微生物标本培养前行涂片革兰染色镜检的临床价值探讨

章瑀颖

（凉山彝族自治州第二人民医院检验科 四川 西昌 615000）

目前，随着细菌耐药性的不断升高，同时国家进一步深入开展整治抗菌药物，微生物检测在发挥着重要作用，临床上对微生物检测结果的依赖性日益增加。对于感染性疾病，微生物培养、检验及药物敏感性的结果日益成为指导疾病诊断和治疗的重要依据之一。检验结果的准确可靠性直接关系到医生的用药是否有效，影响着患者的治疗效果和健康水平[1-2]。然而有何及时有效筛除不合格样本，发现标本留取过程中污染情况十分重要，可有效降低标本培养误差及减少资源浪费。故本研究旨在探讨微生物标本培养前开展涂片革兰染色镜检的意义，为临床检验工作提供一定的参考依据，现报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选择2017年3月—2018年3月期间在凉山彝族自治州第二人民医院门诊和病区进行采集并送至检验科进行微生物培养的微生物标本200例纳入研究，本研究中所有样本均为采样人员严格遵循无菌操作进行。其中，110例为通过自然咳痰法收集的痰液标本；40例为通过采集患者的尿液获得的尿液标本；分泌物标本30例；其他标本共计20例。其中，实验组在培养前进行革兰染色镜检，对照组直接给予微生物标本培养。两组标本的类型、数量等资料比较，差异均不显著（P＞0.05）。

1.2 方法

涂片革兰染色镜检：用无菌棉签取痰液、分泌物以及脓液标本中脓性、血性或黏性的部位；尿液等则取新鲜中段尿样本置于无菌离心管，低速（1500r/min）离心10～15min，取沉淀待用。取一块洁净的载玻片，于中央滴一滴0.9% NaCl的溶液，用无菌棉签蘸取适量样本，用无菌针混合均匀后自然晾干。风干标本，然后置于酒精灯上加热干燥，之后采取革兰染色、镜检[1]。

标本培养与鉴定：在无菌的环境中，将痰液标本接种在血平板、巧克力板等无菌培养基中，分泌物、尿液等标本则接种至血平板、麦康凯平板上，接种完成后置于33～37℃、5.0% CO2的培养箱中进行培养。培养24~48 h后观察菌落、优先致病菌等，随后挑取菌落给予涂片、革兰染色以及镜检操作，用ATB微生物仪器进行鉴定。

1.3 判定标准

合格标本及污染标本的评定如下：

合格标准：痰液标本其外观呈脓性、血阳性及粘稠性，在低倍镜下观察白细胞不少于25个、鳞状上皮细胞数量不大于10个的标本定义为合格。对于某些标本，虽然白细胞数量小于25，但在低倍镜下观察到明显的致病菌形态或明显致病菌染色形态，实验人员需立即进行记录培养并回报上述实验结果[2]。

尿液标本需在油镜下观察，通常需要观察10个油镜视野然后计算平均值。若平均每个高倍镜视野下出现1个以上的细菌，则表明具有较大感染的可能性，建议重新留取标本送检。同时显微镜下观察细菌的种类，若细菌的种类数大于3，则可能出现标本被污染的情况，需实验人员重新留样观察[3]。

分泌物标本：无菌环境中采集标本，如果出现较多的鳞状上皮细胞，则提示标本采集过程出现污染的可能性，或者镜检时观察到2～3种细菌，也表明标本存在被污染的可能性[4]。

1.4 统计学方法

选用软件SPSS19.0进行统计学分析。阳性率以%表示，采用2检验分析，以P＜0.05为差异对比有显著性。

2.结果

实验组培养前涂片革兰染色，其中有11例标本为不合格标本，培养结果显示阳性57例，阳性率为28.5%，而对照组未进行涂片革兰染色，直接进行培养，结果阳性67例，阳性检出率为33.5%，以上差异具有统计学意义（χ2=4.12，P＜0.05）。

3.讨论

目前在微生物标本检测过程中进行革兰染色，随后通过显微镜对微生物标本进行观察，通过形态、染色特征等镜检结果可确定标本中是否含致病菌，对于临床鉴别、确定致病菌具有一定的意义。医院人流量大且细菌较多，样本留取过程中可能会出现样本污染的情况，若未及时排除则可能出现假阳性的结果。对于微生物标本培养前涂片革兰染色镜检，可及时发现标本中的异常情况，尤其提前筛除不合格的样本，提高微生物标本培养的质量，降低患者的经济损失及有效减少医疗资源的浪费[5]。

在本研究中，实验组阳性57例，阳性率为28.5%，对照组阳性67例，阳性检出率为33.5%，以上差异对比有显著性（P＜0.05）。微生物标本培养前涂片革兰染色镜检与培养结果有明显的相关性，临床上可以通过此结果得到感染信息，对临床用药起到一定的参考作用。两组结果的显著差异性说明先通过革兰染色镜检后再培养，能够明显减小微生物培养的阳性率，这与已有的研究结果保持一致[3,5]。

综上，微生物标本培养前给予涂片镜检能够明显提升培养质量，降低培养假阳性的发生。