电针不同刺激量对急性期面神经损伤兔细胞因子信号转导抑制因子1、3蛋白表达的影响

李小娟　严兴科　曹朝霞

摘要：目的 观察电针对急性期面神经损伤兔细胞因子信号转导抑制因子（SOCS）1、SOCS3蛋白表达的影响，确定其较佳刺激量。方法 将新西兰兔面神經用特制止血钳压榨5 min，损伤长度约2.5 cm，制作面神经损伤模型。实验分为空白组、假手术组、模型组和电针弱、中、强刺激组。电针各组术后1 d予不同刺激量治疗，连续7 d，模型组术后不予任何干预。治疗结束后截取各组受损面神经，采用ABC-ELISA检测介导JAK-STAT负反馈调节SOCS1、SOCS3的蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组兔SOCS1、SOCS3蛋白表达增加（P<0.01）；与模型组比较，电针弱刺激组SOCS1、SOCS3蛋白表达降低（P<0.01）。结论 面神经损伤急性期电针弱刺激可使SOCS1、SOCS3蛋白表达趋于正常，电针治疗效应不随刺激量的增强而增加。

关键词：电针；电刺激量；面神经损伤；细胞因子信号转导抑制因子1；细胞因子信号转导抑制因子3；兔

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.06.016

中图分类号：R245 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2018）06-0066-03

Effects of Different Stimulation of Electroacupuncture on Protein Expressions of

SOCS1 and SOCS3 in Rabbits with Acute Facial Nerve Injury

LI Xiao-juan， YAN Xing-ke， CAO Zhao-xia， WEI Yu-ting， ZHAO Zhong-ting

Gansu University of Chinese Medicine， Lanzhou 730000， China

Abstract： Objective To investigate the effects of different stimulation of electroacupuncture on the protein expressions of SOCS1 and SOCS3 in rabbits with acute facial nerve injury； To determine the better stimulation. Methods New Zealand rabbits were treated with special hemostatic forceps for 5 min， and the length of the lesion was about 2.5 cm. The model of facial nerve injury was induced. The experiment was divided into blank group， sham-operation group， model group， and electoracupuncture weak-， medium-， and strong-stimulation group. The model group received no intervention after surgery. After treatment， the damaged facial nerve of each group was intercepted. The protein expressions of SOCS1 and SOCS3 mediated by negative feedback regulation of JAK-STAT were detected by ABC-ELISA. Results Compared with the blank group， the protein expressions of SOCS1 and SOCS3 in the model group increased （P<0.01）. Compared with the model group， the protein expressions of SOCS1 and SOCS3 protein in electroacupuncture weak- stimulation group decreased （P<0.01）. Conclusion Electroacupuncture can make SOCS1， SOCS3 protein expressions normal for acute facial nerve injury， and acupuncture treatment effect does not increase with the increase of stimulation.

Keywords： electroacupuncture； electrical stimulation； facial nerve injury； SOCS1； SOCS3； rabbits

面神经损伤影响患者的表情运动等生理功能，且影响患者身心健康及生活质量。临床上电针治疗本病疗效较好[1-3]。相关机制研究已深入开展，其中细胞因子信号转导抑制因子（SOCS）家族是JAK-STAT通路最重要的抑制信号因子[4]。有研究发现，SOCS1、SOCS3蛋白与面神经修复密切相关[5-7]。本实验以压榨性损伤模型兔为研究对象，采用ABC-ELISA检测兔面神经组织SOCS1、SOCS3的含量，观察电针不同刺激量对急性期面神经损伤兔SOCS1、SOCS3蛋白表达的影响，为临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 动物及分组

健康成年SPF级新西兰兔60只，雌雄各半，85～90日龄，体质量2～2.5 kg，动物许可证号SCXK（川）2013-14，四川省实验动物专委会养殖场提供，饲养环境温度（20±2）℃，相对湿度（50±10）%，每日光照时间12 h，自由摄食饮水。本实验严格遵循科技部《关于善待实验动物的指导性意见》的相关规定。实验动物采用随机数字表法分为空白组、假手术组、模型组和电针弱、中、强刺激组，每组10只。

1.2 主要试剂与仪器

华佗牌针灸针、SDZ-V型电针治疗仪（苏州医疗用品厂有限公司），注射用青霉素钠（华北制药股份有限公司，F4082121）。转轮式切片机（德国徕卡），TSJ-Ⅱ型全自动封闭式组织脱水机（常州市中威电子仪器有限公司），BMJ-Ⅲ型包埋机（常州郊区中威电子仪器厂），PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪（常州市中威电子仪器有限公司），数码三目摄像显微镜（BA400Digital，麦克奥迪实业集团有限公司）。

1.3 造模

造模兔耳缘静脉注射1%戊巴比妥钠（5 mL/kg）麻醉，严格消毒铺巾，于耳根与嘴角连线的中点，瞳孔下方2 cm处、正对神经干处，面颊部弧形切口，剪开皮肤、肌肉层，暴露头部筋膜，钝性分离面神经，再用特制止血钳满扣夹闭面神经5 min，损伤长度约2.5 cm[8-9]；假手术组操作步骤同上，但不做夹闭处理；空白组不做任何处理。

1.4 干预

兔盒式夹固定后，参照《实验针灸学》[10]腧穴定位，选取术侧“地仓”“颊车”“颧髎”“翳风”“合谷”进行电针治疗。用25 mm×0.32 mm华佗牌一次性毫针，“翳风”直刺10 mm，“地仓”向“颊车”透刺10 mm，“颧髎”向“地仓”透刺10 mm，“合谷”直刺5 mm。电针弱、中、强刺激组电刺激量参数见表1，每日1次，连续治疗7 d。

1.5 观察指标

耳缘静脉注射空气处死兔，取兔面神经样本，固定、洗涤、梯度脱水、透明、包埋处理，石蜡切片，常规HE染色，染色成功后盖玻片封盖，备检。免疫荧光镜下观察、测量积分吸光度，ABC-ELISA检测组织SOCS1、SOCS3蛋白表达，严格按试剂盒说明书操作。

1.6 统计学方法

采用SPSS21.0統计软件进行分析。实验数据以—x±s表示，多组间比较采用方差分析，方差齐用LSD检验，方差不齐用Tamhane's T2检验；若数据不符合正态分布，则采用W-H秩和检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病理观察变化

假手术组细胞浆染色与空白组接近，模型组细胞浆染色加深，弱刺激组细胞浆染色较浅，中刺激组和强刺激组染色较深。见图1、图2。

2.2 电针对模型兔面神经细胞因子信号转导抑制因子1、3蛋白表达的影响

与空白组比较，模型组兔SOCS1、SOCS3蛋白表达显著增加，差异有统计学意义（P<0.01）；与模型组比较，电针弱刺激组SOCS1、SOCS3蛋白表达显著降低，差异有统计学意义（P<0.01），电针中、强刺激组SOCS1、SOCS3蛋白表达无明显变化。见图3。

3 讨论

中医认为，面神经损伤主要为机体过度劳累致气血不畅，身体脉络无力，机体免疫力下降，风、寒之邪侵袭而发病。相关研究显示，电针可用于面神经损伤急性期的治疗，电针通过低频脉冲电流刺激穴位，可调整人体组织功能，促进气血的循环，调整肌张力[11]，但电刺激量大小与效应不成正比[12]，控制不当易加重炎症水肿[13]，引起血管痉挛，影响面神经传导而发生面部肌肉抽动，预后不佳。目前虽有关于电针刺激量的临床研究，但对其差异产生的生物学机制研究相对较少。

JAK-STAT通路是电针促进面神经损伤修复的重要通路，其受多种因素的调节，在信息下调途径中，SOCS是抑制JAK-STAT通路的重要蛋白[4]，参与多种细胞因子、生长因子和激素的信号调节，而SOCS1、SOCS3在神经再生中有重要作用。SOCS1通过泛素化和降解JAK2和STAT1来抑制JAK-STAT信号转导[5-6]，SOCS3与特异性细胞因子结合后，通过JAK-STAT信号转导而诱导表达，其表达产物又反过来特异性地抑制细胞因子介导的JAK-STAT信号通路[7]。本实验结果显示，电针治疗面神经损伤兔时，电针弱刺激可抑制细胞因子SOCS1、SOCS3的异常活化，即针刺弱刺激可使面神经损伤表达亢进的SOCS1、SOCS3下调，与正常水平接近，以达到促进面神经损伤修复的治疗作用。电针中刺激组和电针强刺激组对细胞因子SOCS1、SOCS3的异常活化基本无调节作用，甚则SOCS1、SOCS3因为电针中刺激和电针强刺激而进一步活化，该结果表明，针刺中刺激和强刺激在面神经损伤急性期应用时，会进一步加重损伤，不利于面神经损伤的修复。

综上，面神经损伤急性期电针弱刺激可使SOCS1、SOCS3蛋白表达水平趋于正常，进而促进面神经损伤的修复，而电针疗效不随刺激量的增长而增加，而以弱刺激量为佳，故电针治疗需要把握“中病即止”的原则。

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（收稿日期：2017-05-12）

（修回日期：2017-07-15；编辑：华强）