孕妇中期唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测的价值分析

罗 娜

（南京市江宁区妇幼保健计划生育服务中心孕产保健科 江苏 南京 211000）

唐氏综合征（down's syndrome，DS）是导致我国新生儿出生缺陷的常见染色体数目异常遗传性疾病。唐氏综合征可导致新生儿智力低下、生长发育迟缓、头面部特征异常等一系列病变，给家庭和社会带来沉重负担。孕期进行唐氏筛查是产检必检项目，可使DS胎儿在孕期的诊断率明显提高，极大地降低了DS新生儿出生率。但唐氏筛查也存在一定不足之处，对DS的阳性预测值较低。利用高通量测序技术能提高对DS检测的特异度和准确率。近年来，外周血游离胎儿DNA检测在DS筛查中得到广泛应用，。本文进一步分析孕妇中期唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测的诊断价值，现报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2019年1月—2021年1月在南京市江宁区妇幼保健计划生育服务中心孕产保健科进行DS产前筛查的230例DS高风险孕妇的临床资料，均接受唐氏筛查和外周血游离胎儿DNA检测，将单纯唐氏筛查作为A组，单纯外周血游离胎儿DNA检测作为B组，唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测作为C组。患者年龄20～34岁，平均年龄（27.4±3.2）岁；孕周12～18周，平均（16.1±2.5）周；体重46～72 kg，平均（56.4±7.8）kg。所有孕妇均为单胎妊娠，处于孕中期，常规行唐氏筛查后显示为唐氏综合征筛查高风险，或超声检查提示胎儿异常，或孕妇服用过致畸药物或有感染等致畸史、有染色体异常家族史、曾经生育过染色体异常患儿、有不明原因的胎停及死胎等；所有孕妇均充分了解外周血DNA检测技术，明确检测适应证及局限性；排除多胎妊娠、孕早期或孕晚期、内分泌性疾病、遗传性疾病、拒绝DS筛查等。本研究经我院伦理委员会批准，所有孕妇均知情同意。

1.2 方法

（1）唐氏筛查。采集孕妇肘静脉血10 mL，保存于EDTA抗凝管中，在4 h内进行检测，于4 ℃下离心1 600 r/min，处理10 min，取上清液，分装至多个1.5 mL离心管中，以时间分辨免疫荧光法测定血清游离β-人绒毛膜促性腺激素（β-Human chorionic gonadotropin,β-hCG）、甲胎蛋白（alpha fetoprotein, AFP）二联筛查法，检查结果以中倍数（multiples of the median, MOM）表示，结合孕妇年龄、体重、既往是否有21-三体不良孕史等指标，应用DS风险评估软件，计算DS风险值，唐氏高危切割值为1:270。（2）外周血游离胎儿DNA检测。抽取孕妇外周静脉血10 mL，置入专用采血管混匀，在8 h内进行检测，分离血浆，在4 ℃下1 600 g离心100 min，将获得的上清液置入几个2 mL离心管中，再次4 ℃下1 600 g离心100 min，将获得的上清液置入2 mL离心管中，置于-80 ℃冰箱中待查；提取血浆中游离DNA的血浆超过2 mL，经PCR扩增后获得样本DNA文库，使用高通量测序仪测定外周血胎儿游离DNA，计算待测染色体的比例与总体人群的比例之差，除以待测染色体的方差，得出每条染色体所占的比例，计算Z值，若Z值≥3，为三体高危，Z值＜3，为单体高危。（3）联合筛查。先行唐氏筛查，再行外周血游离胎儿DNA检测。（4）对唐氏筛查阳性孕妇行羊水穿刺，在超声引导下穿刺针经腹壁及子宫，进入羊膜腔抽取羊水20 mL，离心后获取沉淀物0.5 mL，混合均匀，转入加有羊水培养基的瓶内，开放式培养后观察羊水细胞生长情况，加入一定量秋水仙素，停止细胞分裂至中期，制片后得到羊水细胞标本片，进行介入性产前诊断，以染色体核型分析结果作为DS诊断的金标准。

1.3 观察指标

记录三组对DS的诊断阳性及阴性病例数；统计三组对DS诊断的敏感度、特异度和准确率。

1.4 统计学方法

2.结果

2.1 三组诊断结果分析

A组阳性27例（真阳性9例、假阳性18例），阴性203例（真阴性201例、假阴性2例）；B组阳性21例（真阳性10例、假阳性11例），阴性209例（真阴性208例、假阴性1例）；C阳性13例（真阳性11例、假阳性2例），阴性217例（真阴性217例、假阴性0例），见表1。

表1 三组诊断结果分析

2.2 三组对DS诊断的阳性预测值、特异度和准确率比较

A组对DS诊断的阳性预测值为33.33%（9/27）、特异度为91.78%（201/219）、准确率为91.30%（210/230）；B组对DS诊断的阳性预测值为47.62%（10/21）、特异度为94.98%（208/219）、准确率为94.78%（218/230）；C组对DS诊断的阳性预测值为84.62%（11/13）、特异度为99.09%（217/219）、准确率为99.13%（228/230），差异有统计学意义（＜0.05），见表2。

表2 三组对DS诊断的阳性预测值、特异度和准确率比较

2.3 唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测结果与染色体核型结果分析

21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征的诊断符合率均为100%，见表3。

表3 唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测结果与染色体核型结果分析

3.讨论

我国每年新增出生缺陷新生儿约120万，占每年所有出生人口的6%。新生儿出生缺陷的发生主要与遗传、环境等因素有关，其中，染色体异常是最常见的遗传因素，主要表现为染色体数目或结构的异常。我国每年因染色体异常而发生出生缺陷的患儿达10万左右，而染色体非整倍体异常约占所有染色体异常出生缺陷患儿的95%。临床统计显示，最常见的染色体异常类型包括21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征及性染色体综合征，尤其以21-三体综合征的发病率最高，危害也最为严重。依靠目前的临床治疗技术，尚无法治疗染色体疾病，因此，加强产前染色体疾病的筛查及诊断，及时终止妊娠，是降低出生缺陷患儿出生率的关键。

DS是产科重点排查畸形的疾病之一，也是孕期必检项目，早期发现并干预，对保障新生儿出生质量有重要意义。目前，唐氏筛查是孕期主要的DS筛查方法，具有筛查成本低、创伤小、孕妇接受度高、临床开展便利等优点，通过血清测定F-βhCG、AFP，计算DS风险值来评估DS发病情况。但唐氏筛查对胎儿DS的诊断率较低，仍需要结合其他检测方法进一步明确诊断。

既往临床产前诊断通过羊膜腔穿刺、脐静脉穿刺、绒毛活检等侵入性方法来获取胎儿细胞进行染色体核型检验，这些方法均属于有创性产前诊断，可引起流产、感染、胎儿损伤、孕妇出血等并发症或不良结局，临床开展明显受限。近年来，无创产前基因检测在临床得到推广，通过抽取母体外周血，提取游离胎儿DNA，采用高通量测序法检测游离胎儿DNA的染色体非整倍体，具有无创、准确性高等优点，明显提高了DS的诊断率，减少了羊水穿刺给孕妇带来的痛苦，甚至可造成流产风险。相关研究表明，宫内胎儿DNA可呈游离状态进入母体外周血循环，母体血浆总游离DNA中游离胎儿DNA高达10%以上，且在孕5周即可检出。且胎儿游离DNA分子长度多不足200 bp，明显短于母体DNA，容易在孕妇外周血中检测出游离胎儿的DNA。这给临床早期诊断DS提供了有利证据。但该技术的检测成本较高，在基层医院及经济欠发达地区难以普及。唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测能够优势互补，两者结合能提高诊断准确性，减少检查费用，提高DS的早期诊断及干预率。

本文结果显示，A组对DS诊断的阳性预测值为33.33%（9/27）、特异度为91.78%（201/219）、准确率为91.30%（210/230），B组对DS诊断的阳性预测值为47.62%（10/21）、特异度为94.98%（208/219）、准确率为94.78%（218/230），C组对DS诊断的阳性预测值为84.62%（11/13）、特异度为99.09%（217/219）、准确率为99.13%（228/230），差异有统计学意义（＜0.05）；C组对21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征的诊断符合率均为100%。充分证明唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测能有效检测出21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征，整体对DS的诊断敏感度、特异度及准确率高，为临床诊断胎儿是否存在染色体非整倍体提供了可靠依据。

综上所述，孕妇中期唐氏筛查联合外周血游离胎儿DNA检测的诊断价值确切，诊断准确率高，且安全无创，可为临床早期诊断DS及终止妊娠提供可靠依据，值得临床应用。