高效液相色谱法测定水产品中喹乙醇的残留量

刘文侠　郑景娇

摘 要：为测定水产品中喹乙醇的残留量，建立了高效液相色谱-固相萃取的测定方法。此方法检出限低、回收率高、定性可靠、定量准确，适合于水产品中喹乙醇残留的检测。对采用固相萃取净化、反相色谱柱分离、紫外检测器检测、外标法定量检测水产品样品进行实验。

关键词：水产行业；液液萃取；残留量；高效液相色谱法

中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A DOI：10.15913/j.cnki.kjycx.2017.09.137

喹乙醇，又称“喹酰胺醇”，是一种化学合成抗菌促生长的饲料添加剂，可促进动物生长，提高饲料转化率和利用率，被广泛用于水产养殖动物饲料添加剂中，它对鱼类致病菌均有较好的抑制作用，可用于淡水养殖鱼类败血症等病症的防治。但是喹乙醇添加过量会引起中毒，且对大部分动物有致畸作用，对人类也有潜在的“三致”作用。为保证食品安全及我国水产品的质量安全，建立有效的水产品中喹乙醇的测量方法十分必要。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

实验仪器：液相色谱仪（岛津HPLC-20AD），配SPD-20AV紫外检测器；HU3120B超声波清洗器（天津恒奥）；VTX3000L漩涡混匀器（日本EYELA公司）；TDL-5-A台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；固相萃取仪（上海安谱）。

实验试剂：喹乙醇（纯度99.0%，Dr.Ehrenstorfer公司）。先用少量水溶解，再用色谱纯甲醇溶解配制成100 mg/L标准储备液，再根据需要用体积分数为15%的甲醇溶液稀释成合适的标准工作液，4 ℃避光保存。

1.2 色谱条件

色谱柱为WondaSil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），色谱柱温度为35 ℃。流动相：体积分数为15%的甲醇溶液，流速1.0 mL/min。检测器波长380 nm，进样量20 μL。

1.3 实验方法

1.3.1 提取

称取混合均匀的匀浆试样10 g（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入10 mL体积分数为5%的甲醇溶液，超声提取10 min，以5 000 r/min离心10 min；上清液转移至另一50 mL离心管中，重复提取一次，合并提取液，向提取液中加入1 mL质量分数为16%的NaCl溶液，用体积分数为15%的甲醇溶液定容至25 mL（实验过程尽量避免光线直射）。

1.3.2 净化浓缩

向定容后的提取液中加入10 mL正己烷，充分混匀后，以5 000 r/min离心10 min，弃取上层溶液，下层净化溶液待用。

给每个样品准备一根HLB固相萃取小柱，预先用4 mL甲醇、4 mL水活化小柱，吸取10 mL净化溶液加入活化后的固相萃取小柱，依次用4 mL0.02 mol/L的HCl溶液、0.1 mol/L的HCl溶液和水淋洗小柱，最后用3 mL體积分数为40%的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液。用0.45 μm针头滤膜过滤至进样瓶中，在色谱条件下分析测定。

2 结果与讨论

2.1 提取和净化方式的选择

分别按照实验方法和水产行业标准方法SC/T 3019—2004规定的有机溶剂提取、液液萃取净化后蒸发浓缩的方法对样品进行提取、净化和浓缩。结果表明，经过甲醇水溶液提取、正己烷除脂、固相萃取小柱净化的样品平均加标回收率（90%）比有机溶剂提取、液液萃取净化后蒸发浓缩的方法平均加标回收率（70%）高，本实验方法的样品重复性也明显较好。

本实验方法对于水产品样品中大量的脂类干扰物的去除，仍采用传统的正己烷萃取除脂法，为了减少萃取过程中乳化现象的产生，在萃取前加入了NaCl溶液，利用NaCl的强电解质性增加液体的表面张力，减少乳化现象。液液萃取净化直接蒸发浓缩后的草鱼加标色谱图和固相萃取小柱净化富集的草鱼加标色谱图的比较表明：固相萃取小柱净化富集的样品色谱图干扰峰明显少于液液萃取净化直接蒸发浓缩后的色谱图。本实验选择了甲醇水溶液提取、固相萃取小柱净化浓缩样品。

2.2 SPE小柱条件的优化

由于体积分数为5%的甲醇溶液在提取样品过程中，会将水产品中的一些水溶性蛋白质、维生素等物质溶解，而这些物质在反相柱上会有保留，根据HLB小柱推荐的方法和杨文军、张丽英等人的研究结果，选用0.02 mol/L的HCl溶液和0.1 mol/L的HCl溶液依次淋洗固相萃取小柱，净化样品。为了避免HCl溶液对后续色谱分离过程产生影响，杨文军、张丽英等人在HCl淋洗结束后加入了体积分数为5%的甲醇溶液缓冲淋洗，本实验通过比较发现在检测水产品样品时，采用体积分数为5%的甲醇溶液缓冲淋洗和纯水缓冲淋洗平均加标回收率分别为60%和90%.因此本实验在洗脱前选择纯水缓冲淋洗。洗脱液选择具有足够洗脱能力的质量分数为40%的甲醇溶液洗脱，既将HLB小柱上吸附的喹乙醇全部洗脱，又避免了纯甲醇溶液进样时对喹乙醇峰形展宽的影响。

2.3 色谱条件的选择

参考水产行业标准方法，选择甲醇-水溶液（15∶85，V/V）作为流动相，柱流速1.0 mL/min，等度洗脱，采用SymmetryshieldTMRP18色谱柱分离，标准品出峰峰型对称，出峰时间较早。图1为0.50 μg/mL喹乙醇标准溶液的色谱图，图2为草鱼加标样品和草鱼空白样品色谱图。

2.4 标准曲线和方法的检出限、定量限

将100 mg/L的喹乙醇标准储备溶液利用流动相配制成质量浓度分别为0.05 mg/L、0.10 mg/L、0.20 mg/L、0.25 mg/L、0.50 mg/L、0.75 mg/L、1.00 mg/L的喹乙醇标准溶液，在色谱条件下测定，以喹乙醇的质量浓度为横坐标（ρ），峰面积为纵坐标（y）绘制标准曲线，线性回归方程为Y=5.08×104ρ-54，相关系数为r=0.999 9.

国家药物残留标准方法要求检出限对应色谱图S/N大于3；定量限对应色谱图S/N大于10，且平均加标回收率不小于75%.根据高若梅、田强兵等人对分析方法的检出限和测定下限的研究，将0.05 mg/kg的加标样品按照实验方法测定，结合平均加标回收率统计数据，本实验方法的检出限为0.02 mg/kg，方法定量限为0.05 mg/kg。

2.5 方法的精密度和回收率

分别称取10.0 g草鱼、对虾和黄鳝阴性样品各6份于离心管中，加入喹乙醇标准溶液适量，制成3个添加水平的加标样品进行方法的精密度和回收率测定，每个添加水平平行测定6次，结果见表1.方法在3个不同添加水平的相对标准偏差分别为5.8%，7.7%和2.2%，3个不同添加水平的平均回收率分别为83.2%，93.1%和94.4%.方法的加标回收率符合药物残留检测要求，精密度和回收率能满足水产品中喹乙醇的测定，采用本方法对50份样品进行了测定，均未检出喹乙醇。

3 结束语

综上所述，本实验采用部分提取液净化后直接进样分析的方法，不仅操作简单，提高了检测效率，还避免了大量使用有机试剂，减少了对环境的污染。而且此方法检出限低、重现性好、回收率高、定性可靠、定量准确，可为水产品中喹乙醇药物残留量在水产品中的测定提供准确的测量手段，为食品的安全提供了有力保障。

参考文献

[1]许峰.全自动固相萃取-气质联用检测地表水中有机氯农药[J].淮北职业技术学院学报，2017（01）.

[2]张一，王磊，王佳璇，等.固相萃取-UPLC-MS/MS法测定水中全氟化合物[J].环境监测管理与技术，2017（01）.

〔编辑：刘晓芳〕