免疫组化在恶性浆膜腔积液患者中的诊断效果及与预后的相关性研究

杨春兰

（新疆生产建设兵团第六师医院病理科 新疆 五家渠 831300)

1.前言

浆膜腔积液在临床上较为常见，尤其是对于浆膜腔积液作为唯一体征的就诊患者而言，医护人员通过细胞学的检查其良恶性，这对患者疾病的诊断、治疗以及预后都有着重要的意义。由于传统的细胞学图片诊断较难分辨出患者肿瘤的来源以及分型，因此晚期患者获得组织学标本的几率很小，因此在日常工作中利用浆膜腔积液样本制备细胞蜡块，并进行相应的免疫组化检验，可提升总体的肿瘤诊断效率，为肿瘤的个体治疗提供了参考依据[1]。所以为了能够进一步完善对恶性浆膜腔积液患者的治疗方案，我院主张将细胞蜡块切片免疫组化标记应用于恶性浆膜腔积液病理诊断中，为探寻这一方案是否值得在临床上推广，本文对此展开了研究，现具体内容如下。

2.资料与方法

2.1 一般资料

将2016年4月—2018年3月在我院治疗并留院观察的60例恶性浆膜腔积液患者作为研究对象，并按照治疗药物的不同进行随机分组。将使用传统细胞学涂片检测的30例患者视为对照组，将其余30例患者使用细胞蜡块切片免疫组化标记检测纳入观察组。对照组中男患者10例，女患者20例；年龄范围在35～60岁之间，平均年龄为（46.13±2.12）岁；送检标本：胸水10例，腹水15例，心包积液5例。观察组中男患者11例，女患者19例；年龄范围在36～61之间，平均年龄为（46.25±2.56）岁；送检标本：胸水15例，腹水10例，心包积液5例。将两组患者的一般资料进行比对，发现组间数据差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

2.2 检测方法

给予对照组患者常规细胞学涂片检测，操作方法如下：送检的30例恶性浆膜腔积液标本中，每例标本内100毫升容量均置入离心管中，每分钟2000转并且低速离心旋转10分钟。与此同时，丢弃上清液所保留的沉淀物，取沉淀物涂片，将湿片放入90%乙醇溶液中固定，并使用常规HE进行染色[2]。最后使用BD公司生产的液基细胞沉降式制片染色机，按照上述的操作步骤进行制片。在细胞快切片及HE染色方面。使用标本100ml置入一次性的离心管中，经过低速离心机每分钟2000赚的碎度，离心15分钟，弃上清液，如果离心后沉淀物较少则需要多次加入膜腔积液重复离心，并在沉淀物足够的情况下形成固块，手机底部沉淀物，放入包埋盒内，待经过10%中性福尔马林固定后，进行全自动脱水机脱水、包埋、切片以及HE染色。给予观察组患者细胞蜡块切片免疫组化标记检测，操作方法如下：首先进行细胞蜡块的制备，细胞蜡块制作是将患者的检体液标本送入标本室并放置20分钟，再吸取瓶底液体60毫升，分别放置在4只离心管内，每分钟2500转，离心5分钟，弃上清液，再将4只离心管内的沉淀物合并入1只离心管后再次进行离心，随后将离心沉淀物用滤纸包裹后放置4%中性甲醛内并固定3小时以上，待固定完毕后进行常规处理，石蜡包埋切片以及HE染色。其次进行免疫组化，采用BD公司生产的全自动免疫组化染色机进行免疫组化染色。针对来源不明的腺癌，男性患者常规选择CK7、CK12、Villin等标记，女性患者常规选择WT-1、CA125、GCDFP-15等标记，针对间皮细胞难以区别的患者，需增加MC、calretinin、CK5/6标记。所有的抗体均在福州生物技术有限公司选购，常规设置为阳性、阴性对照。

2.3 观察指标

观察传统细胞学涂片检测和细胞蜡块切片免疫组化标记检测胸腹水的检出率，同时对所有患者的恶性浆膜腔积液的细胞学特点、细胞涂片、细胞切片、免疫组化的病理结果和临床预后的差异性进行分析。

2.4 统计学处理

将相关数据用SPSS20.0统计学软件进行分析处理，使用（±s）表示计量资料，使用t进行组间数据对比，若P值小于0.05，说明两组数据的差异具有统计学意义。

3.分析

3.1 分析恶性浆膜腔积液的细胞学特点

典型的腺癌细胞主要特点有：粘附性强、经常凝聚成团、呈现出腺样排列、核浆增大，但分化较好的腺癌细胞异型性、核仁不明显、与增生的间皮细胞难以鉴别。鳞状细胞癌、恶性黑色素瘤以及淋巴癌细胞缺乏粘附性，常常弥漫或者散在分布。

3.2 分析所有患者细胞涂片、细胞切片、免疫组化病理结果

60例恶性浆膜腔积液标本中，20例有恶性细胞，30例有疑似异型细胞。恶性标本中腺癌10例，其与10例经过参考相关的临床资料后初步考虑为神经内分泌癌5例，恶性间皮瘤3例、淋巴癌2例。细胞学涂片中的腺癌细胞呈现出球星团状，与之相比，细胞蜡块切片中的腺癌细胞的形态结构与其有较高的相似之处，根据分化程度的不同，癌细胞可凝聚成腺管状、润透装以及菊形状的腺样结构。县癌细胞具有较为明显的异型性，背景中的间皮细胞多分散排列，少数形成腺腔。其他的肿瘤病例中涂片和细胞蜡块切片细胞形态基本相似，但石蜡切片中肿瘤细胞较为集中，且固定性较好，有利于免疫组化检测。30例有疑似异型细胞病例中，有12例细胞涂片细胞出现松散状态，并且核质增大，细胞的大小较为一致，初步考虑为增生间皮细胞，细胞蜡块切片中的细胞排列比较集中，偶尔有腺腔样的结构，个别呈现出印戒样，有些细胞核大稍浓染，呈一定的异型性，所以需要与腺癌进行鉴别。60例患者中有30例患者进行了免疫组化染色，并根据免疫组化结果来确定细胞性质以及可能的来源。结果中显示：抗体呈色清晰，背景干净，未见非特异性着色。30例腺癌中除了3例无临床相关资料证实外，其余均经过临床检查证实。

4.结果

4.1 两组患者胸腹水肿瘤细胞阳性检出率比较

如表1所示，观察组检出的阳性率高于对照组，组间差异具有统计意义（P＜0.05）。

表1 两组患者胸腹水肿瘤细胞阳性检出率对比（n/%）

4.2 免疫组化结果与患者预后的关系

60例患者经过随访22个月的调查，从中发现阳性患者（30例）的1年生存率低于阴性患者（30例），且P＜0.05，组间差异具有统计意义。

表2 恶性膜腔积液阳性组和阴性组1年生存率对比（%）

5.讨论

细胞蜡块技术在国外成为细胞学诊断上作为常规的一项技术，目前国内的部分医院已逐步开展。细胞蜡块技术的要点在于将标本置于离心沉淀的基础上，经过甲醛固定液的处理形成细胞块，然后再进行常规脱水及其切片染色。与常规的细胞学涂片相比，细胞蜡块切片更能在组织学形态上最为接近组织学切片，并且结构清晰，从而减少了细胞学制片中的误诊率。采用细胞蜡块切片不仅可以提升切片的制作，保存较为完整的细胞，提高临床检出率，同时还可以对患者进行免疫组化染色，进一步地确定患者转移性肿瘤的组织来源。

免疫组化是外科病理诊断中常见的技术之一，其诊断结果有助于确定患者肿瘤的额良性以及组织的来源。本次研究中发现胸腹水以转移性腺癌较为多见，并且能筛选出多种抗体，对观察组患者进行恶性浆膜腔积液的标记，结果表明，利用免疫组化加之细胞蜡块切片的配合有助于确定转移性肿瘤组织的来源[3]。例如TTF-1、CDX-2等组合可使用起源组织不明腺癌的鉴别诊断。TTF-1主要用于原发性肺癌的标记物，其在原发性肺腺癌的敏感性为73%；CDX-2是基因系尾型同源盒基因，对正常的肠上皮具有相对的特异性，相对于其他的标志物，CDX-2对结直肠癌的特异性最高，并且敏感度高达90%[4]。因此通过运用抗体组合基本特征可帮助确定患者恶性浆膜腔积液的来源，为临床的诊断提供了重要的指导作用。

一直以来，有关恶性浆膜腔积液阳性患者的预后问题尚存在一些争议，相关报道指出不吸烟的恶性浆膜腔积液患者术后与阴性患者比较有着较差的无疾病生存期，在恶性浆膜腔积液患者确诊后的1年内，疾病的进展以及复发率均是阴性患者的2倍[5]。如表2所示，阳性患者的生存率低于阴性患者，从而可推测出恶性浆膜腔积液阳性可能影响患者预后不良。

综上所述，在对恶性浆膜腔积液患者的治疗诊断过程中，对患者采取细胞蜡块切片免疫组化标记检测可提高阳性检出率，值得在临床上推广应用。