干制苹果片中甜蜜素的检测

刘超 刘航 王小林 景赞 黄志勇

（乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山614000）

干制苹果片中甜蜜素的检测

刘超 刘航 王小林 景赞 黄志勇

（乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山614000）

本文采用高效液相色谱串联三重四级杆质谱法对干制苹果片中甜蜜素进行检测。建立了以Inertsil ODS-3为液相色谱柱，以乙腈、10mmol/L乙酸铵（pH=4.0）为流动相，质谱采用电喷雾离子源，负离子扫描，以178.2/79.8为定量离子对的检测方法。该方法测得的甜蜜素在0～800.0ng/mL内具有良好的线性，检出限为0.013mg/kg，加标回收率在91.9%～99.2%。该方法适合干制苹果片中甜蜜素的分析。与传统的甜蜜素检测方法——气相色谱法相比较，该方法具有分析速度快、操作方便、重现性好、灵敏度高等特点。

干制苹果片；甜蜜素；液质联用

甜蜜素（Sodium cyclamate），化学名为环己基氨基磺酸钠，为人工合成的甜味剂，口感好、价格低廉，甜度为蔗糖的30～40倍[1,2]，价格是蔗糖的3倍左右。食品添加剂使用标准（《GB2760-2014》）[3]规定甜蜜素可用于饮料、冷冻饮品、糕点、蜜饯、配制酒、酱菜等中。如果经常食用甜蜜素含量超标的食品，就会因摄入过量对人体的肝脏和神经系统造成危害，特别是对代谢排毒能力较弱的老人、孕妇、小孩危害更明显。传统的检验方法是将甜蜜素在硫酸介质中与亚硝酸反应产生环己醇亚硝酸酯，再采用气相色谱法进行检测[4]，该方法具有干扰性大、操作繁琐、灵敏度低、稳定性差等方面的缺点；进出口检验检疫局发布的行业标准检验方法SN/T1948-2007[5]中并不包括干制水果类食品，且此标准中由于流动相组成，也存在灵敏度不高的问题。因此建立一种能够快速、准确地检测干制水果中甜蜜素的方法是十分必要和具有现实意义的。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

干制苹果片：大凉山苹果片，盐源县天味食品有限公司；

乙酸：优级纯；

乙酸铵、乙腈均为色谱纯；

水：GB/T6682规定的一级水；

甜蜜素标准品，0.25g，99.0%，lot∶30426，Dr.Ehrenstorfer GmbH，06/2017。

1.2 仪器与设备

液相色谱-串联质谱仪，API3200，配有电喷雾离子源，美国AB公司；

分析天平（精确度为0.01mg），德国赛多利斯集团生产，CP225D；

低速离心机，TD420，四川蜀科仪器有限公司；自动旋涡混合器，ZH-2，天津药典标准仪器厂；超声波萃取仪，KQ-700DE，昆山超声仪器有限公司生产。

1.3 标准溶液的制备

1.3.1 甜蜜素标准储备液

称取0.01g环己基氨基磺酸钠标准品，加一级水溶解并定容至50mL，此溶液浓度为200μg/mL。

1.3.2 甜蜜素标准工作溶液

准确移取0.25mL环己基氨基磺酸钠标准储备液，用一级水稀释并定容至50mL，此溶液浓度为1μg/mL。根据需要用一级水稀释成浓度为 0、100、200、300、400、800ng/mL的标准工作溶液。

1.4 试样的提取

准确称取研碎混匀的试样1.00g（精确至0.01g）置于25mL塑料离心管中，加入8.0mL的一级水，置于自动涡旋混合器进行涡旋1min，混匀后再进行超声提取20min，于4000r/min离心5min，并用一级水定容至10mL的容量瓶中，过0.22μm水相滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定。

1.5 色谱条件

1.5.1 液相色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-3，4.6×150mm，5μm；

进样体积：10μL；

流速：0.4mL/min；柱温：40℃；

流动相：A-10mmol/L乙酸铵（pH=4），B-乙腈，梯度洗脱见表1。

表1 梯度洗脱条件Table 1 Mobile phase condition

1.5.2 质谱条件

离子源，电喷雾离子源；扫描方式，负离子扫描；检测方式，多反应监测MRM；雾化气、气帘气、辅助加热器、碰撞气均为高纯氮气；IS，-4500V；GS1，30Psi；CUR，30Psi；GS2，30Psi；TEM，500℃；CAD，10mL/min，其他条件见表2。

表2 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压Table 2 Qualitative ion pair,quantitative ion pair,collision gas energy,cluster voltage

2 结果讨论

2.1 液相色谱柱的选择

Inertsil ODS-3代表了当今世界上新一代C18反相填料，它的基质是一种新型的高纯硅胶，这种硅胶不仅纯度高达99.999%，而且颗粒球形对称度好，表面均匀光滑，从而使硅胶的理化性质更加均一，载体机械强度大，键合度及柱效更高，加之GL Sciences公司高超的化学键和技术，使得Inertsil ODS-3成为世界上最好的C18反相填料之一，因此本试验中使用Inertsil ODS-3（4.6× 150mm，5μm）作为分析柱。

2.2 流动相的选择

同时考察了SN/T1948-2007[5]中流动相为甲醇-0.1%乙酸水溶液，和10mmol/L乙酸铵（pH=4）-乙腈作为流动相，从峰型、峰宽、灵敏度等方面考虑，经过优化，得到最佳流动相组合是10mmol/L乙酸铵（pH=4）-乙腈梯度洗脱最为本试验的流动相，这与这与盛旋等[6]的研究相吻合。可能的原因是甜蜜素在负离子模式下进行扫描，而乙酸铵在负离子模式下有增强信号的作用。

2.3 线性范围

根据甜蜜素的灵敏度，用空白样品提取液分别配成浓度为 0μg/mL、100.0μg/mL、200.0μg/mL、300.0μg/mL、400.0μg/mL、800.0μg/mL的系列标准工作溶液，4℃保存，现用现配；以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得标准曲线方程见图1。

图1 甜蜜素标准曲线回归方程Fig.1 Standard curve regression equation of sodium cyclamate

2.4 方法检出限

由自动进样器吸取40ng/mL的甜蜜素标准工作溶液10μL，注入色谱仪中，平行进样3次，求出仪器检出限的平均值，而后求出方法检出限。结果见表3。

由表3可知仪器平均检出限为0.0128ng，方法检出限为0.013mg/kg，可见，仪器和方法灵敏度很高。

2.5 加标回收率

将甜蜜素储备液稀释至10μg/mL，准确称取9份研碎混匀的试样各1.00g（精确至0.01g）置于25mL离心管中，加入8mL水，分别准确移取0.05mL、0.3mL、0.6mL上述甜蜜素溶液各三份至9份试样中，置于自动涡旋混合器涡旋1min，混匀后超声提取20min，于4000r/min离心5min，并用一级水定容至10mL容量瓶中，过0.22μm水相滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定。

表3 甜蜜素检出限Table 3 Detection limit of sodium cyclamate

表4 甜蜜素加标回收率Table 4 Adding standard recovery of sodium cyclamate

甜蜜素方法回收率为 91.9%～99.2%。符合GB/T27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测中的规定（80%～110%）。

2.6 重复性

准确称取6份研磨均匀的1.00g空白试样于25mL离心管中，分别准确移取0.80mL浓度为1μg/mL的甜蜜素标准液，置于自动涡旋混合器涡旋1min，混匀后超声提取20min，于4000r/min离心5min，并用一级水定容至10mL容量瓶中，过0.22μm水相滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定。记录色谱图，测定峰面积。计算出RSD值。试验结果发现，RSD为0.57%，说明该方法具有良好的重复性。

表5 甜蜜素重复性Table 5 Repeatability of sodium cyclamate

3 实际样品分析

用本实验建立的方法对市场上出售的干制苹果片进行了测定，少数样品有一定量的检出。例如，凉山某公司生产的干制苹果片中检测出含有甜蜜素，其添加量为14.6mg/kg，添加甜蜜素原因可能是为了增加苹果片的甜度，增强口感。

4 结论

在本文中，建立了用高效液相色谱串联质谱法来检测干制苹果片中甜蜜素的含量的方法，通过实验得出，此方法的检出限低，为 0.013mg/kg；线性范围为0～800.0ng/mL；方法回收率为91.9%～99.2%；重复性良好，为0.57%。所建的方法能够满足干制苹果片中实际检测工作的需要。

[1]Masao Horie,Fusako Ishikawa,Mitsuo Oishi,et al.Rapid determination of cyclamate in foods by solid-phase extraction and capillary electrophoresis[J].Journal of Chromatography A,2007, (1154)∶423-428.

[2]Mahdi Hashemi,Ali Habibi,Narges Jahanshahi.Determination of cyclamate in articial sweeteners and beverages using headspace single-drop microextraction and gas chromatography ame-ionisation detection[J].Food Chemistry,2011,(124)∶1258-1263.

[3]中华人民共和国卫生部.GB2760-2014食品安全国家标准食品添加剂使用标准[S].北京∶中华人民共和国卫生部,2014.

[4]中华人民共和国卫生部.GB/T5009.97-2003食品中环己基氨基磺酸钠的测定[S].北京∶中华人民共和国卫生部,2003.

[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局. SN/T1948-2007进出口中环己基氨基磺酸钠的检测方法液相色谱-质谱/质谱法 [S].北京:中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,2007.

[6]盛旋,陈昌骏,丁振华,等.固相萃取-液相色谱/质谱法同时测定食品中磺胺类人工合成甜味剂[J].分析实验室,2006,25(7)∶75-78.

Detection of Sodium Cyclamate in Dried Apple Slices

LIU Chao LIU Hang WANG Xiao-lin JING Zan HUANG Zhi-yong
(Leshan Food and Drug Inspection and Testing Center,Leshan 614000,China)

Testing Sodium cyclamate in dried apple with LC-MS/MS method in the paper,the method was developed based on novel HPLC column Inertsil ODS-3 with acetonitrile,10mmol/L ammonium acetate(pH=4.0)as mobile phase,combined with MS,which used negative ion scaning,and quantification ion pair was 178.2/79.8.A good linear was in 0～800.0ng/mL, and detection limit was 0.013mg/kg,and adding standard recovery was 91.9%～99.2%.There were advantages such as being fast,easy,reproducible and relatively sensitive compared with conventional gas chromatography with the method.

Dried apple slices;sodium cyclamate;LC-MS/MS

TS207.3

A

1008-1038(2015)10-0026-04

2015-7-13

刘超（1984—），男，助理工程师，研究方向为食品安全