HPLC法测定六味地黄胶囊中酒萸肉的含量

时间：2024-05-17

温建丽，李艳红

（山西瑞福莱药业有限公司，山西太原 030045）

1 仪器与试药

Agilent1100全自动高效液相色谱仪；KQ-250DB型数控超声波清洗器（250W，40 KHz），江苏昆山超声仪器有限公司；BP211D电子天平（德国赛多利斯公司）；马钱苷对照品（批号：111640-200503）购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用；甲醇（天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：（20090601）为色谱纯；四氢呋喃（天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：（20071026）为色谱纯；乙腈（天津四友精细化学品有限公司，批号：（080429101）为色谱纯；其余试剂为分析纯；水为双重蒸馏水。

2 系统适用性实验

色谱柱：迪马公司Diamond C18柱（250mm×4.6mm，5μm）

流动相:四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液（1∶8∶4∶87）

检测波长:236 nm；

流速:1.0mL/min；

理论板数:按马钱苷峰计算为9 889.25，符合标准规定的不低于4 000。

3 提取时间的考察

在提取时间上，超声处理选择了10min、15min、20min，结果表明，超声处理10min的含量为1.049mg略低，而超声处理20min的含量1.090mg与超声处理15min的含量1.086mg无显著差异，所以最终选择超声处理时间为15min；回流提取时间选择了30min、60min、90min，结果表明，回流提取 30min的含量 0.471mg偏低，而回流提取90min的含量0.962mg与回流提取60min的含量0.955mg无显著差异，所以最终选择回流提取时间为60min。

4 线性关系的考察

精密称取马钱苷对照品8.02mg，加50%甲醇溶解并稀释至100mL，得浓度为 80.2μg·mL-1的贮备液，精密吸取 0、2.5、5、10、12.5、15、25mL分别置 25mL的量瓶中，加 50%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μL，依次注入高效液相色谱仪，按正文所附的色谱条件测定峰面积，以马钱苷进样量（μg）为横坐标（X），马钱苷峰面积为纵坐标（Y）；绘制标准曲线，得回归方程为：y=69.238x-7.2 354（r=0.9 992），结果表明，马钱苷浓度在 0～0.802μg范围内线性关系良好，结果见表1。

表1

5 专属性试验

按处方比例制备酒萸肉药材的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性空白对照溶液。取阴性空白对照溶液，按上述色谱条件测定，结果空白对照溶液在与马钱苷对照品相同保留时间处，未显示明显的色谱峰，认为无干扰。

6 精密度试验

精密吸取对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，按正文所附的色谱条件试验，重复测定6次，马钱苷峰面积的RSD为：0.12%（n=6），结果见表 2。

表2

7 稳定性试验

取按正文所附方法处理的六味地黄胶囊供试品同一份溶液,按正文所附的色谱条件试验，在 0，1，2，3，4，5，6，7，24 h 分别进样10μL，记录峰面积，结果9次进样马钱苷峰面积的平均值为:882.10 141，RSD为2.06%（n=9），表明供试品溶液较稳定，结果见表3。

8 重复性试验

取同一批六味地黄胶囊样品（批号为20090201）6份,分别按正文供试品测定法测定,测得马钱苷的平均含量为1.36mg/g，RSD为0.59%（n=6），结果见表4。

表3

表4

9 加样回收率试验

取已知含量的六味地黄胶囊样品（批号为:20090201）约0.15 g（马钱苷含量约为0.6 894 mg），精密加入马钱苷对照品溶液（42.3μg/mL）10mL、15mL、20mL各 3份，分别置上述量瓶中，混匀，按正文所附的供试品溶液制备方法配制成低、中、高3个浓度的供试品溶液，在正文测定条件下进行测定其含量，计算回收率,高、中、低3个浓度的平均回收率分别为:102.07%、99.05%、101.02%,平均回收率为:100.71%，其 RSD为:1.37%（n=9），结果见表5。