塘虱鱼组织中氟灭菌的液相层析串联质谱仪检测方法之建立与方法确效

时间：2024-05-20

刘耀仁（鸿富锦精密电子（郑州）有限公司,郑州　450000）

刘耀仁
（鸿富锦精密电子（郑州）有限公司,郑州450000）

疾病的预防和治疗一直是养殖业者的一大难题。当疾病发生时，因养殖密度高，环境难以改善下便容易造成养殖生物大量死亡，此时养殖业者为了减少损失与控制病害，大多都会选择投喂药物来治疗疾病。本文主要对氟灭菌在塘虱鱼中的应用进行了分析与探究。

氟灭菌；串联质谱仪；塘虱鱼

疾病的预防和治疗一直是养殖业者的一大难题。当疾病发生时，因养殖密度高，环境难以改善下便容易造成养殖生物大量死亡，此时养殖业者为了减少损失与控制病害，大多都会选择投喂药物来治疗疾病。但使用药物对环境造成的冲击却往往容易被人们所忽略，药物的残留就是引发后续效应的首要原因。

1　分析方法

1.1分析方法

秤取待测样品放入50mL高速离心管中(肌肉1g；血浆、肝脏、肾脏、皮肤和脊椎骨0.1g)，加入3mL的超纯水与6mL乙酸乙酯，震荡10分钟使其混合均匀，再于15℃下以5000rpm的转速离心10分钟。收集上层液放置于透明玻璃试管中，高速离心管内的残余物质再加入3mL乙酸乙酯，重复萃取一次，合并二次的上层液，在45℃下使用氮气将其吹干，加入1mL的回溶液(乙腈:水;50:50%)震荡回溶，经过0.22微米的filter过滤，经过适当稀释后，以液相层析串联质谱仪(LC-MS/MS)进行检测。

1.2方法侦测极限

为了解分析方法所能侦测的最低浓度点，因此参考环境检验方法侦测极限测定指引NIEA-PA107确立分析方法的方法侦测极限。方法确效依据欧盟2002/657/EC决议书之规定，进行鱼体组织中FLU残留分析之确效实验，获得回收率、重复性、再现性CCα与CCβ等参数并且计算不确定度。

量测不确定度，量测不确定度的计算是参考梁(2006)的计算方式并加以修改。

建立分析残留量检测公式如下：

X－样品中待测成分的含量，微克每千克；

Ax－测定液中待测成分的峰面积；

As－标准液中待测成分的峰面积；

Cx－标准液中待测成分的含量，微克每千克；

V－定容体积，mL；

m－取样量，g

R－回收率，%

从式（1）可知，样品中FLU测定浓度的不确定度是标准溶液浓度（Cx）、样品质量（m）、定容体积（V）、样品溶液峰面积（Ax）、标准溶液峰面积（As）和回收率（R）的函数。其中峰面积为计算机自动积分所得，其不确定度可不予考虑。本次分析实验的不确定度包含以下几项：

（1）FLU标准溶液的不确定度：FLU标准溶液的不确定度包含有标准品纯度的不确定度、标准品称量的不确定度、标准储备液配制的不确定度和标准溶液稀释的不确定度构成。

（2）样品称量的不确定度：天平稳定度变异产生的不确定度，以肌肉样品为例进行计算。

（3）溶液体积的不确定度：在本方法中包含样品稀释体积以及最终回溶体积。

（4）回收率的不确定度：因仪器状态仍具有不确定度，故采用平均回收率做为计算不确定度之因素。

2　试验结果

2.1方法侦测极限(MDL)：

塘虱鱼各组织的MDL值如下。肌肉基质的MDL为1.63ng/g；血浆基质为1.25ng/ml；肝脏基质为1.01ng/g；肾脏基质为1.62ng/g；皮肤基质为1.72ng/g；脊椎骨基质为1.28ng/g。

2.2回收率与重复性：

分析塘虱鱼各组织添加样品中所含的FLU如下。300、600和900ng/g肌肉基质添加样品的平均回收率介于88.03～93.55%，变异系数介于5.64～7.08%；血浆基质添加样品的平均回收率介于83.19～95.05%，变异系数介于1.89～4.96%；肝脏基质添加样品的平均回收率介于88.72～95.31%，变异系数介于5.66～7.05%；肾脏基质添加样品的平均回收率介于83.60～95.22%，变异系数介于3.72～6.75%；皮肤基质添加样品的平均回收率介于82.54～95.34%，变异系数介于2.73～6.07%；脊椎骨基质添加样品的平均回收率介于86.10～93.24%，变异系数介于2.42～6.71%。

2.3再现性

塘虱鱼各组织的FLU分析方法重复性如下。300、600和900ng/g肌肉基质添加样品的总变异系数分别为6.89、6.44和6.17%；血浆基质添加样品的总变异系数分别为5.67、4.98和2.89%；肝脏基质添加样品的总变异系数分别为6.26、6.61和6.32%；肾脏基质添加样品的总变异系数分别为5.06、5.04和7.04%；皮肤基质添加样品的总变异系数分别为5.31、4.61和6.34%；脊椎骨基质添加样品的总变异系数分别为4.69、5.39和7.31%。

2.4CCα与CCβ

塘虱鱼各组织的FLU分析方法之CCα与CCβ结果如下。肌肉基质添加样品的CCα与CCβ分别为638和667ng/g；血浆基质添加样品分别为693和741ng/mL；肝脏基质添加样品分别为621和674ng/g；肾脏基质添加样品分别为669和706ng/g；皮肤基质添加样品分别为631和671ng/g；脊椎骨基质添加样品分别为691和762ng/g。