乳腺癌p53与Ki-67和TopoⅡ的相关性研究及其预后价值探讨

吴韶娜 方亚

（1长治市第二人民医院病理科 山西 长治 046000）

（2厦门大学预防医学系 福建 厦门 361005）

本研究拟通过p53、Ki-67和DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)各指标的蛋白检测以及与临床病理特征的关系和各蛋白之间的相关性，来探讨其对乳腺癌患者的预后价值。

1.资料及方法

1.1 资料来源

厦门市某医院2003年2月－2008年5月接受乳腺癌手术的乳腺癌病例。

1.2 检测方法

所有标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4μm连续切片，采用二步法（EliVision试剂盒）检测。采用已知乳腺癌阳性标本作阳性对照；以PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判断

所有切片采用双盲观察，p53、Ki-67和TopoⅡ以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性。阳性百分率采用半定量判断标准，即选5个不同高倍视野，每个视野计数100个细胞，计算出其中阳性细胞的百分率。阳性细胞数＜10%为（-），10%～25%为（+），26%～50%为（++），＞50%为（+++）。

1.4 随访

所有患者均采用电话或者信件随访的方式。随访观察的起点为患者手术日期，随访截止日期为2009年5月20日，随访观察终点事件为复发、转移或死亡。

1.5 统计学方法

采用SPSS13.0软件进行数据统计，各组间率的比较采用χ2检验，配对资料采用McNemar检验，小概率事件采用Fisher确切概率法，数据相关性分析采用Spearman秩相关分析，生存数据分析采用Kaplan-Meier法，采用Log-rank和Breslow法进行生存曲线的比较，生存因素分析采用Cox比例风险回归模型，P＜0.05表示有统计学意义。

2.结果

2.1 一般情况

共收集经过病理学诊断的乳腺癌病例169例，均为女性，年龄23～90岁，平均48.17岁，平均随访时间23.18个月，其中26例复发，24例转移，13例死亡。

2.2 p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白在乳腺癌组织中的表达以及与临床病理参数之间的关系

p53蛋白阳性率为37.3%（22/59），p53蛋白阳性率在ER阳性组和ER阴性两组之间差异有统计学意义。Ki-67蛋白阳性率为57.9%（11/19），Ki-67蛋白阳性率在有无淋巴结转移间差异有统计学意义，ER阳性组与ER阴性组的Ki-67蛋白阳性率差异有统计学意义。TopoⅡ蛋白阳性率为39.5%（17/43），TopoⅡ蛋白阳性率在ER阳性组和ER阴性两组之间差异有统计学意义（表）。

表 p53、Ki-67、TopoⅡ蛋白表达与乳腺癌临床病理参数之间的关系

2.3 p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白表达之间的相关性分析

spearman相关分析显示，Ki-67蛋白表达与ER蛋白表达呈正相关(rs=0.570，P＜0.05)， ER蛋白表达和PR蛋白表达呈正相关（rs=0.435，P＜0.05），p53蛋白表达和TopoⅡ蛋白表达呈正相关（rs=0.629，P＜0.05），即p53蛋白阳性表达率越高，TopoⅡ蛋白阳性表达率也越高。

2.4 p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白表达与乳腺癌患者预后的关系

以复发或转移或死亡为乳腺癌患者预后的观察终点，采用Kaplan-Meier法分析p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白表达与乳腺癌患者预后之间的关系，结果显示，p53蛋白表达率不同，患者生存期也有明显的不同（图1），p53蛋白阳性患者的5年生存率为78%，p53蛋白阴性患者的5年生存率为89%，经统计分析，两者之间的差异有统计学意义（χ2=4.14，P=0.042），说明p53阳性患者的生存期比阴性患者的生存期短。Cox比例风险回归模型分析，p53阳性患者发生终点事件的危险度（OR）是阴性患者的2.16倍。而Ki-67、TopoⅡ蛋白对患者预后均无统计学意义。

图1 p53与患者预后的生存曲线

3.讨论

分子标志物在乳腺癌诊断、判断预后和治疗方案中的价值越来越受到人们的重视。本研究对乳腺癌患者p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白联合检测，初步探讨其在临床的应用价值以及与预后的相关性，有助于评估乳腺癌患者的预后，并对临床治疗有一定指导意义。

本研究结果表明，PR受体阳性者p53蛋白阳性表达率高于PR阴性者，且ER受体阳性者p53蛋白阳性表达率高于ER阴性者，说明p53蛋白与ER、PR密切相关，从而可能通过ER、PR的表达来推测p53蛋白的表达情况。

TopoⅡ是存在于细胞核内催化DNA拓扑异构体相互转换的一种酶，TopoⅡ含量和活性的降低可导致肿瘤细胞产生耐药。近年来免疫组化研究显示，在乳腺癌中TopoⅡ可以作为细胞增殖的可靠指标［1］。TopoⅡ在正常细胞中不易检测到，而在很多肿瘤中，尤其在低分化肿瘤内呈高表达状态。本实验结果显示，TopoⅡ蛋白阳性表达率在ER、PR受体分组间差异有统计学意义，说明TopoⅡ蛋白表达与ER、PR受体表达密切相关。

我们进一步探讨了p53蛋白表达与TopoⅡ蛋白表达之间的关系，结果显示，p53蛋白表达与TopoⅡ蛋白表达呈正相关，即随着p53阳性表达率的增高，TopoⅡ阳性表达率也增高，大多乳腺癌患者p53基因突变，导致p53蛋白过表达，可增加TopoⅡ蛋白表达，这可能是p53蛋白高表达的乳腺癌患者对化疗药物不敏感的原因之一，这也可能是p53阳性患者5年生存率低的原因之一，p53突变可能是乳腺癌病情进展恶化的重要因素。本研究结果还表明，p53阳性表达者发生终点事件的风险是阴性表达者的2.16倍，如此将p53对乳腺癌患者预后风险评估量化，可对乳腺癌生存预后有一定的参考价值。

Ki-67是在增殖细胞中表达的一种核抗原，也是目前较为肯定的核增殖标志物[2-3]。国内外许多研究表明，Ki-67在多种恶性肿瘤中的表达远高于相应的正常组织，可见Ki-67有可能作为筛检癌前人群中髙危个体的生物学标志物。本研究显示，Ki-67蛋白表达与ER受体呈正相关，说明随着ER受体阳性表达率的增高，Ki-67蛋白阳性表达率也增高。

Ki-67和P53蛋白是乳腺癌中常用的检测及预测评估患者治疗及预后的免疫组化指标［4-5］。本研究结果显示，p53可对乳腺癌患者进行预后风险评估，而TopoⅡ与p53密切相关，Ki-67与乳腺癌转移密切相关，以上提示，对乳腺癌患者进行上述指标检测有助于评估肿瘤的临床与预后，并对治疗方案选择有一定指导意义。