羊群布鲁氏菌病疫苗免疫后3 种血清学抗体检测方法的比较

李民超

北京市门头沟区动物疫病预防控制中心，北京 100000

布鲁氏菌病（也称布氏杆菌病，简称布病）是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患病。按照北京市动物疫病强制免疫实施方案的要求，门头沟区对辖区内羊只进行布鲁氏菌病集中免疫。本文利用动物布鲁氏菌病诊断技术GB/T 18646-2018 中的虎红平板凝集试验、试管凝集试验常量法和竞争酶联免疫吸附试验，检测辖区内羊群布鲁氏菌病口服免疫后抗体水平。并根据阳性判定的准确率的差异问题，分析比较，从而选择更准确更适合的检测方法。

1 布病集中免疫情况

门头沟区使用的免疫疫苗是北京市动物疫病预防控制中心采购的中牧实业股份有限公司的布氏菌病活疫苗（S2 株），规格为80 头份/瓶。依据北京市动物疫病预防控制中心指导要求，采取口服免疫的方式，山羊和绵羊不论年龄大小，一律口服100 亿CFU/头只。

2 材料与方法

2.1 材料

结合门头沟区实际情况，羊养殖存栏较小、全部是散养模式，区疫控中心选择存栏较多的养殖户开展抗体监测。按时间顺序，未免疫血清26 份；免疫后1 个月血清43 份，免疫后2 个月血清15 份，免疫后3 个月血清16 份，免疫后4 个月血清11 份。

诊断试剂：中监所的虎红平板凝集试验抗原、试管凝集试验抗原，兰兽研cELISA 试剂盒。

2.2 检测方法

虎红平板凝集试验和试管凝集试验均按照《动物布鲁氏菌病诊断技术》（GB/T18646-2018）进行检测和结果判定。竞争酶联免疫吸附试验按照《动物布鲁氏菌病诊断技术》（GB/T18646-2018）和试剂盒说明书开展检测和结果判定[1]。

3 检测结果及分析

3.1 检测结果

未免疫散养户26 份血清，三种检测方法阳性数量均为0。免疫后各月份检测结果见图1。

图1 免疫后各月份检测结果统计

3.2 结果分析

通过上述数据来看，非免疫的羊血清三种检测方法的阳性率均为0%；而免疫后的羊群布鲁氏菌病抗体阳性的情况为：竞争酶联免疫吸附试验的检测阳性率大于虎红平板凝集试验和试管凝集试验。

通过竞争酶联免疫吸附试验的结果来看，随时间的推移，抗体阳性率越来越低。虽然免疫后第一个月是抗体产生的高峰，但通过虎红平板凝集试验和试管凝集试验来看，免疫后第1 个月阳性率仅为20.93%和16.28%；从免疫后2 个月开始至免疫后4 个月，虎红平板凝集试验和试管凝集试验的阳性检出率几乎为0。

4 讨论

数据表明，常规血清学诊断中虎红平板凝集试验和试管凝集试验抗体检测效果不佳，而竞争酶联免疫吸附试验却是效果良好。

抗原刺激机体产生大量抗体，这些抗原存在于机体时产生能够与凝集试验抗原所结合的抗体，因此试管凝集和虎红平板凝集试验能够出现部分阳性现象。随着大量抗体的产生，抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物后被消灭，抗原数量大量下降，没有了抗原的刺激，虎红平板凝集和试管凝集试验就检测不出对应的抗体了，因而无法检测出阳性。而竞争酶联免疫吸附试验检测出的抗体是抗原特定位置或结构产生的，这一类特定抗体在动物机体内存在时间也就是4 个月左右[2]。

经上述讨论与分析，得出的结论是经过布鲁氏菌疫苗免疫后的羊群，在检测抗体时可以优先选择竞争酶联免疫吸附试验方法，在未发生免疫的养殖场户中可以使用虎红平板凝集试验和试管凝集试验进行阳性判定，如果实验室条件允许的情况下使用PCR 确诊。