落总数原液中，取1 mL菌液加入9 mL生理盐水，均匀混合制成1×10—1稀释液；经梯度稀释制成1×10～1×10—67个稀释样品。使用无菌吸管，从每个稀释液中取出1 mL，置于无菌平皿中，并吸取1 mL空白稀释液作为对照。每个平皿倾注15～20 mL的PCA，冷却处理后，在凝固琼脂表面覆盖一层薄PCA，防止弥漫菌落生长。琼脂凝固后，翻转平板，在36 ℃条件下培养48 h，取出后计数。

1.4 沙门氏菌鉴定方法

按照指导书将10 mL样品原液转到225 mL的BPM增菌液上，并进行阳性对照，在36 ℃条件下培养18 h。取1 mL前增菌培养物，在10 mLTTB内进行转种，在42 ℃条件下培养18 h；另取1 mL前增菌培养物在10 mL SC内进行转种，在36 ℃条件下培养18 h。分离时，使用接种环取TTB、SC增菌液各一环，接种在BS、HE琼脂、XLD琼脂以及沙门氏菌显色培养基上，在36 ℃条件下培养18 h。

2 结果分析

2.1 PTA菌落数

选择菌落数在350～700 CFU/mL的10—1稀释度平板4个，计算平均值作为菌落总数，结果显示为580 CFU/mL。检测操作时，使用的平板计数琼脂来源于2个厂家，每个稀释度做4个平板，可在菌体浓度未知时，防止漏检现象，保证检测结果的准确性[2]。取4个培养基的平均值，即580 CFU/mL，得到比分值（Z）为0.8，满足|Z|≤2的要求，是满意的结果。

2.2 沙门氏菌

2.2.1 培养结果

PTB—1在HE上培养出粉红色菌落，在BS平板上培养出灰黑色菌落，在XLD平板上培养出黄白色菌落。PTB—2在BS平板上培养出黑色菌落，在HE平板上培养出黑色菌落，在XLD平板上培养出黑色菌落。

2.2.2 生化试验

按照国家标准“食品微生物检验—沙门氏菌检验”，开展生化试验，分离菌株的结果见表1，其中阳性为“+”，阴性为“—”。分析可知，PTB—1初步鉴定为非沙门氏菌，PTB—2、阳性对照组初步鉴定为沙门氏菌属。

2.2.3 生化鉴定

在沙门氏菌显色培养基上，挑选至少3个典型的可疑菌落，接种TSI、NA，在36 ℃条件下培养18 h，利用全自动微生物生化鉴定/药敏分析系统进行鉴定。取 PTB—1、PTB—2、阳性对照菌株，接种在TSA平板上，在37 ℃条件下培养18 h，使用生理盐水制成菌悬液，测定菌液浓度，并进行系统鉴定。结果显示，全自动细菌鉴定仪的报告中，PTB—2是沙门氏菌书的可能性为97%，鉴定等级是相当好；PTB—1是肠杆菌，可能性为99%，鉴定等级是相当好；阳性标准菌株是沙门氏菌属，可能性为98%，鉴定等级是相当好。

表1 沙门氏均属生化反应初步鉴定表

2.2.4 血清学鉴定

取少量纯培养被检菌苔，使用沙门氏菌诊断血清进行鉴定，开展玻片凝集试验，结果显示完全符合。

2.2.5 鉴定报告

综合生化鉴定、血清学鉴定结果，得出结论：样品PTB—1沙门氏菌，未检出；样品PTB—2沙门氏菌，检出。本次检测结果和CNAS指定值是满意的结果。

3 结语

本次检测能力验证中，采用多种检验方法，例如多平行样本、多稀释度样品，保证了检验结果的准确性。检测中心的结果，均和CNAS指定值符合，检验中的经验总结如下：①PTA菌落数检验中，使用不同厂家生产的PCA，且稀释度样品要均匀混合；平板计数琼脂凝固后，再覆盖一层薄琼脂，能避免菌落蔓延；②沙门氏菌属检验中，要注意观察不同平板上的菌落特征，避免漏检；③同时使用显色培养基、全自动卫生区生化鉴定/药敏分析系统，能进一步提高检验结果的准确性。通过本次验证，可增强实验室的检验能力和竞争力，不断提升检验技术水平。