养血荣筋丸中橙皮苷含量测定

王慧

（哈药集团中药二厂质检中心，黑龙江 哈尔滨 150078）

前言

养血荣筋丸由铁丝威灵仙（酒炙）、伸筋草、补骨脂（盐炒）、油松节、赤芍、党参、何首乌（黑豆酒炙）、陈皮、鸡血藤、透骨草等组成。养血荣筋丸具有养血荣筋、祛风通络的作用。养血荣筋丸主要用于筋骨疼痛、关节不利、肢体麻木、肌肉萎缩、肿胀等。陈皮，别名：广橘皮、新会皮、广陈皮、橘皮、贵老等。陈皮常用于便溏泄泻、脾虚饮食减少、胸腹胀满、湿阻中焦、脘腹痞胀、消化不良、纳呆便溏，痰湿壅肺之咳嗽气喘等症状。陈皮具有抗炎、抗溃疡、利胆、冠状血管扩张、促进消化液的分泌、消除肠道积气等作用。本文采用高效液相法测定养血荣筋丸中橙皮苷含量。本实验采用高效液相色谱法对养血荣筋丸中的橙皮苷的进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器：Waters515高效液相色谱仪；N3000色谱工作站；Waters可变波长检测器。赛多利斯BPZn-D分析天平；)；KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；十万分之一电子分析天平 (德国塞多利斯)；PHS一3TC(0.01级)精密数显酸度计(上海天达仪器有限公司)；PL5124 型纯水机(PALL)；索氏提取器。

1.2 色谱柱：安捷伦 C18色谱柱（218 mm×4.6mm，5μm）。

1.3 对照品：橙皮苷 购自中国药品生物制品检定所。

1.4 试剂：甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

1.5 试药：养血荣筋丸（批号：100801，100802，100803）

2 测定方法确定

2.1 色谱条件

2.1.1 流动相的选择：分别考察甲醇-水 (15∶85)，甲醇一醋酸一水(35:4：61)，甲醇-水(18∶92)不同比例的流动相，结果以甲醇一醋酸一水(35:4：61)为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇一醋酸一水(35:4：61)为流动相为流动相。

2.1.2 检测波长的选择：制备橙皮苷对照品稀释液照紫外-可见分光光度法（中国药典2010版一部 附录Ⅴ A），于190～900nm波长范围内进行全波长光谱扫描，记录吸收光谱。在283nm处有最大吸收峰，故选用283nm为检测波长。

依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：甲醇一醋酸一水(35:4：61)，检测波长：283nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按橙皮苷峰计算应不得低于2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取橙皮苷对照品适量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得。

2.3 提取方法确定

2.3.1 提取溶媒的选择

在供试品溶液制备中，分别选用了乙醇、石油醚脱色后甲醇提取、甲醇进行加热回流提取，结果表明石油醚脱色后甲醇提取分离效果、峰形及含量为最好，所以选择石油醚脱色后甲醇进行热回流提取。

2.3.2 提取时间的选择

取供试品适量，用石油醚加热回流提取分别提取2、3、4小时，弃石油醚，加适量甲醇，再加热回流至提取液无色，放冷，过滤，挥干甲醇提取液，残渣用50ml甲醇溶解，摇匀，滤过。供试品溶液的含量结果表明：三种提取时间结果无明显差异，为保证脱色完全并缩短处理时间，采用石油醚加热回流提取3小时后，弃石油醚，加适量甲醇，再加热回流至提取液无色。

2.3.3 供试品溶液的制备

取装量差异项下的供试品，剪碎，混匀，称取24g，置具索氏提取中，加入石油醚适量，加热回流提取3小时，弃石油醚，药渣用适量甲醇热回流提取至提取液无色，放冷，过滤，挥干甲醇提取液，残渣用50ml甲醇溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 专属性试验

依照处方取除陈皮以外的药材，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照2.3.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在橙皮苷出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

2.5 精密度试验

精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇使溶解，制成浓度为0.4mg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.91%，表明本方法精密度良好。

2.6 对照品的线性考察

精密称取橙皮苷对照品15mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取 0.4、0.6、1.2、1.6、2.0mL，置于5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积(Y)为纵坐标，对照品进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：y=11351.89x-1213.86（r=0.99992）。结果表明，橙皮苷在 0.12～0.6mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.7 重现性试验

称取同一批的养血荣筋丸样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为1.01%，结果表明此方法的重现性良好。

2.8 准确度试验

精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的橙皮苷对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率为99.0%，RSD=0.95%。结果表明此方法的回收率良好。

2.9 样品稳定性试验

取同一批养血荣筋丸样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第 0、2、4、6、8、10 小时，精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定养血荣筋丸中橙皮苷的RSD=0.81%。结果表明供试品10小时内稳定。

2.10 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定养血荣筋丸三批样品中橙皮苷的含量，结果三批样品的含量分别为 5.2、5.3、5.2mg·g-1。

讨论

本实验表明此方法可用于养血荣筋丸中橙皮苷的含量测定。养血荣筋丸中橙皮苷的含量为每克不低于5.2mg.

[1]袁丹,王青,王启隆,谢媛媛,潘英妮,毕开顺;枳实及其提取物质量评价法的研究[J];中国药学杂志;2005，15.

[2]国家药典委员会.中国药典[S].北京：二部，化学工业出版社，2010.