委陵菜属药用植物三萜类化合物的提取分离

●罗玥佶 李妍 汤婷

委陵菜属药用植物三萜类化合物的提取分离

●罗玥佶 李妍 汤婷

目的：研究委陵菜属药用植物三萜类化合物的提取工艺条件。方法：采用微波萃取法，通过单因素试验对提取工艺条件进行了优化，比较不同因素对三萜化合物的提取效率的影响。结果：微波萃取法的最佳提取条件为:乙醇浓度70%，提取时间10min，提取温度50℃，料液比1∶25(g/ml)结论：微波萃取法具有试剂用量少、时间短和提取效率高的优点，是三萜类化合物的最佳提取方法。

委陵菜；三萜类化合物；微波萃取

委陵菜属Potentilla L.药用植物广布北温带，全球有500余种，我国86种，全国各省均有分布[1]，在祖国传统医学中占有一定地位,是一种常见中草药,《 中国药典》2005年版收载。委陵菜性寒,味苦,具有清热解毒,凉血止痢的作用。常用于赤痢腹痛、久痢不止、痔疮出血、痈肿疮毒等[2,3]。委陵菜的化学成分研究较少,文献报道从委陵菜中分离得到的化合物主要有儿茶素,乌苏酸,丝石竹皂苷元等化合物[4]。三萜类化合物( triterpeno , ds)是由30个碳原子构成的萜类化合物,由6个异戊二烯单位连接而成,是类异戊二烯代谢途径的重要产物之一[5-6]。近年来,由于色谱等分离技术、波谱测定技术等分析手段的迅速发展,使三萜类化合物的提取分离及测定方法取得了可喜的研究展。本文将对委陵菜属药用植物三萜类化合物的提取分离进行研究。

1 实验部分

1.1 实验材料

供试材料均经湖南师范大学生命科学院刘克明教授鉴定。随机选取5株以上成熟植株，取幼嫩叶片带回实验室，80℃超低温保存备用。

1.2 实验仪器与试剂

主要仪器：TU-1901紫外可见分光光度计；MAS-Ⅱ微波萃取仪;MODEL HH1006超声波清洗器；RE52CS-2旋转蒸发仪；DHG-9246电热恒鼓风干燥箱；BS224S电子天平；数显恒温水浴锅等。

主要药品与试剂：齐墩果酸标准品、无水乙醇、冰醋酸、香草醛、高氯酸、乙酸乙酯均为分析纯。

1.3 实验方法

(1)样品的预处理。将试样在40℃下烘干，得干燥样品，24h后粉碎，过60目筛备用。

(2)标准溶液的制备。精密称取17.0mg齐墩果酸标准品，置于100ml容量瓶中，加无水乙醇溶解，定容，即得。

(3)测定波长的选择[7]。取齐墩果酸标准溶液1ml于具塞试管中，在60℃水浴上挥干乙醇，加入一定量新配制的浓度5%香草醛－冰醋酸溶液和高氯酸，摇匀，置于60℃水浴中反应20min，取出，冰水浴冷却后，加5ml冰醋酸，振荡，静置22min，以试剂溶液为空白，在490～600nm波长范围内扫描，选择最佳测定波长。

(4)线性关系的考察。精确吸取齐墩果酸标准溶液0．2、0．4、0．6、0．8、1．0和1．2ml于6支试管中，按“1.3.3”方法操作在545 nm波长处测定吸光度。以齐墩果酸浓度(μg/ml)为横坐标，吸光度值为纵坐标，计算回归方程。

(5)样品的含量测定。精确吸取齐墩果酸标准溶液或样品溶液适量，于具塞试管中，按“1.3.3” 方法操作，以试剂空白为参比液测定吸光度，以回归方程计算含量。

1.3.6 微波萃取法

（1）乙醇浓度对提取效率的影响。称取3g委陵菜粉末，固定提取功率，在料液比1∶25(g/ml)、提取时间10min和提取温度为50℃的条件下，分别用浓度为40%、50%、60%、70%、80%的乙醇进行提取，测定三萜含量，计算提取率。（2）提取时间对提取效率的影响。称取3g委陵菜粉末，固定提取功率，在料液比1∶25(g/ml)、乙醇浓度 70% 和提取温度为50℃的条件下，分别提取5、10、15、20和25min，然后测定三萜的含量，计算提取率。（3）提取温度对提取效率的影响。称取3g委陵菜粉末，固定提取功率，在料液比1∶25( g/ml)，乙醇浓度70%和提取时间10min的条件下，选择温度分别为30、40、50、60、70℃进行提取，然后测定三萜化合物的含量，计算提取率。（4）料液比对提取效率的影响。称取3g委陵菜粉末，固定提取功率，在乙醇浓度70%、提取温度50℃和提取时间10 min的条件下，选择料液比分别为1∶15、1∶20、1∶25、1∶30和1∶35(g/ml)进行提取，然后测定三萜化合物含量，计算提取效率。

2 结果与分析

（1）测定波长的选择试验结果表明，齐墩果酸在545nm波长处有最大吸收，且空白无干扰，故选545nm为测定波长。（2）线性关系的考察计算得回归方程,吸光度值与齐墩果酸浓度的线性关系良好。（3）乙醇浓度对提取效率的影响。随着乙醇浓度的增加，提取率先增大后减小,当乙醇浓度为70%时，提取率最大，故选择最佳乙醇浓度70%。（见表1）（4）提取时间对提取效率的影响。当提取时间超过10min后，随着提取时间的增加，提取效率增加不明显，故选择10 min为最佳提取时间。（见表1）（5）提取温度对提取效率的影响。温度对提取效率影响较大，当提取温度为50℃时，提取率最高。故选择50℃为最佳提取温度。（见表1）（6）料液比对提取效率的影响。提取效率随着料液比的增大而增大，当料液比大于1∶25(g/ml)后，三萜的提取率增加趋势减缓。为节省溶剂，便于回收，故选择1∶25(g/ml)为最佳料液比。（见表1）。

表1 各单因素实验对委陵菜属药用植物三萜含量的影响

3 结论

微波萃取法提取委陵菜属药用植物三萜化合物具有提取时间短、节省溶剂用量少和提取效率高的优点。微波萃取法提取委陵菜属药用植三萜化合物的最佳提取条件为∶乙醇浓度70%，提取温度50℃，提取时间10 min，料液比1∶25( g /ml);在此条件下，委陵菜属药用植物三萜化合物的平均提取率为0.455%。

（作者单位：长沙医学院基础医学院）

[1]中国科学院《中国植物志》编辑委员会.中国植物志(第三十七卷)[M].北京:科学出版社,1985.

[2]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社,1975:1369.

[3]中国药典[S].一部.2005:149.

[4]陈芳群.委陵菜化学成分研究[J].华西药学杂志,1989,4(1):6

[5]高锦明.植物化学[M].北京:科学出版社,2003,255-281.

[6]郝宏曹,朱旭芬,曾云中.类异戊二烯的生物合成及调控[J].浙江大学学报:农业与生命科学版,2002,28(2):224-230.

[7]林倩倩，赵淑杰，朱 鹤.树舌灵芝中三萜类化合物的提取工艺研究[J].安徽农业科学:2012，40(18):9669－9671，9804.

汤婷

湖南省教育厅科研项目（湘财教[2015]54号15C0154、湘财教[2014]85号14C0130）