野生和栽培岩陀药材的质量等同性研究

戚淑威 杨杰 周国华 王坤粉 杨少华 陈翠

摘要  ［目的］比較不同产地野生岩陀和栽培岩陀的岩白菜素含量差异，探讨野生岩陀与栽培岩陀是否具有质量等同性，确定最佳栽培年限。［方法］采用高效液相色谱法对野生岩陀和栽培岩陀的岩白菜素含量进行测定。［结果］丽江宁蒗县的野生岩陀岩白菜素含量最高，为5.84%，曲靖马龙县野生岩陀岩白菜素含量最低，为4.32%，丽江栽培岩陀岩白菜素含量在3.93%～5.19%，且各基地间栽培岩陀岩白菜素含量差异明显。相关性分析表明，同一乡镇的野生岩陀大多呈正相关，不同地区间野生岩陀相关性有很大差异，3年栽培岩陀与野生岩陀岩白菜素含量差别不大，不同基地相同年份栽培岩陀岩白菜素含量差异不大。聚类分析表明，所有岩陀样品可分为3类，第1类均为栽培品，第2类均为野生品，第3类野生品、栽培品都有。栽培年限与岩陀岩白菜素含量分析表明，栽培年限与岩白菜素含量呈极显著正相关。［结论］栽培岩陀可作为野生岩陀的替代资源使用，栽培岩陀最佳栽培年限为3～4年。

关键词  野生岩陀；栽培岩陀；岩白菜素含量；质量等同性

中图分类号  R 284.1   文献标识码  A   文章编号  0517-6611（2023）05-0186-05

doi： 10.3969/j.issn.0517-6611.2023.05.042

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Study on the Quality Equivalence of Wild and Cultivated Yantuo Medicinal Materials

QI Shu-wei1， YANG Jie2， ZHOU Guo-hua3 et al

（1.Institute of Alpine Economic Plants， Yunnan Academy of Agricultural Sciences，Lijiang，Yunnan 674100;2.Yunnan Longhai Natural Plant Pharmaceutical Co.，Ltd.，Kunming，Yunnan 650501;3.Yunnan Baiyao Group Chinese Medicinal Resources Co.，Ltd.，Kunming，Yunnan 650111）

Abstract  ［Objective］To compare the bergeninum contents between wild and cultivated Yantuo from different regions， and discuss whether the wild and cultivated samples had quality equivalence， and determined the best cultivation period. ［Method］The bergeninum contents of wild samples and cultivated samples were determined by HPLC. ［Result］The content of wild Yantuo bergenin in Ninglang County of Lijiang was the highest （5.84%）， while the content of wild Yantuo bergenin in Malong County of Qujing was the lowest （4.32%）， and the content of cultivated Yantuo bergenin in Lijiang was 3.93%-5.19%， and the content of cultivated Yantuo bergenin in different bases was significantly different.The correlation research showed that wild samples in the same township were mostly positively correlated， and the correlations of wild sampless in different regions were very different. The bergeninum contents of the three-year cultivated samples were not much different from the wild samples. Besides， the bergeninum contents of samples in different cultivated bases in the same year had little difference. The results of cluster analysis showed that all samples were divided into 3 categories. The first category was cultivated samples，the second category was wild samples and the third category contained wild samples and cultivated samples. Analysis of cultivation years and bergeninum content showed that there was a significant positive correlation between cultivation years and bergeninum content. ［Conclusion］The cultivated Yantuo could replace the wild Yantuo. The best cultivation period of cultivated products was 3-4 years.

Key words  Wild Yantuo;Cultivated Yantuo;Bergeninum content;Quality equivalence

岩陀又名红升麻、蛇疙瘩、毛青红、毛七、毛头寒药、九月岩陀，为虎耳草科鬼灯檠属西南鬼灯檠（Rodgersia sambucifolia Hemsl.var.Sambucifolia）和羽叶鬼灯檠（Rodgersia pinnata Franch.）的干燥根茎，是云南地区傈僳族、苗族、白族等民族的习用药物，具有活血调经、祛风除湿、收敛止泻的功效，用于治疗跌打损伤、骨折、月经不调、痛经、风湿疼痛、外伤出血、肠炎、痢疾等［1-3］。1977 年版《中华人民共和国药典》［4］、1998年版《云南省药品标准》［5］、2003 年版《贵州省中药材民族药材质量标准》［6］对岩陀进行了收录。近年来研究表明岩陀含有邻苯二酚、没食子酸乙酯、岩白菜素、3，4-二羟基苯甲酸、3-O-甲基没食子酸、4-O-甲基没食子酸、胡萝卜苷等成分，其中岩白菜素是岩陀的主要有效成分，岩白菜素具有消炎镇痛、止咳平喘的作用，能对多种癌细胞有良好的抑制活性，常作为止咳、消炎药的有效成分用于治疗咳嗽、急慢性气管炎、十二指肠溃疡等病症，目前岩白菜素片已作为上市药物用于慢性支气管炎的治疗［7-12］。岩陀主要分布于云南、四川、贵州海拔1 000～3 800 m的林下、林缘、灌丛、草甸、石隙，野生资源有限。随着药厂对岩陀药材的需求量日益增加，有限的野生资源已满足不了市场需求，用栽培药材代替野生资源已成为必然。栽培药材是否能真正代替野生药材，质量是关键，只有对岩陀不同栽培年限药的质量开展研究，与野生药材进行比较，分析有无差异，才能为人工栽培药材替代野生药材提供依据，从而指导生产，推动岩陀的规范化和规模化种植，真正实现野生资源的保护和可持续开发利用，为市场提供质量稳定可靠的药材。药用植物的主要药效成分通常是次生代谢产物，中药材次生代谢产物除受遗传因素调控外，地理环境、气候条件等生态因子亦会对其产生重要影响，即环境会导致同种异地药材质量的不同［13-15］。

我国岩陀野生资源分布广泛，受地域影响，各产地岩陀药材质量存在一定差异［16］。目前以云南产岩陀研究较多，其岩白菜素的含量为2.97%～7.55%，丽江地区的野生西南鬼灯檠根茎中岩白菜素的含量为4.29 %～4.73%，其中产于玉龙县的含量最高；丽江的羽叶鬼灯檠的岩白菜素的含量为4.11%［17-22］。该研究选取云南不同产地野生、丽江不同栽培年限的岩陀为研究对象，利用高效液相色谱测定岩白菜素的含量，对不同产地野生药材岩白菜素含量、不同栽培年限药材岩白菜素含量进行比较分析；通过对不同产地野生品与丽江栽培品的主要有效成分岩白菜素含量的测定，探讨栽培过程中岩白菜素的积累规律，为云南野生岩陀的药材品质评价、人工栽培药材替代野生药材、规范化栽培提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1    试材。

岩陀栽培品来自丽江市（古城区、玉龙县），选择地势一致的岩陀生产大田（坡向一致），于2017—2019年逐年取样。岩陀野生品采集于云南省丽江市、曲靖市、玉溪市3个地州的11个乡镇，物种经过云南省农业科学院高山经济植物研究所的杨少华研究员鉴定系中药材岩陀的基源植物西南鬼灯檠（Rodgersia sambucifolia Hemsl.var.Sambucifolia）和羽叶鬼灯檠（Rodgersia pinnata Franch.），样品采集地见表1。

1.1.2

试验仪器。高效液相色谱仪（杭州瑞析科技有限公司，Agilent1260）；分析天平（梅特勒-托利多AE240、梅特勒-托利多AL204）；超声波振荡仪（上海隆拓仪器设备有限公司，SK5200 LH）；电热恒温水浴锅（北京永光明医疗仪器有限公司，XMTD-4000）。

1.1.3    試验试剂。岩白菜素（C14H16O9）标准品（中国食品药品检定研究院，批号111532-200202，纯度100%）。甲醇、乙腈（JT.Baker，色谱纯）；其他试剂均为分析纯。

1.2 试验方法

利用高效液相色谱法（HPLC）［26］测定各样品岩白菜素含量。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（18 ∶82）为流动相；检测波长为275 nm。理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2 000，色谱图见图1。

对照品溶液的制备：取岩白菜素对照品约10 mg，精密称定，置于100 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：取样品细粉约0.50 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理（功率300 W，25 kHz）40 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm有机滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，即得。平行配制2份。

1.3 数据处理

所有试验数据用Excel 进行标准化处理，再用SPSS 22.0 进行相关性和聚类分析，并用Origin 2020软件进行图像处理。

2 结果与分析

2.1 野生品与栽培品岩白菜素含量比较

通过对主要岩陀产地野生和栽培样品岩白菜素含量的分析可知，不同地区野生品种之间、野生品与栽培品、栽培品之间的岩白菜素含量有差异（图2）。野生品中，丽江宁蒗县（CY01）、玉龙县（MY01、MY02、MY03、BS01、XS01、ST01）、古城区（DD01、DD02、DD03、SY01）和玉溪易门县（YM01、YM02、YM03、YM04、YM05、YM06）的岩白菜素含量较高，分别为5.84%、5.65%、5.52%和5.42%，其中丽江宁蒗县的野生品含量最高，比曲靖马龙县（ML01含量为4.32%）高35.19%，这与李海涛等［23］研究岩陀适宜生长区域的结果一致。栽培品由于受到生长年限、生境差异等因素的影响，样品间岩白菜素含量差异明显，其中丽江太安基地（TA03）和美自基地（MZ02、MZ03、MZ04）的岩白菜素含量较高，分别为5.35%和5.19%，丽江鲁甸基地（LD03）、丽江后山基地（HS02、HS03、HS04）的岩白菜素含量较低，分别为3.15%和3.46%。丽江栽培品的岩白菜素含量在3.93%～5.19%，丽江美自基地、太安基地种植岩陀岩白菜素含量显著高于曲靖马龙县野生品，丽江太安基地岩白菜素含量与玉溪易门县野生品差别不大。

2.2 野生品与栽培品岩白菜素含量相关性分析

通过 Origin 2020软件，对采集的岩陀样品进行相关性分析，结果如图3所示，各组分间样品相关性呈负相关，热图颜色较深；组分内样品相关性呈正相关，热图颜色较浅各样品间相关性差异较大。从图3可以看出，同一乡镇的岩陀野生品大多呈正相关，其中MY01与MY02、XS01与MY03颜色较浅，YM01与YM02、YM05与YM02、YM05与YM01颜色较浅，表明同一个小区域内野生岩陀岩白菜素含量差别较小。曲靖马龙野生品与丽江地区野生品多呈负相关，其中ML01与BS01颜色较深，ML01与CY01颜色最深，表明曲靖马龙野生品与大多数丽江地区野生品的岩白菜素含量存在较大差距。玉溪易门野生品与丽江地区野生品多呈正相关，其中YM01与MY01、YM05与MY01颜色较浅；YM02与ST01颜色最浅，表明丽江、玉溪易门两地岩陀的岩白菜素含量相差不大。丽江地区不同乡镇间野生品相关性有很大差异，其中BS01与CY01呈显著负相关，颜色较深；SY01与CY01、MY03与DD02、MY03与DD03呈正相关，颜色较浅。丽江古城区栽培品与其他地区野生品相关性分析显示，LT02与MY02、LT02与ML01、LT02与YM01、LT02与YM05、HS02与MY01、HS04与DD03、HS02与MY03、HS02与XS01、HS02与MY02、HS02与YM01、HS02与YM05热图颜色较深，表明丽江古城区2年栽培品与大多野生品岩白菜素含量差异较大。丽江玉龙县栽培品与其他地区野生品相关性分析显示，ST03与MY01、ST03与YM05呈颜色较浅；ST03与MY01颜色最浅，表明玉龙县3年栽培品岩白菜素含量与丽江野生品含量相当。美自基地栽培品与其他地区野生品相关性分析显示，美自基地2年栽培品多与野生品呈负相关，其中MZ02与MY01、MZ02与YM01、MZ02与YM05颜色较深，表明美自基地2年栽培品与野生品岩白菜素含量差距较大。丽江鲁甸乡、太安乡栽培品与丽江野生品相关性分析显示，LD03与XS01、TA03与SY01呈负相关，颜色较深；LD03与MY01、TA03与BS01、TA03与ML01呈正相关，颜色较浅，说明鲁甸乡、太安乡3年栽培品与丽江野生品岩白菜素含量差别不大。丽江地区各栽培品相关性分析显示，LD03与ST02、HS02与ST03、HS04与ST02、MZ02与ST03、TA03与LT02呈负相关，热图颜色较深，表明栽培品不同年份岩白菜素的含量差异明显；MZ02与HS02、LD03与ST03、MZ02与LT02、HS02与LT02呈正相关，颜色较浅，表明栽培品不同基地相同年份岩白菜素含量差异不大。

2.3 野生品与栽培品聚类分析

以巖白菜素为分类依据，采用SPSS 22.0软件对24个样地的18份野生品和12份栽培品进行聚类分析，结果显示（图4），30个样地样品可被分为3大类：第1类为MZ02、HS02、LD03、ST02、LT02、HS04、HS03；第2类为YM04、ML01、ST01、DD03、YM03、SY01；第3类为MZ03、XS01、YM02、BS01、MZ04、DD01、TA03、ST03、CY01、YM06、MY02、MY03、YM01、DD02、LT03、YM05、MY01，即将丽江境内的2年栽培品和后山基地的3～4年栽培品归为第一类，表明栽培2年岩陀岩白菜素含量都处于较低水平；将部分古城区、部分玉龙县、部分易门县和马龙区的野生 品归为第2类；将丽江、易门县大部分野生品与3～4年栽培品归为第3类，表明栽培品经过3～4年的种植，其岩白菜素含量达到或接近野生品。此外，聚类分析结果与相关性分析的热图结果相一致。

2.4 栽培年限与岩陀岩白菜素含量分析

选取丽江美自基地和丽江后山基地的2～4年生栽培品进行栽培年限与岩白菜素含量分析，结果表明（表2），同一基地内栽培年限与岩白菜素含量呈显著正相关，即岩白菜素含量随着种植年限的延长呈上升趋势，其中栽培2年的岩白菜素含量最低（美自基地为2.50%、后山基地为2.96%）；第2年岩白菜素到第3年岩白菜素积累最快，而第3年到第4年岩白菜素积累放缓，其中后山基地4年栽培品（HS04）与3年栽培品（HS03）相比岩白菜素含量甚至有所下降。栽培3年和4年时，美自基地栽培品含量均高于后山基地栽培品，其中4年栽培品岩白菜素含量差别最大，较后山基地增加了86.85%。此外，美自和后山基地栽培品岩白菜素平均含量为4.33%，与曲靖马龙县野生品岩白菜素含量（4.32%）相近。

3 讨论

野生岩陀由于受土壤、海拔、坡度、日照等生态因子影响，从而在云南形成了以丽江和香格里拉为中心的滇西北地区，并沿着高海拔山脉向怒江、大理、楚雄方向延伸；以禄劝县和寻甸县为中心的昆明地区，并沿着高海拔山脉向昭通方向延伸。此次从滇西中心带的丽江和昆明周边地区的玉溪采集的野生品岩白菜素含量高于曲靖地区，这与李海涛等［23］、杨生超等［20］、吕丽芬等［16］的研究结论相一致，说明以丽江、玉溪等海拔在2 600～2 900 m的横断山区是岩陀生长最适宜区，岩陀野生资源药材质量较好。

岩白菜素作为岩陀的次生代谢产物，该试验研究表明，其在岩陀体内的含量随生长年限的增加而增加，丽江产岩陀前2年处于缓慢积累阶段，第3年后处于快速增长阶段，第4年增速放缓，即3～4年生的岩陀质量较好且稳定，岩白菜素含量接近丽江当地野生品，丽江地区栽培岩陀品质有保障。因此，栽培岩陀可以作为野生岩陀的替代资源使用，具有质量等同性，结合丽江当地种植成本、土地利用率、经济效益等因素综合考虑，建议栽培种植3～4年后即可采收。

不同栽培地块由于培育技术、种植模式等方式的不同，从而导致栽培品的品质、产量存在差异，下一步将从培育技术方面着手，总结并提出研究科学合理的管理措施，提高药材品质。此外，该研究从岩陀主要有效成分岩白菜素的含量进行分析，下一步将对于没食子酸、水晶兰苷等有效物质和浸出物含量入手，更加全面地探究岩陀在栽培过程中有效物质的积累、转化规律，为人工栽培药材替代野生药材提供依据，从而指导生产，推动岩陀的规范化和规模化种植，为市场提供质量稳定可靠的药材。

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