瑶药皂布叶质量标准研究

张婷 刘华东 刘安韬 卢月妹

【摘 要】 目的：建立皂布叶Rhamnus napelensis（Wall.）Laws药材的质量标准。方法：以广西采集的12批皂布叶药材为研究对象，采用2020版《中国药典》（四部）相关方法检查其水分、总灰分和浸出物含量;采用紫外-可见分光光度法，醋酸镁-甲醇显色测定总蒽醌含量。结果：12批药材水分和总灰分分别不高于13%和6%，水溶性浸出物和醇溶性浸出物不低于15%和12%。总蒽醌在0.002074-0.01037 mg范围内线性关系良好（R2=0.9962）。含量测定结果显示，该药材总蒽醌含量（以1，8-二羟基蒽醌计）不得少于20.0 mg/g。结论：建立的项目考察了皂布叶的各项质量指标，能有效评价药材的质量。

【关键词】 皂布叶;总蒽醌;质量标准

【中图分类号】R284.1   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2021）24-0041-04

Study on Quality Standard for Rhamnus napelensis

ZHANG Ting1 LIU Huadong1* LIU Antao1 LU Yuemei2

1.Guangxi Medical College，Nanning 530023，China; 2.Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000，China

Abstract：Objective To establish the quality standard for Rhamnus napelensis.Methods Twelve batches of Rhamnus napelensis collected in Guangxi region. The samples were examined by moisture measuring，ash determination and extract mensuration method according to Chinese Pharmacopoeia（2020 edition）. UV spectrophotometry was developed to determinate the total anthraquinone.Results In twelve batches of Rhamnus napelensis，the water content and the average content of total ash is less than 13% and 6.0%，respectively;the content of water and alcohol-soluble extract were above 15% and 12%，respectively.The calibration curves of the total anthraquinone had good linear relationship in the ranges of 0.002074～0.01037 mg （R2=0.9962）.Total anthraquinone is more than 20.0 mg/g.Conclusion Identification methods were stable and reliable，Established quality standard can be used for comprehensive quality control of Rhamnus napelensis.

Key words：Rhamnus napelensis; Total Anthraquinone; Quality Standard

瑶医药是我国民族医药的重要组成部分，具有理论简洁、简单实用、疗效确切、疗法别具一格等特点[1-2]。皂布叶是瑶医药常用药材之一，广泛分布于广西、广东、云南等西南各省及自治区，为鼠李科尼泊尔鼠李Rhamnus napelensis（Wall.）Laws的全株，别名叶青、泡角等，民间用于祛风除湿，利水消胀，主治风湿关节痛、慢性肝炎、肝硬化腹水等病症[3-4]。在瑶医中具有祛风除湿、行气止痛的功效，用于崩闭闷（风湿痛、类风湿性关节炎）、播冲（跌打损伤）和碰脑（骨折）等病症。皂布叶中主要成分为黃酮和蒽醌等多酚类化合物[5]，刘安韬等[5]对皂布叶的研究表明，皂布叶有良好的抗痛风作用。为了更好地开发和利用其资源，研究建立了瑶药皂布叶药材的质量标准，分别对水分、总灰分和浸出物进行了测定，并采用紫外-可见分光光度法测定药材中总蒽醌的含量，研究结果为完善皂布叶药材质量标准提供技术依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 TU-1901紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）;赛多利斯分析天平BSA8201（赛多利斯上海贸易有限公司）;XS204电子天平（梅特勒-托利多国际贸易上海有限公司）;KQ2200E超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;DFT-100高速粉碎机（大德药械有限公司）;SX2-8-16型马弗炉（上海力辰邦西仪器科技有限公司）;HH-S2数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂）; DHG-9055A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海吉众仪器有限公司）;98-I-b电热套（天津泰斯特仪器有限责任公司）。

1.2 药品与试剂 1，8-二羟基蒽醌（批号：110829-9702，中国食品药品检定研究院）;醋酸镁、95%乙醇、无水乙醇、甲醇和氯仿等均为分析纯。

12批次皂布叶样品采收于广西武鸣县，靖西县等地，干燥粉碎后备用。详见表1。

2 方法与结果

2.1 水分、总灰分和浸出物的测定

2.1.1 测定方法 水分测定照《中国药典》（2020年版）四部通则0832水分测定法“第二法”测定;总灰分测定照《中国药典》（2020年版）四部通则2302灰分测定法“总灰分测定法”测定。文献[4]表明，皂布叶中主要含有蒽醌和黄酮类化合物，极性相对较大，因此用水溶性浸出物和醇（95%乙醇）溶性浸出物来考察皂布叶中所含活性成分含量。照《中国药典》（2020年版）四部通则2201浸出物测定法中热浸法测定水溶性浸出物和醇溶性浸出物。

2.1.2 测定结果 12批样品的水分、总灰分和浸出物的测定结果见表2。根据测定结果，12批药材水分拟定为不得超过13%，总灰分拟为不得超过6.0%，水溶性浸出物拟不低于15.0%，醇溶性浸出物含量拟为不低于12.0%。

2.2 总蒽醌含量测定 皂布叶中主要成分为蒽醌类化合物[4]，采用紫外-可见分光光度法，醋酸镁-甲醇显色，测定皂布叶中总蒽醌含量。

2.2.1 蒽醌标准溶液的配制（0.1037 mg/mL） 精密称取

10.37 mg 1，8-二羟基蒽醌，至100 mL量瓶，加甲醇适量溶解，用甲醇稀释至刻度。

2.2.2 醋酸镁-甲醇溶液的配制（质量分数为0.5%） 称取2.50 g醋酸镁溶于500 mL甲醇中，储于棕色瓶中保存备用。

2.2.3 样品溶液的制备 取0.2 g样品粉末，精密称定，置100 mL锥形瓶中，精密量取50%甲醇50 mL，超声（常温）30 min，放冷，补足重量。过滤，精密量取25 mL滤液置蒸发皿中，水浴蒸干，加3.0 mol/L盐酸15 mL，水浴水解30 min，放冷，用乙酸乙酯10 mL分两次萃取，合并萃取液蒸干，加甲醇溶解，转移至25 mL量瓶，加甲醇至刻度。精密量取1 mL至50 mL量瓶，加4 mL醋酸镁-甲醇显色，用甲醇稀释至刻度。

2.2.4 标准曲线的绘制 分别精密量取蒽醌标准溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL置于50 mL容量瓶中，分别加入醋酸镁-甲醇溶液至4 mL，摇匀显色，加甲醇至刻度，以试剂空白为参比，在230 nm 处测定吸光度（A）。以1，8-二羟基蒽醌浓度（C）为横坐标（mg/mL），吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线并拟合回归方程。如图3所示。从图3可知，得醋酸镁-甲醇法测定蒽醌的回归方程为：A=0.78C+0.0419，R2=0.9962，在0.002074～0.01037 mg/mL范围内线性关系良好。

2.2.5 样品含量测定 对12个批次皂布叶样品（1～12号）进行干燥粉碎后，采用“2.2.3”进行供试品溶液的配制，照紫外-可见分光光度法，在230 nm波长下测定其吸光度，以标准曲线方程计算其含量。结果见表3。

由表3可知，皂布叶中总蒽醌的含量最高可达52.44 mg/g，最低为23.08 mg/g，平均含量为37.64 mg/g;对照药材采收表，皂布叶药材在9～10月份含量达到较高值，随着植物开花结果，全株药材的蒽醌物质含量有下降趋势，一般在1～2月降到最低。皂布叶药材总蒽醌含量拟不低于20.0 mg/g。

3 讨论

3.1 研究基础 作者前期对皂布叶药材进行了性状和显微鉴别研究[7]，研究表明皂布叶药材茎表面有大量皮孔，叶含色素类物质，干燥后呈灰黑色。皂布叶药材的茎髓薄壁细胞壁有念珠状增厚并有纹孔，药材粉末中含有丰富的石细胞和草酸钙簇晶，为药材性状和显微鉴别提供了依据，本研究进一步补充了药材质量研究数据。

3.2 药材检查数据的确定 皂布叶样品之间的水分、总灰分、浸出物和含量测定结果有一定的差异，与样品的采收时间有一定的关系。根据测定结果，12批样品的质量较稳定，考虑到广西气候较为湿润，故建议将药材水分拟定为不得过13.0%;总灰分不得高于6%，水浸出物和醇浸出物不得低于15%和12%。

3.3 含量测定方法考察 皂布叶中化学成分以多酚类为主，其中的蒽醌类成分显示出良好的抗炎，抑菌和抗氧化等[8-11]和抗痛风活性[6]。因此，针对药材中总蒽醌建立测定方法，并对样品制备方法进行考察，包括超声提取的温度，时间和提取溶剂及显色应用等，最终确定提取条件为常温超声50%甲醇提取30 min，药材取样0.2 g时，用醋酸镁显色剂4 mL。12个批次皂布叶药材的总蒽醌含量在23.08～52.44 mg范围内，建议皂布叶药材总蒽醌含量应不少于20.0 mg/g;

3.4 测定方法存在的问题 采用紫外-可见分光光度法进行含量测定具有较好的专属性和广泛的应用范围，在确定吸收波长条件下可以实现快速侦测。但由于光谱法本身的条件限制，测定样品的浓度过高会影响测定的准确度，另外会有同吸收峰的物质所干扰，影响准确度。高效液相色谱（HPLC）主要利用物质理化性质上的差异进行分离和定量测定。HPLC专属性强，准确度更高，但在含量测定中，对样品的组分的结构、性质的明确性要求较高，测定成分更明确，所需时间长。研究主要针对皂布叶药材中蒽醌类成分进行测定，而不是单体成分，测定方法便捷，结果稳定可靠，可以作为皂布叶药材质量控制的方法。在以后的研究中，课题组将进一步深入研究该药材的药效成分，建立专属性更强的测定方法。

综上所述，研究在前期研究基础上增加了皂布叶药材的水分、总灰分和浸出物等检查项，建立了测定药材总蒽醌含量的方法，完善了皂布叶质量标准，可为该药材的全面质量控制提供依据。

参考文献

[1]刘莉，覃倩，许莉，等. 壮瑶医药治疗类风湿性关节炎研究进展 [J]. 中国民族民间医药，2019，28（8）：72-74.

[2]张曼，戴建业. 瑶医养生理论在医养结合服务实践中的应用探讨 [J]. 中国民族医药杂志，2018，24（12）：64-66.

[3]国家中医药管理局《中华本草》编委会. 中華本草（第五册，第十三卷） [M]. 上海：上海科学技术出版社，1999：251.

[4]黄兴.治疗骨质增生、风湿病的中药：中国00122088[P/OL].2002-03-20

[5]MAI L P，GUERITTE F，DUMONTET V，et al. Cytotoxicity of Rhamnosylanthraquinones and Rhamnosylanthrones from Rhamnus nepalensis [J]. J Nat Prod，2001，64（9）：1162-1168.

[6]刘安韬，张婷，梁红. 皂布叶提取物抗痛风作用研究[J]. 中国医药科学，2017，7（17）：40-42.

[7]刘安韬，张婷，梁晓乐，等. 皂布叶的显微鉴别[J]. 中药材，2014，37（4）：597-8.

[8]戴碧鑫，董碧莲，蔡延渠，等. 大黄原药材、药渣的总蒽醌含量测定及体外抗菌活性研究 [J]. 亚太传统医药，2020，16（8）：20-24.

[9]赵勤，胡锐，卫昊，等. 朱砂七总蒽醌对S180荷瘤小鼠抗氧化活性的影响 [J]. 中药药理与临床，2013，29（2）：72-74.

[10]陈一村，秦永洁，蔡聪艺，等. 大黄总蒽醌对小鼠扭体模型的镇痛作用 [J]. 现代生物医学进展，2010，10（3）：558-559.

[11]韦汉燕，谢恒，廖迎，等. 大血藤总蒽醌的含量测定及体外抗氧化活性的研究 [J]. 华夏医学，2019，32（4）：27-31.

（收稿日期：2021-04-28 编辑：陶希睿）