1例中间型β地中海贫血的基因诊断与临床表现

●王健 何继宏 何晓清 李伟强 唐跃华

1例中间型β地中海贫血的基因诊断与临床表现

●王健 何继宏 何晓清 李伟强 唐跃华

目的：分析1例中间型β地中海贫血的基因检测结果与临床表现。方法：资料选取我院2014年-2016年期间收治的1例中间型β地中海贫血患儿，采用常规PCR技术以及DNA序列测定进行基因诊断。结果：常规PCR检测技术结果为β41/42杂合子，提示为轻型β地中海贫血；DNA序列测定结果发现患儿β珠蛋白基因还存在PolyA(A＞G)突变，为βPolyA(A＞G)/β41/42双重杂合子。结论：临床诊断为中间型β地中海贫血需要结合临床表现和基因检测结果综合分析，对于常规基因检测与地中海贫血表型筛查结果不符时，应考虑为罕见或未知突变类型，进一步检测非常见类型α或β地中海贫血基因，以防漏诊或误诊。

中间型β地中海贫血；基因诊断；临床表现

α珠蛋白基因位于人体的16号染色体，而α地中海贫血为基因连接中-α3.7、α4.2、--SEA缺失基因的超过95%，且α地中海贫血主要由于超过5%的α基因缺失导致，且近些年有较少报道α四聚体、α三聚体。β珠蛋白基因位于11号染色体，且此基因链为1%基因缺失或99%点突变。回顾相关外国文献发现数百种β珠蛋白基因突变，而我国仅发现20多种。临床研究发现地中海贫血的主要临床表现为肽链α/β平衡因素、β基因表现β0与β+、α基因表现α1与α2等相关因素影响。而目前临床诊断地中海贫血的实验方法有以下几种∶（1）采用外周血红蛋白电泳检测血红蛋白定量和定性[1]；（2）疑似地中海贫血患者应给予α地中海贫血Gap-PCR基因缺失检测法，β地中海贫血反向斑点杂交检测法；（3）α与β珠蛋白基因全长测序。本文就如何提高基因检测技术和统计临床表现和影响因素进行详细讨论，为今后临床治疗提供有利参考和证据，现将报告阐述如下∶

1 资料与方法

一般资料∶

患儿∶女；年龄∶4岁；患者由于面色苍白，且患者消瘦、体弱无力。患儿家属主诉∶患儿11月时开始面色苍白，消瘦、右上腹包块逐步增大。生化检验发现∶WBC∶9.2×109/L，Hb∶72.0g/L，MCV69.0fl，MCH∶19.6pg，MCHC∶32.1%，PLT∶301×109/L。且发病半年时共 2次红细胞悬液输入，每次个1单位，且患儿输入红细胞悬液后很快出现面色苍白，且家长携患儿前去当地医院就诊，经生化检查发现Hb浮动性较大，且当患感冒时可出现Hb下降至50-60g/L，当正规、有效、对症治疗发现可逐渐恢复至80-90g/L，且此期间可不予以相关处理。而近1年内患者右上腹逐渐增大，但无明显腹胀和疼痛，但患儿出现体型消瘦但在标准范围内。患儿家属出具以往病历，发现患儿出生时并无贫血，但多日后黄疸不退，经诊断为“新生儿胆红素”，临床予以蓝光照射治疗后黄疸消退。与患儿家属沟通发现∶患儿目前既往有轻度贫血，而患儿外公为中度贫血，而其余家属是否患有贫血和程度尚不明确。而本次经我院常规检验发现∶WBC∶6.38×109/L、Hb82g/L、MCV63.1fl、MCH20.2pg、MCHC32.8%、PLT189×109/L、ALT∶18U/L、TBIL64.1umol/L、IBIL56.2umol/L，而测定血清铁元素11.8umol/L；不饱和铁结合19.3umol/L，经腹部彩超检查发现，患儿肝、脾部出现明显增大，但并未出现结构性变异以及占位性异常病变；且经检测发现患儿抗人球蛋白阴性；而外周血红蛋白电泳结果显示HbF9.1%，HbA24.2%。

2 检测方法

2.1 α与β珠蛋白常见突变基因型检测

提取外周静脉血白细胞基因组DNA后，利用反向斑点杂交技术(reverse dotblot，RDB)检测17种β地贫点突变类型∶41-42、43、654、-32、-28、-29、71-72、-30、17、14-15、βE、CAP、31、InT、27/28、IVS1-1、IVS1-5，与3种α地贫点突变类型∶aCS、aQS、aWS；利用多重PCR技术（Multiplex PCR）检测3种α地贫缺失型突变类型-a3.7、-a4.2、--SEA。

2.2 珠蛋白基因全长测序。

3 结果

（1）依据血常规与血红蛋白电泳结果分析，此患儿应为中间型地中海贫血。

（2）经地中海贫血基因检测发现∶患儿的基因型为β基因41/42杂合子而α基因未检测出异常。患儿母亲的地贫基因检测未见异常，父亲的地贫基因检测结果也为β基因41/42杂合子。患儿基因型结果提示为轻型β－地中海贫血，与筛查结果不符。

（3）进一步采用PCR测序方法分析202种非常见点突变型β地中海贫血（深圳亚能公司完成），结果发现患儿β珠蛋白基因还存在Poly A(A＞G)突变，为βPoly A(A＞G)/β41/42双重杂合子。

4 讨论

本次调查的患儿为中度贫血，且患儿发病前已输血2次，每次各1个单位，但本次感染时患儿彩超下已出现肝脾增大以及生化检查小细胞低色素贫血和胆红素升高等结果，所有检查符合溶血性贫血特点；且患儿经铁代谢检查发现排除缺铁性贫血，以及采用电泳检查HbF、HbA2都增高，同时回访患儿家属发现，家属人群中存在数人贫血，且症状符合中间型β-地中海贫血，但α与β珠蛋白常见突变基因型检测结果提示为轻型，与筛查结果不符。进一步采用PCR测序方法分析202种非常见点突变型β地中海贫血，结果发现患儿β珠蛋白基因还存在Poly A(A＞G)突变，为βPoly A(A＞G)/β41/42双重杂合子。

综上所述，临床诊断为中间型地中海贫血，首要应排除患者患有其他方面原因导致贫血，再采用血红蛋白电泳和基因分析，同时进行家族病史分析，联合各项结果综合分析病情。对于常规基因检测与地中海贫血表型筛查结果不符时，应考虑为罕见或未知突变类型，进一步检测非常见类型α或β地中海贫血基因，以防漏诊或误诊。因此，对于罕见类型β地中海贫血，如果不进行血液学表型筛查，而只进行常规基因检测，会造成假阴性结果。（

作者单位：惠州市第三人民医院）

[1]黄莉,姚红霞.羟基脲治疗中间型β地中海贫血的疗效观察[J].中国实验血液学杂志,2016,24(3):806-809.

[2]杨金玲,郑敏.β地中海贫血实验室诊断的研究进展[J].中国优生与遗传杂志,2016(4):7-8.

[3]刘新颜,王静,曾艳红,等.β地中海贫血基因检测结合HLA配型的胚胎植入前遗传学诊断技术的临床应用[J].中华妇产科杂志,2016,51(7):491-497.

课题名称：广东惠州地区中间型β地中海贫血的基因多样性及其临床表现的研究课题编号：20140806；惠州市科学技术局