Sonic hedgehog信号通路在结直肠癌发生发展的进程中作用机制研究

孙志涛

【摘 要】：目的：研究Sonic hedgehog信号通路在结直肠癌发生发展的进程中作用机制。方法：随机选择2019年1月-2019年12月至我院行结直肠癌手术的患者40例。取所有患者术中病灶部位组织和距离肿瘤10cm以上的正常粘膜组织行免疫组化检查，比较患者正常结直肠组织和结直肠癌组织中SHh的表达情况以及阳性表达率。结果：正常组织中SHh表达以（-）、+为主，癌组织中表达以+++、++++表达为主。正常组织中SHh表达阳性率为2.5%，明显低于癌组织中82.50%，且具有统计学差异（p<0.05）。结论：Sonic hedgehog信号通路在结直肠癌病灶中呈现高表达，提示与结直肠癌的发生发展有关。

【关键词】：SHh、结直肠癌;传导通路

结直肠癌是临床常见的恶性肿瘤，但是其病因病机尚未完全明确。配体音刺猬因子（Sonic hedgehog，SHh）是哺乳动物Hedgehog（Hh）信号通路的主要成员之一，其介导的做种靶基因在脊椎动物的胚胎发育过程中起到重要的作用[1]。而研究发现，Hh信号通路发生异常活化肯与肿瘤的发生发展密切相关。为了观察SHh信号通路在结直肠癌发生发展进程中的作用机制，我院进行了本次研究，以便为结直肠癌的治疗寻找新的靶点。

1 资料与方法

1.1 患者选择

随机选择2019年1月-2019年12月至我院行结直肠癌手术的患者40例进行临床研究。所有患者均由术后病理检查确定诊断。其中男性患者27例，女性患者13例，年龄41-76岁，平均年龄（57.33±6.33）岁，病变部位升结肠7例，横结肠6例，降结肠8例，乙状结肠11例，直肠8例。所有患者术前均未给予放化疗以及免疫治疗。

1.2 方法

1.2.1 研究方法

取所有患者术中病灶部位组织和距离肿瘤10cm以上的正常粘膜组织。将取得组织修剪成 1.5 cm×2.0cm ×0.3cm大小的组织块置于10% 中性甲醛溶液中固定8-24 h ，常规制备蜡块，放置于- 20℃，冰箱干燥保存，行免疫组化方法检测。免疫免疫组化实验中所需试剂兔抗人SHh单克隆抗体、SP试剂盒、DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥公司。SABC免疫组化试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。

采集到的患者病理组织常规制成蜡块，组织切片，在68℃下烤片12h，常规行二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水，放置于98℃的EDTA缓冲液中煮沸3min，自然冷却20min，冷水冲洗高压锅至室温，PBS冲洗3次，每次2min，以修复抗原。阻断灭活内源性过氧化物酶，滴加一抗，室温放置3h，使用PBS冲洗3次，每次2min，滴加二抗，37℃孵育30min，PBS冲洗3次，每次2min，给予DAB反应染色，常规脱水，透明、干燥、封片。（实验过程太陈旧）

1.2.2 分析指标

比较患者正常结直肠组织和结直肠癌组织中SHh的表达情况以及阳性表达率。

SHh在细胞质上出现棕黄色染色为阳性细胞，使用半定量积分法进行评估[2]，细胞无染色为（-），淡黄色为+，浅棕黄色为++，棕黄色为+++，深棕黄色或者棕褐色为++++，其中（-）、+为阴性，++、+++、+++为阳性。

1.3 数据处理

用SPSS19.0统计学数据处理软件处理研究中所有相关数据，计数资料采用（n，%）表示，采用χ2检验，以 p <0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

正常组织中SHh表達以（-）、+为主，癌组织中表达以+++、++++表达为主。正常组织中SHh表达阳性率为2.5%，明显低于癌组织中82.50%，且具有统计学差异（p<0.05），详见表1、表2。

3 讨论

Hh信号通路与结直肠癌的发生和发展之间的关系仍然处于研究中。Monzo[3]等研究发现SHh在57例结直肠癌患者中肿瘤组织的表达水平明显高于正常组织。但是Chatel]等在7中结直肠癌细胞系中没有1个细胞系表达出完整的Hh信号通路成员，因此对于SHh在结直肠癌中的作用和作用机制仍然有所争议。

Hedgehog（Hh）信号分子是由信号细胞所分泌，通常作用范围在20个细胞之内，其生产在时间和空间上均被严格限制，能够在N端不同的氨基酸残基微单发生胆固醇化和软脂酰化修饰，进而达到制约其扩散的目的，同时能够增强与质膜的亲和性[4]。当Hh结合靶细胞膜上受体Ptc之后，能够释放Smo受体以阻断Pthc蛋白的功能，进而在肿瘤细胞的发生和发展的过程中起到作用。从本次研究来看，正常组织中SHh表达以（-）、+为主，癌组织中表达以+++、++++表达为主。正常组织中SHh表达阳性率为2.5%，明显低于癌组织中82.50%，说明Sonichedgehog信号通路在结直肠癌病灶中呈现高表达，提示与结直肠癌的发生发展有关。

参考文献

付祥胜.结直肠癌中Hedgehog信号通路的配体依赖性活性改变及其表观修饰机制研究[D].南方医科大学，2009.

翁子毅，子树明，杨明，等.Hedgehog信号通路活化在结直肠病变的意义[J].上海医学，2011（05）：3+55-57.

王华，李奇奇，朱子清，等.结直肠癌中Hedgehog信号通路的研究进展[J].生命的化学，2018，38（05）：69-74.

郭丽梅，杜娟，廖鹰，等.Hedgehog信号通路转录因子Gli1蛋白在结直肠癌组织中的表达[J].肿瘤基础与临床，2016（1）：1-6.