电针三阴交对自然围绝经期大鼠雌二醇和大脑皮层神经递质的影响

彭晓涛，程凯，徐玲，李由

(1.北京医院针灸按摩科，北京 100730；2.北京中医药大学针灸推拿学院)

·基础研究·

电针三阴交对自然围绝经期大鼠雌二醇和大脑皮层神经递质的影响

彭晓涛1，程凯2，徐玲2，李由2

(1.北京医院针灸按摩科，北京 100730；2.北京中医药大学针灸推拿学院)

目的 研究电针三阴交对自然围绝经期大鼠卵巢雌二醇(E2)和大脑皮层神经递质的影响。方法 本实验以自然衰老大鼠为模型，将大鼠以随机数字法分为治疗组(电针组)、模型组(对照组)、正常组(青年组)，每组7只。治疗组大鼠予三阴交电针治疗，隔日一次，共治疗15 次。其他两组大鼠进行常规饲养，不进行针刺，隔日抓取。采用高效液相色谱-配以电化学检测法(HPLC-ECD)测定各组大脑皮层中神经递质的含量，酶联免疫吸附法测定卵巢E2含量。结果 E2模型组的E2含量比正常组显著降低(P<0.01)，治疗组的E2含量比模型组显著升高(P<0.01)。与正常组比较，模型组大鼠多巴胺(DA)含量下降不明显(P>0.05)，NE的含量显著下降(P<0.01)，5-羟色胺(5-HT)的含量升高显著(P<0.01)；模型组的5-HT/去甲肾上腺素(NE)值显著升高(P<0.01)。与模型组比较，治疗组大鼠的DA含量升高显著(P<0.01)，NE的含量也明显升高 (P<0.05)，5-HT的含量显著降低(P<0.01)，治疗组的5-HT/NE值降低显著(P<0.01)。结论 电针三阴交可以有效调节自然衰老围绝经期大鼠卵巢E2和大脑皮层神经递质的含量。

围绝经期;电针;穴,三阴交;雌二醇;大鼠,Sprague-Dawley

围绝经期是妇女从生育期过渡到老年期的转折点，在这一时期由于激素水平的变化所导致的一系列以自主神经功能紊乱为主的症候群，即围绝经期综合征(PMS)。本病的主要临床表现有骨关节痛、疲乏、情绪波动、头痛、失眠、潮热、出汗等[1-3]。现代医学的治疗方法以激素替代疗法(HRT)为首选，虽然疗效确切，但其相关副作用的报道[4-6]亦屡见不鲜。针灸治疗本病疗效肯定[7]。三阴交穴作为肝脾肾三经之汇，尤为首选[8]。本实验以自然衰老的围绝经期大鼠为模型，通过电针三阴交穴，观察大鼠卵巢E2和大脑皮层神经递质[去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)]的变化，探讨E2与神经递质的相关性。

1 材料与方法

1.1 实验动物 本实验动物皆购于北京维通利华动物中心[SCXK(京)2012-0001]。清洁级SD大鼠共40只,3月龄SD大鼠7只,体质量(220±20)g;11～15月龄SD 大鼠33 只，体质量(320±20)g。实验室温度(20±2)℃，湿度65%,12 h光暗周期,自由摄食、饮水。在上述条件下饲养30 d，自第30天晚上，禁食12 h，于第31天上午统一取材。

1.2 动物模型及分组 雌性SD大鼠在11～15月龄时的激素水平及生理病理变化与人类妇女围绝经时期相似，通过阴道组织涂片法[9]进行3个动情周期(约15 d)的连续监测。根据动情间期阴道分泌物及细胞学的变化[10]，结果显示大鼠处于动情间期，符合围绝经期的变化规律，提示该月龄大鼠已经进入围绝经期。故而本实验选择的动物模型为11～15月龄的SD大鼠。根据上述标准，筛选出14只大鼠，以随机数字法分组：治疗组7只，模型组7只。7只3月龄的SD大鼠为正常组。

1.3 治疗方法 固定大鼠，取双侧三阴交(大鼠后肢，内踝尖直上10 mm)，直刺3 mm，连接电针仪。频率：2/100 Hz，交替刺激；波形：疏密波；强度：0.1～0.2 mA，以针柄轻微颤动为好，留针20 min，隔天1次，共15次。其他两组不针刺，仅给予与治疗组等量抓取和固定刺激。第31天统一取材，取材前禁食12 h。

1.4 取材和指标含量测定 取材时,大鼠快速断头,剥离大脑皮层;解剖腹腔,取左侧卵巢。液氮保存，并放入-80 ℃冰箱。

卵巢E2采用酶免法测定；大脑皮层神经递质(DA、NE、5-HT)采用高效液相色谱-配以电化学检测法(HPLC-ECD)测定。

1.5 统计学处理 采用SPSS21.0 进行统计分析，计量资料先进行正态分布t检验，组间差异进行ANOVA单因素方差分析，相关性分析采用Pearson法。

2 结果

2.1 电针三阴交穴对自然围绝经期大鼠卵巢E2的影响 与正常组[(671.21±140.60) pmol/L]相比，模型组的E2含量[(213.37±63.38) pmol/L]显著降低，差异有统计学意义(P<0.01)。和模型组相比，治疗组的E2含量[(462.90±157.77) pmol/L]显著升高，差异有统计学意义(P<0.01)。

2.2 电针三阴交穴对自然围绝经期大鼠大脑皮层中神经递质的影响 见表1。

表1 各组大鼠大脑皮层中DA、NE、5-HT的比较

组别鼠数(只)DANE5-HT5-HT/NE正常组70.02±0.010.36±0.160.50±0.122.35±0.96模型组70.01±0.010.07±0.01b0.96±0.23b8.78±1.34b治疗组70.03±0.01a0.21±0.03c0.51±0.16a4.12±1.90a

注：与模型组比较,aP<0.01，cP<0.05;与正常组比较,bP<0.01

2.3 围绝经期大鼠E2与神经递质的相关性 结果表明，各组大鼠的E2与神经递质的变化趋势具有高度的相关关系。其中E2与NE、DA等儿茶酚胺类神经递质呈正相关，与5-HT呈负相关。利用回归方法进行分析显示，E2与NE呈显著正相关(y=2.337x - 0.074，r=0.995，P<0.01)，与DA无相关关系(r=0.069，P>0.05)。E2与5-HT呈负相关(y=-3.721x+1.113，r=0.807，P<0.01)。

3 讨论

围绝经期综合征在中医属于“绝经前后诸症”的范畴，在历代文献的记载，散在于多种病症之中，如“失眠”、“脏躁”、“郁证”等。中医理论认为，本病与肝、脾、肾三脏关系密切。肾为先天之本，脾为后天气血生化之源，女子则以肝为先天。肾气虚，天癸竭，气血不足，血海空虚，且肝肾同源，肝失疏泄，故而诸症皆现。针灸治疗本病，通过对相应穴位的刺激，改善机体功能紊乱，调节人体内分泌、神经、免疫系统的失调，从而缓解相关症状，达到治疗的目的。针灸治疗的疗效肯定，且安全无毒副作用，逐渐被人们所认可。三阴交穴，是足太阴脾经穴位，又是足三阴经之交汇穴，可通调脏腑，有补肝益肾，健脾和胃，通经活血，利湿化浊之功效，是临床治疗本病的首选穴位。

在围绝经期综合征的发生发展过程中，激素水平的变化是其主要原因。卵巢作为女性的性腺，是分泌雌激素的主要场所，随着卵巢功能衰退，E2的分泌明显减少，实验结果亦显示，模型组的卵巢E2含量较正常组明显降低(P<0.01)，符合生理变化规律。E2的减少，导致心血管系统、生殖系统、骨骼系统、糖脂代谢及神经递质活性的异常[11-14]，出现抑郁、失眠、骨质疏松、糖脂代谢紊乱等症状。电针三阴交后，治疗组大鼠卵巢E2明显升高(P<0.01),表明电针三阴交可以改善围绝经期雌激素低分泌状态，延缓卵巢的衰老，从而缓解围绝经期综合征的相关症状。

围绝经期综合征的临床表现多以自主植物神经功能紊乱为主，如焦虑、潮热、抑郁等，其发病机制可能与大脑皮层中枢神经递质的浓度变化有关。其中，研究显示，5-HT的浓度改变，可能对下丘脑的体温调节中枢引起刺激而引发潮热[15]，与失眠[16]和抑郁[17]亦有相关性。DA可能抑制促性腺激素释放激素(GnRH)的分泌[18]，而NE的下降可能引发失眠[19]和抑郁[20]。兴奋性递质与抑制性递质的释放，需要协调的比例，才能维持稳定的功能。本实验发现，NE的含量较正常组下降(P<0.01)，而5-HT则明显升高(P<0.01)，进而使5-HT/NE升高(P<0.01)。电针三阴交可以显著调节DA、NE、5-HT的含量(P<0.01、P<0.05、P<0.01)，降低5-HT/NE的比值(P<0.01)。提示电针三阴交穴可以有效调节围绝经期大鼠大脑皮层神经递质的含量，改善相关症状。

同时，E2和神经递质进行了回归分析，结果显示，E2与5-HT 呈负相关(P<0.01),与NE呈正相关(P<0.01)，表明E2与中枢神经递质之间存在相关性关系，两者之间相互作用、相互影响，共同调节机体的平衡。

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The efficacy of electro-acupuncturing Sanyinjiao on estradiol and cerebral neurotransmitters in natural premenopausal rats

PengXiaotao*,ChengKai，XuLin,LiYou

(*DepartmentofAcupuncture&Massage,BeijingHospital,Beijing100730,China)

Objective To investigate the efficacy of electro-acupuncturing (EA) Sanyinjiao on estradiol and cerebral neurotransmitters in natural premenopausal rats.Methods The natural aging rats was slected as animal model.The rats were randomly divided into treatment group (EA group),model group (control group),the normal group (youth group),7 rats in each group.Rats in EA group were treated by Sanyinjiao acupuncture every other day,and totally 15 times.Other groups of rats were feed routine and crawled every other day without acupuncture.Cortex neurotransmitter levels of each group were determined by HPLC with electrochemical detection (HPLC-ECD).The contents of estradiol of each group were detected by enzyme-linked immunosorbent assay.Results Estradiol level of model group was significantly lower than that of the normal groups(P<0.01).Compared with model group,Estradiol was increased significantly in treatment group (P<0.01).Compared with normal group,DA was decreased in model group,but no statistical significance (P>0.05),while the NE was decreased and 5-HT increasing significantly (P<0.01).The ratio of 5-HT/NE was increased significantly in model group(P<0.01).Compared with the model group,DA and NE of treatment group were significantly increased (P<0.01,P<0.05),but 5-HT was significantly decreased (P<0.01).The ratio of 5-HT/NE was decreased significantly in treatment group when compared with model group (P<0.01).Conclusion EA Sanyinjiao can effectively regulate the ovarian estradiol and cerebral cortex neurotransmitters of natural aging perimenopausal rats.There are significant correlation between estradiol and the cerebral cortex neurotransmitters including DA,NE and 5-HT.

Perimenopause ;Electroacupuncture;Point SP6 (Sanyinjiao);Estradiol;Rats,Sprague-Dawley

彭晓涛，医师,Email:happypger@163.com

R711.51

A

10.3969/J.issn.1672-6790.2015.05.019

2015-07-10)