云南红豆杉叶斑病病原菌的分离鉴定和生物学特性

谢美华+李霖+李雪玲+杨海艳+王振吉+范树国

摘要：对红豆杉叶斑病进行病原鉴定，并研究其生物学特性和杀菌剂对其抑制作用。结果表明，该病原菌为交链孢属真菌；该病原菌最适宜生长的碳源为可溶性淀粉，氮源为硝酸钠。菌丝适宜生长的温度范围较窄，最适菌丝生长的温度是28℃；菌丝适宜生长的pH值范围较广，在pH值2.5～10.9之间均能生长；光周期对菌落生长的影响不大。供试的杀菌剂中以百菌清的抑菌效果最好。

关键词：云南红豆杉；叶斑病；病原鉴定；生物学特性；交链孢属

中图分类号：S763.15文献标志码：A 文章编号：1002-1302（2014）11-0146-04

云南红豆杉（TaxusyunnanensisChengetLu）别称紫杉、赤柏松，属红豆杉科乔木，产于云南西北部及西部、四川西南部与西藏东部，是生产紫杉醇的主要树种[1-3]。云南红豆杉是集用材、药用、绿化于一体的珍贵树种，特别是其紫杉醇含量远远高于其他红豆杉树种[4]。紫杉醇具有抗癌活性，云南红豆杉的野生资源比较少，人工培育红豆杉是目前获取紫杉醇最可行、有效的途径[1，5]。为了更好地保护野生云南红豆杉野生资源，大力培育后续产业，以满足市场对云南红豆杉资源的需求，近年来在云南丽江、大理、楚雄和丘北等地建立了云南红豆杉人工种植林。由于云南红豆杉的广泛栽培，病害发生严重，尤其是云南红豆杉叶片叶斑病现象日趋普遍，影响了树势生长及药用、观赏价值。分离与鉴定病原菌是开展云南红豆杉抗病防治研究的基础。本试验从自然感病的云南红豆杉上分离纯化得到1株对云南红豆杉具有寄生作用的真菌，利用传统的形态学观察与现代分子生物学技术相结合的方法，对云南红豆杉叶斑病病原菌进行了鉴定，并依据其形态特点与培养性状进行了初步研究，为云南红豆杉叶斑病的防治奠定了基础，同时也为进一步了解该病害的发病规律提供了一定的理论依据。

1材料与方法

1.1病原菌的分离

云南红豆杉叶斑病叶片采自云南省楚雄市西山，用组织分离法分离病原菌，经科赫氏法鉴定其为云南红豆杉叶斑病的病原，菌株编号为hongdoushan02。

1.2病原菌的鉴定

1.2.1形态学鉴定利用显微镜观察纯化分离到的病原菌，并对其进行形态鉴定。

1.2.2病原菌rDNA-ITS序列扩增和分析用CTAB法提取病原菌全基因组DNA，进行ITS-PCR扩增。引物序列为ITS4：5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′；ITS5：5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′。PCR反应体系总体积25μL，反应各成分终浓度为：Taq酶0.02U/μL、引物0.4μmol/L、DNA模板20ng/μL、dNTPs0.4μmol/L、2×PCR反应缓冲液。PCR扩增程序为：95℃预变性3min；94℃变性30s，52℃退火45s，72℃复性45s，30个循环；72℃延伸10min。扩增产物送北京百泰克生物技术有限公司测序，所得序列在NCBI上比对，下载与其相似性较高的序列及其近似属的序列，用BioEdit、ClustalX和MEGA4.1软件采用NJ法进行系统分析，构建系统进化树。

1.3生物学特性研究[6-7]

1.3.1不同碳源和氮源对菌落生长的影响

以察氏培养基为基础培养基，分别以葡萄糖、甘油、D-果糖、D-半乳糖、乳糖、可溶性淀粉等量取代其碳源；分别以硫酸铵、硝酸铵、甘氨酸、L-苯丙氨酸、牛肉膏、蛋白胨取代氮源。每种培养基中分别接种直径为5mm的菌块，25℃恒温黑暗培养，5d后用“十”字交叉法测量菌落直径。每个处理设3个重复。

1.3.2不同温度对菌落和分生孢子萌发的影响

取直径为5mm的菌块接种于察氏培养基中央，分别在5、10、15、20、25、28、30、32、35、40、45℃黑暗下恒温培养，5d后测量菌落直径。用无菌水制备菌悬液，滴于载玻片上，培养条件同菌落培养，24h后镜检孢子萌发率，每次检100个孢子。每个处理设3个重复。

1.3.3不同pH值对菌落和分生孢子萌发的影响

将高压灭菌后的察氏培养基pH值分别调为3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、10.9倒平板，取直径5mm的菌块接种于察氏培养基中央，黑暗条件下25℃培养5d后测量菌落直径。用0.2mol/L磷酸氢二钠和0.2mol/L柠檬酸缓冲液将分生孢子悬浮液pH值调配为3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、10.9，置于25℃恒温箱黑暗培养，24h后镜检萌发率，每次检100个孢子。每个处理设3个重复。

1.3.4不同光照处理

取直径为5mm的菌块接种于察氏培养基中央，分别置于24h光照、12h/12h光暗交替、24h黑暗环境中，25℃培养5d后测量菌落直径。用无菌水制备菌悬液，滴于载玻片上，培养条件同菌落培养，24h后镜检孢子萌发率，每次镜检100个孢子。每个处理设3个重复。

1.4不同杀菌剂对菌落生长的影响

将代森锰锌、百菌清、敌克松、霜·锰锌和扑海因用无菌水按其常用倍数稀释，每10mL培养基中加入1mL药液制成含药液的平板，对照组加入等量无菌水。取5mm菌块置于察氏培养基平板中央，25℃黑暗培养5d后测量菌落直径。每个处理设3个重复。

2结果与分析

2.1云南红豆杉病原菌的鉴定

2.1.1形态学鉴定

该病主要发生在叶部，发病初期叶片中部出现多个黄褐色病斑，病斑边缘黑色，随着病情的发展，可延伸至整个叶片，使叶片枯萎死亡。在PDA培养基上，28℃培养6d菌落直径达4cm，菌落青灰色相间，圆形、规则，边缘整齐，菌丝絮状，培养一段时间后可看到培养皿盖上有水珠；背面轮纹状，中心圆褐色，外围一环黄色；菌落生长缓慢（图1）。菌丝有隔，淡褐色，产孢细胞孔生式产孢，合轴式延伸或有时不再延伸；分生孢子多串生（向顶系列），有的单生，卵形或倒棍棒形，具喙，淡橄榄褐至橄榄褐色或褐色，光滑，具横隔膜及纵向隔膜，大小（2.4～6.2）μm×（2.9～7.1）μm（平均2.65μm×6.65μm）。分生孢子顶端或喙部，常孔生式产生新的分生孢子，如此联系产生，形成分枝或不分枝的孢子链（图2、图3）。

2.1.2病原菌rDNA-ITS序列分析

将hongdoushan02菌株的5.8SrDNA-ITS序列在NCBI里进行序列比对，结果显示hongdoushan02与交链孢属（Alternariasp.）、白菜黑斑病菌（A.brassicae）、烟草赤星病菌（A.alternata）和UnculturedAlternariaclone同源性最高，下载它们的序列，以Corynesporacassiicola为外群，用BioEdit、ClustalX和MEGA4.1软件采用NJ法进行系统分析，构建系统进化树（图4）。结果显示，与其遗传距离较近的有4个种，属内节点支持率为1.00，结合其形态特征的观察研究，供试菌株hongdoushan02为丝孢纲（Hyphomycetes）丝孢目（Hyphomycetales）暗色孢科（Dematiaceae）交链孢属[8-16]，病原菌的种待定。

2.2不同氮源和碳源对hongdoushan02菌落生长的影响

试验结果（表1）表明，该菌对供试的7种氮源和碳源均能利用，菌落在不同氮源和碳源培养基上生长速度有明显差异。最适该菌生长的氮源是硝酸钠，与牛肉膏、蛋白胨和甘氨酸差异不显著，与其他氮源差异显著（P<0.05）。最适该菌生长的碳源是可溶性淀粉，与蔗糖和D-半乳糖差异显著（P<0.05），与其他碳源差异不显著。

2.3不同光照对hongdoushan02菌株生长的影响

通过24h光照、12h光/暗交替、黑暗培养，结果（图5）表明，有无光照对菌落生长的影响差异不显著。

2.4不同温度对hongdoushan02菌株生长的影响

试验结果（图6）表明，该病原菌所能适应的温度范围较窄，只能在15～30℃范围内生长，最适的生长温度是28℃，与25℃处理差异显著（P<0.05），与其他处理差异极显著（P<0.01）。该病原菌在5、10、32℃及以上温度不能生长。

2.5不同pH值对hongdoushan02菌株生长的影响

试验结果（图7）表明，菌丝生长适应的pH值范围较广，在pH值2.5～10.9之间均能生长，不同的pH值条件下菌丝的生长差异不显著。

2.6不同杀菌剂对菌株生长的影响

试验结果（图8）表明，与对照相比，5种广谱杀菌剂对该菌的生长均有抑制作用。百菌清对该菌的抑制效果最好，随后依次是扑海因、霜·锰锌、代森锰锌，效果最差的是敌克松。百菌清的抑菌效果和扑海因差异不显著，与霜·锰锌差异显著，与敌克松和代森锰锌差异极显著。

3结论与讨论

3.1病原菌的分离鉴定

云南红豆杉更新能力差，对生长环境有较高要求，天然分布区域狭窄，生长缓慢，对生存空间竞争能力差。为了满足市场对云南红豆杉资源的需求，近年来云南省多个地区已进行大量的人工栽培。本研究通过对云南红豆杉叶斑病病原菌进行分离纯化，利用形态学特征观察并结合分子生物学手段进行分析鉴定[11-12]，结果表明，两者的鉴定结果相互吻合一致，初步推测病原菌为交链孢属真菌。

3.2病原菌生物学特性研究

本研究结果表明，该菌对供试的7种氮源和碳源均能利用，菌落在不同氮源和碳源培养基上生长速度有明显差异，最适该菌生长的的氮源是硝酸钠，最适该菌生长的碳源是可溶性淀粉。该病原菌适宜生长的温度范围较窄，最适菌丝生长的温度是28℃，在5、10、32℃及以上温度条件下停止生长；菌丝适宜生长的pH值范围均较广，在pH值2.5～10.9之间均能生长；有无光照对菌落生长影响不显著。

3.3广谱杀菌剂对该菌生长的影响

在本研究中5种广谱杀菌剂对该菌落的生长均有抑制作用。百菌清对该菌的抑制效果最好，随后依次是扑海因、霜·锰锌、代森锰锌，效果最差的是敌克松。该菌的生物学特性研究都是在实验室中进行，相对于人工大面积种植时复杂的生长环境，实验室的环境相对单一。因此，要确定该病害的生物学特性，哪一种杀菌剂对该菌的抑制作用最好，还有待进一步的大田试验研究。

参考文献：

[1]李良群，杨艳光，曾英，等.云南红豆杉内生真菌Talaromycessp.T1BF的化学成分研究[J].广西植物，2011，31（5）：699-701.

[2]刘万德，苏建荣，王梦君，等.滇西北云南红豆杉种群空间分布格局[J].西北林学院学报，2012，27（6）：131-138.

[3]苏建荣，臧传富，刘万德，等.光质对云南红豆杉生长及紫杉烷含量影响的研究[J].林业科学研究，2012，25（4）：419-424.

[4]王磊，张劲峰，欧晓昆，等.丽江试验区须弥红豆杉幼苗生长特征及紫杉醇含量变化研究[J].西部林业科学，2013，42（4）：58-62.

[5]郑法新，程璐，李侠，等.一株产紫杉醇云南红豆杉内生真菌分离和筛选[J].江苏农业科学，2010（5）：440-443.

[6]李庆华.云南红豆杉扦插繁殖技术研究[J].林业调查规划，2012，37（6）：126-130.

[7]赵永生，赵俊雄，张静华.云南红豆杉资源保护与开发利用前景[J].中国民族民间医药，2011，20（13）：28，31.

[8]方中达.植病研究方法[M].北京：农业出版社，1979.

[9]陆家云.植物病原真菌学[M].北京：中国农业出版社，2001.

[10]HidakaY，KanedaT，AminoN，etal.Chinesemedicine，CoixseedsincreaseperipheralcytotoxicTandNKcells[J].Biotherapy，1992，5（3）：201-203.

[11]LeeMY，LinHY，ChengF，etal.Isolationandcharacterizationofnewlactamcompoundsthatinhibitlungandcoloncancercellsfromadlay（Coixlachryma-jobiL.var.ma-yuenStapf）bran[J].FoodandChemicalToxicology，2008，46（6）：1933-1939.

[12]刘艳，叶建仁.植物病害潜伏侵染研究进展[J].南京林业大学学报，2002，24（5）：69-72.

[13]刘纪凤，范运梁.植物叶片病害的发生与防治[J].现代农业科技，2008（20）：115，117.

[14]马琼，秦恩华，李又萍.魔芋白绢病病原菌的分离鉴定[J].安徽农业科学，2005，33（12）：2307，2320.

[15]赵国柱，张天宇.中国砖格丝孢菌研究Ⅰ.砖格孢属[J].菌物系统，2003，22（1）：19-22.

[16]巴尼特HL，亨特BB.半知菌属图解[M].沈崇尧，译.北京：科学出版社，1977：66-67，78-79，82-83，130-131，132-133，152-153.

2.1.2病原菌rDNA-ITS序列分析

将hongdoushan02菌株的5.8SrDNA-ITS序列在NCBI里进行序列比对，结果显示hongdoushan02与交链孢属（Alternariasp.）、白菜黑斑病菌（A.brassicae）、烟草赤星病菌（A.alternata）和UnculturedAlternariaclone同源性最高，下载它们的序列，以Corynesporacassiicola为外群，用BioEdit、ClustalX和MEGA4.1软件采用NJ法进行系统分析，构建系统进化树（图4）。结果显示，与其遗传距离较近的有4个种，属内节点支持率为1.00，结合其形态特征的观察研究，供试菌株hongdoushan02为丝孢纲（Hyphomycetes）丝孢目（Hyphomycetales）暗色孢科（Dematiaceae）交链孢属[8-16]，病原菌的种待定。

2.2不同氮源和碳源对hongdoushan02菌落生长的影响

试验结果（表1）表明，该菌对供试的7种氮源和碳源均能利用，菌落在不同氮源和碳源培养基上生长速度有明显差异。最适该菌生长的氮源是硝酸钠，与牛肉膏、蛋白胨和甘氨酸差异不显著，与其他氮源差异显著（P<0.05）。最适该菌生长的碳源是可溶性淀粉，与蔗糖和D-半乳糖差异显著（P<0.05），与其他碳源差异不显著。

2.3不同光照对hongdoushan02菌株生长的影响

通过24h光照、12h光/暗交替、黑暗培养，结果（图5）表明，有无光照对菌落生长的影响差异不显著。

2.4不同温度对hongdoushan02菌株生长的影响

试验结果（图6）表明，该病原菌所能适应的温度范围较窄，只能在15～30℃范围内生长，最适的生长温度是28℃，与25℃处理差异显著（P<0.05），与其他处理差异极显著（P<0.01）。该病原菌在5、10、32℃及以上温度不能生长。

2.5不同pH值对hongdoushan02菌株生长的影响

试验结果（图7）表明，菌丝生长适应的pH值范围较广，在pH值2.5～10.9之间均能生长，不同的pH值条件下菌丝的生长差异不显著。

2.6不同杀菌剂对菌株生长的影响

试验结果（图8）表明，与对照相比，5种广谱杀菌剂对该菌的生长均有抑制作用。百菌清对该菌的抑制效果最好，随后依次是扑海因、霜·锰锌、代森锰锌，效果最差的是敌克松。百菌清的抑菌效果和扑海因差异不显著，与霜·锰锌差异显著，与敌克松和代森锰锌差异极显著。

3结论与讨论

3.1病原菌的分离鉴定

云南红豆杉更新能力差，对生长环境有较高要求，天然分布区域狭窄，生长缓慢，对生存空间竞争能力差。为了满足市场对云南红豆杉资源的需求，近年来云南省多个地区已进行大量的人工栽培。本研究通过对云南红豆杉叶斑病病原菌进行分离纯化，利用形态学特征观察并结合分子生物学手段进行分析鉴定[11-12]，结果表明，两者的鉴定结果相互吻合一致，初步推测病原菌为交链孢属真菌。

3.2病原菌生物学特性研究

本研究结果表明，该菌对供试的7种氮源和碳源均能利用，菌落在不同氮源和碳源培养基上生长速度有明显差异，最适该菌生长的的氮源是硝酸钠，最适该菌生长的碳源是可溶性淀粉。该病原菌适宜生长的温度范围较窄，最适菌丝生长的温度是28℃，在5、10、32℃及以上温度条件下停止生长；菌丝适宜生长的pH值范围均较广，在pH值2.5～10.9之间均能生长；有无光照对菌落生长影响不显著。

3.3广谱杀菌剂对该菌生长的影响

在本研究中5种广谱杀菌剂对该菌落的生长均有抑制作用。百菌清对该菌的抑制效果最好，随后依次是扑海因、霜·锰锌、代森锰锌，效果最差的是敌克松。该菌的生物学特性研究都是在实验室中进行，相对于人工大面积种植时复杂的生长环境，实验室的环境相对单一。因此，要确定该病害的生物学特性，哪一种杀菌剂对该菌的抑制作用最好，还有待进一步的大田试验研究。

参考文献：

[1]李良群，杨艳光，曾英，等.云南红豆杉内生真菌Talaromycessp.T1BF的化学成分研究[J].广西植物，2011，31（5）：699-701.

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[3]苏建荣，臧传富，刘万德，等.光质对云南红豆杉生长及紫杉烷含量影响的研究[J].林业科学研究，2012，25（4）：419-424.

[4]王磊，张劲峰，欧晓昆，等.丽江试验区须弥红豆杉幼苗生长特征及紫杉醇含量变化研究[J].西部林业科学，2013，42（4）：58-62.

[5]郑法新，程璐，李侠，等.一株产紫杉醇云南红豆杉内生真菌分离和筛选[J].江苏农业科学，2010（5）：440-443.

[6]李庆华.云南红豆杉扦插繁殖技术研究[J].林业调查规划，2012，37（6）：126-130.

[7]赵永生，赵俊雄，张静华.云南红豆杉资源保护与开发利用前景[J].中国民族民间医药，2011，20（13）：28，31.

[8]方中达.植病研究方法[M].北京：农业出版社，1979.

[9]陆家云.植物病原真菌学[M].北京：中国农业出版社，2001.

[10]HidakaY，KanedaT，AminoN，etal.Chinesemedicine，CoixseedsincreaseperipheralcytotoxicTandNKcells[J].Biotherapy，1992，5（3）：201-203.

[11]LeeMY，LinHY，ChengF，etal.Isolationandcharacterizationofnewlactamcompoundsthatinhibitlungandcoloncancercellsfromadlay（Coixlachryma-jobiL.var.ma-yuenStapf）bran[J].FoodandChemicalToxicology，2008，46（6）：1933-1939.

[12]刘艳，叶建仁.植物病害潜伏侵染研究进展[J].南京林业大学学报，2002，24（5）：69-72.

[13]刘纪凤，范运梁.植物叶片病害的发生与防治[J].现代农业科技，2008（20）：115，117.

[14]马琼，秦恩华，李又萍.魔芋白绢病病原菌的分离鉴定[J].安徽农业科学，2005，33（12）：2307，2320.

[15]赵国柱，张天宇.中国砖格丝孢菌研究Ⅰ.砖格孢属[J].菌物系统，2003，22（1）：19-22.

[16]巴尼特HL，亨特BB.半知菌属图解[M].沈崇尧，译.北京：科学出版社，1977：66-67，78-79，82-83，130-131，132-133，152-153.

2.1.2病原菌rDNA-ITS序列分析

将hongdoushan02菌株的5.8SrDNA-ITS序列在NCBI里进行序列比对，结果显示hongdoushan02与交链孢属（Alternariasp.）、白菜黑斑病菌（A.brassicae）、烟草赤星病菌（A.alternata）和UnculturedAlternariaclone同源性最高，下载它们的序列，以Corynesporacassiicola为外群，用BioEdit、ClustalX和MEGA4.1软件采用NJ法进行系统分析，构建系统进化树（图4）。结果显示，与其遗传距离较近的有4个种，属内节点支持率为1.00，结合其形态特征的观察研究，供试菌株hongdoushan02为丝孢纲（Hyphomycetes）丝孢目（Hyphomycetales）暗色孢科（Dematiaceae）交链孢属[8-16]，病原菌的种待定。

2.2不同氮源和碳源对hongdoushan02菌落生长的影响

试验结果（表1）表明，该菌对供试的7种氮源和碳源均能利用，菌落在不同氮源和碳源培养基上生长速度有明显差异。最适该菌生长的氮源是硝酸钠，与牛肉膏、蛋白胨和甘氨酸差异不显著，与其他氮源差异显著（P<0.05）。最适该菌生长的碳源是可溶性淀粉，与蔗糖和D-半乳糖差异显著（P<0.05），与其他碳源差异不显著。

2.3不同光照对hongdoushan02菌株生长的影响

通过24h光照、12h光/暗交替、黑暗培养，结果（图5）表明，有无光照对菌落生长的影响差异不显著。

2.4不同温度对hongdoushan02菌株生长的影响

试验结果（图6）表明，该病原菌所能适应的温度范围较窄，只能在15～30℃范围内生长，最适的生长温度是28℃，与25℃处理差异显著（P<0.05），与其他处理差异极显著（P<0.01）。该病原菌在5、10、32℃及以上温度不能生长。

2.5不同pH值对hongdoushan02菌株生长的影响

试验结果（图7）表明，菌丝生长适应的pH值范围较广，在pH值2.5～10.9之间均能生长，不同的pH值条件下菌丝的生长差异不显著。

2.6不同杀菌剂对菌株生长的影响

试验结果（图8）表明，与对照相比，5种广谱杀菌剂对该菌的生长均有抑制作用。百菌清对该菌的抑制效果最好，随后依次是扑海因、霜·锰锌、代森锰锌，效果最差的是敌克松。百菌清的抑菌效果和扑海因差异不显著，与霜·锰锌差异显著，与敌克松和代森锰锌差异极显著。

3结论与讨论

3.1病原菌的分离鉴定

云南红豆杉更新能力差，对生长环境有较高要求，天然分布区域狭窄，生长缓慢，对生存空间竞争能力差。为了满足市场对云南红豆杉资源的需求，近年来云南省多个地区已进行大量的人工栽培。本研究通过对云南红豆杉叶斑病病原菌进行分离纯化，利用形态学特征观察并结合分子生物学手段进行分析鉴定[11-12]，结果表明，两者的鉴定结果相互吻合一致，初步推测病原菌为交链孢属真菌。

3.2病原菌生物学特性研究

本研究结果表明，该菌对供试的7种氮源和碳源均能利用，菌落在不同氮源和碳源培养基上生长速度有明显差异，最适该菌生长的的氮源是硝酸钠，最适该菌生长的碳源是可溶性淀粉。该病原菌适宜生长的温度范围较窄，最适菌丝生长的温度是28℃，在5、10、32℃及以上温度条件下停止生长；菌丝适宜生长的pH值范围均较广，在pH值2.5～10.9之间均能生长；有无光照对菌落生长影响不显著。

3.3广谱杀菌剂对该菌生长的影响

在本研究中5种广谱杀菌剂对该菌落的生长均有抑制作用。百菌清对该菌的抑制效果最好，随后依次是扑海因、霜·锰锌、代森锰锌，效果最差的是敌克松。该菌的生物学特性研究都是在实验室中进行，相对于人工大面积种植时复杂的生长环境，实验室的环境相对单一。因此，要确定该病害的生物学特性，哪一种杀菌剂对该菌的抑制作用最好，还有待进一步的大田试验研究。

参考文献：

[1]李良群，杨艳光，曾英，等.云南红豆杉内生真菌Talaromycessp.T1BF的化学成分研究[J].广西植物，2011，31（5）：699-701.

[2]刘万德，苏建荣，王梦君，等.滇西北云南红豆杉种群空间分布格局[J].西北林学院学报，2012，27（6）：131-138.

[3]苏建荣，臧传富，刘万德，等.光质对云南红豆杉生长及紫杉烷含量影响的研究[J].林业科学研究，2012，25（4）：419-424.

[4]王磊，张劲峰，欧晓昆，等.丽江试验区须弥红豆杉幼苗生长特征及紫杉醇含量变化研究[J].西部林业科学，2013，42（4）：58-62.

[5]郑法新，程璐，李侠，等.一株产紫杉醇云南红豆杉内生真菌分离和筛选[J].江苏农业科学，2010（5）：440-443.

[6]李庆华.云南红豆杉扦插繁殖技术研究[J].林业调查规划，2012，37（6）：126-130.

[7]赵永生，赵俊雄，张静华.云南红豆杉资源保护与开发利用前景[J].中国民族民间医药，2011，20（13）：28，31.

[8]方中达.植病研究方法[M].北京：农业出版社，1979.

[9]陆家云.植物病原真菌学[M].北京：中国农业出版社，2001.

[10]HidakaY，KanedaT，AminoN，etal.Chinesemedicine，CoixseedsincreaseperipheralcytotoxicTandNKcells[J].Biotherapy，1992，5（3）：201-203.

[11]LeeMY，LinHY，ChengF，etal.Isolationandcharacterizationofnewlactamcompoundsthatinhibitlungandcoloncancercellsfromadlay（Coixlachryma-jobiL.var.ma-yuenStapf）bran[J].FoodandChemicalToxicology，2008，46（6）：1933-1939.

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