13种杀菌剂对葡萄灰霉病病菌的室内毒力及田间防治效果

范 昆， 曲健禄， 付 丽， 张 勇， 武海斌， 陶吉寒

(山东省果树研究所，山东泰安 271000)

葡萄灰霉病是由灰葡萄孢霉(BotrytiscinereaPers.)引起的葡萄生产中危害最大的病害之一，年度损失20%左右，发病严重的果园病穗率可达50%以上。葡萄灰霉病除在生长季危害果实外，产后的贮藏阶段也能引起毁灭性地损失[1]。

目前，生产上防治葡萄灰霉病仍以化学防治为主，由于灰霉病菌繁殖速度快、遗传变异大、适合度高，加之田间连续多年使用单一药剂防治，灰霉病菌对多菌灵、腐霉利、乙霉威等杀菌剂已产生了抗药性，甚至出现了多重抗药性[2-7]。同时，由于群众防治观念落后、重治轻防、盲目用药、滥用农药的现象比较普遍，造成农残超标、果园生态环境受到破坏，严重影响了葡萄的产量和品质，对出口创汇也造成了较大的不良影响，产值大大降低。为此，本研究选取多种低毒、低残留的杀菌剂于2014、2015年对葡萄灰霉病病菌进行室内毒力测定和田间药效试验，以期筛选出防治该病害的理想药剂，有效防治葡萄灰霉病，为葡萄优质高产提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试菌株 从山东省泰安市岱岳区南王庄村葡萄园采集病果，参照方中达的组织分离法[8]，从病果皮部病斑病健交界处切下3 mm×3 mm×1 mm的小块，放入70%乙醇溶液中消毒30 s，然后将其转入1%氯化汞溶液中消毒1 min，用无菌水清洗3遍后，置于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上。在26 ℃条件下培养3 d后挑取菌落边缘的菌丝进行病原菌的初步纯化，将纯化后的菌株在PDA试管斜面中于4 ℃冰箱中保存，备用。纯化后的菌丝培养5 d后镜检菌丝、孢子的形态，并进行病原菌鉴定[9-10]。

1.2 试验方法

1.2.2 杀菌剂对葡萄灰霉病病菌孢子萌发的影响 采用悬滴法[11]测定杀菌剂对葡萄灰霉病病菌孢子萌发的抑制作用。将灰霉病病菌置于26 ℃条件下黑暗培养3 d，促使其产孢。待产孢后，用无菌去离子水将孢子洗脱并调节孢子悬浮液浓度至1×105个/mL，并加葡萄糖配制成含糖0.01%的孢子悬浮液。将每个浓度的药液与100 μL孢子悬浮液等体积混合，分别将混合液按浓度从小到大滴1滴于凹玻片中的凹槽内，将凹玻片迅速翻转使液滴倒悬在凹玻片下表面，小心将凹玻片放于加水培养皿中，每个浓度设4个重复，以不加药者为对照。置于26 ℃培养箱中，镜检孢子萌发情况。当对照组孢子萌发率达到80%以上时即可镜检各处理组孢子的萌发情况，以孢子的芽管长度大于孢子短半径为萌发，计算孢子萌发抑制率。试验重复2次。采用机率值分析法求出各药剂对菌株孢子萌发的毒力回归方程、有效抑制中浓度(EC50)。

萌发率=萌发孢子数/检查孢子总数×100%；

抑制率=(对照组孢子萌发率-处理组孢子萌发率)/对照组孢子萌发率×100%。

1.2.3 杀菌剂对葡萄灰霉病病菌菌丝生长的影响 采用菌丝生长速率法[12]，在PDA平板上培养(26 ℃，黑暗)3 d的菌落边缘打出直径为7 mm的菌饼，分别移到含药的培养基平板上，置于26 ℃暗培养3 d，测定菌落径向线性生长量，确定药剂对菌丝生长的抑制率。每个处理重复4次，试验重复2次。通过菌丝生长抑制概率值和药剂浓度对数值之间的线性回归分析，求出各药剂对菌株的有效抑制中浓度(EC50)[13]。

抑制生长率=[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-菌饼直径)]×100%。

1.2.5 药效调查方法 5月4日第1次施药时调查发病基数。因第1次施药时未发病，故发病基数为0。6月5日(第3次施药8 d后)调查1次发病情况，调查完进行第4次喷药，药剂晾干后对果穗进行套袋。果实采收期(8月5日)调查1次发病情况，共调查3次。

每个小区除边缘2株树外，调查其余6株树中、下部果穗，按5点取样法随机调查20个果穗，调查病果(穗)率及受害级别，计算病情指数及防治效果。

分级方法：0级，无病斑；1级，病果(穗)面积占整个果穗面积的5%及以下；3级，病果(穗)面积占整个果穗面积的6%～15%；5级，病果(穗)面积占整个果穗面积的16%～25%；7级，病果(穗)面积占整个果穗面积的26%～50%；9级，病果(穗)面积占整个果穗面积的51%及以上。

病果(穗)率=病果(穗)数/调查总果(穗)数×100%；

病情指数=∑[(各级病果(穗)数×相对级数代表值)]/[调查总果(穗)数×9]×100；

防治效果=(空白对照区病情指数-处理区病情指数)/空白对照区病情指数×100%。

1.2.6 数据分析 试验数据均由Microsoft Excel 2010、DPS进行统计分析，并用Duncan’s新复极差法检验其差异性(P<0.05)。

2 结果与分析

2.1 杀菌剂对葡萄灰霉病病菌孢子萌发的抑制作用

表1 杀菌剂对葡萄灰霉病病菌孢子萌发的抑制作用

2.2 杀菌剂对葡萄灰霉病病菌菌丝生长的抑制作用

表2 杀菌剂对葡萄灰霉病病菌菌丝生长的抑制作用

2.3 13种杀菌剂对葡萄灰霉病的田间防治试验

表3 杀菌剂对葡萄灰霉病的田间防治效果

注：表中数据为4次重复的平均值；同列数据后不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

3 结论与讨论

同时，为防止葡萄灰霉病病菌抗药性的快速产生和增长，建议在防治葡萄病害的管理过程中，合理混用或轮换使用不同作用机制的杀菌剂，并考虑葡萄的生长阶段、气候条件、田间管理及不同品种的抗病性等因素进行综合管理，以延缓病原菌抗药性的产生，延长杀菌剂在果树病害管理体系中的使用寿命。

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