基于综合评分法优选玄参产地加工方法*

张 浪，严福林，2，刘晓龙，王志威，任得强，黄久艳，魏升华，2▲

(1贵州中医药大学 药学院，贵州 贵阳 550000；2贵州医科大学 药用植物功效与利用国家重点实验室，贵州 贵阳 550000)

玄参是玄参科植物玄参ScrophularianingpoensisHemsl.的干燥根。其能清热凉血，滋阴降火，解毒散结。功用于热入营血，温毒发斑，热病伤阴，舌绛烦渴，津伤便秘，骨蒸劳嗽，目赤，咽痛，白喉，瘰疬，痈肿疮毒[1]等。

主要含环烯醚萜类成分，还含苯丙苷类化合物、挥发油、植物甾醇、生物碱、天门冬素、胡萝卜素等[2-5]。现代药理研究发现具有解热、镇痛、抗炎、抗肿瘤、心肌作用、抗疲劳、降血糖等作用[6-10]。2015版《中国药典》规定的方法为冬季茎叶枯萎时采挖，除去根茎、芽、须根及泥沙，晒或烘至半干，3～6 d，反复数次至干燥即可，《中国药典》虽收载其加工方法，但并未做详细的参数规定。据查阅文献发现，玄参的产地加工方法主要有“发汗”、烘干、阴干、蒸切、煮切等[11-14]，目前尚没有统一的产地加工标准，存在盲目性与随意性，这造成了玄参药材质量的差异性，从而影响其临床疗效，为了提高玄参药材的质量，有必要进行玄参的产地加工方法的优选。本文对玄参32种不同加工方法进行考察，以浸出物、哈巴苷、哈巴俄苷含量为评价指标，采用综合评分法优选玄参的产地加工方法。

1 材料与方法

1.1 仪器

LC-2030CN型高效液相色谱仪、万分之一分析天平(上海佑科仪器仪表有限公司 FA1004B)、十万分之一分析天平(AUW120D)、千分之一天平(上海浦春计量仪器有限公司JA2003)、DHG-9073B5电热恒温鼓风干燥箱、恒温水浴锅(常州国华电器有限公司HH-6)、电炉、干燥器、锥形瓶、冷凝管、扁形称量瓶、蒸发皿、石棉网、移液管。

1.2 试药

哈巴苷对照品(H-021-161128)和哈巴俄苷对照品(H-020-170809)购自成都瑞芬思生物科技有限公司；乙腈(20170621)、甲醇(20170502)和磷酸为色谱纯，均购自天津市科密欧化学试剂有限公司。

1.3 产地加工方法

采用32种加工方法对样品进行处理，样品编号及加工方法如下：玄参挖出后，以清水洗去泥沙，晾干外表面水分。处理方法见表1。

表1 不同加工方法(n=32)

2 结果与分析

2.1 水分、浸出物测定

取上述药材样品处理并过二号筛后备用，水分测定按照2015版《中国药典》四部0832项下第二法烘干法进行测定，以水热浸方法测定玄参浸出物含量。取32个不同加工方法处理的玄参药材，操作方法按2015版《中国药典》四部2201项下水浸法进行测定。结果见表2。

表2 不同加工方法对玄参药材中浸出物测定(n=3)

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以乙腈为流动相A，以0.03%磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱(0～10min，3%～10%乙腈；10～20 min，10%～33%乙腈；20～25 min，33%～50%乙腈；25～30 min，50%～80%乙腈；30～35 min，80%乙腈；35～37min，80%～3%乙腈)；检测波长为210 nm。柱温箱温度30 ℃，理论塔板数按哈巴俄苷与哈巴苷峰计算均应不低于5000。色谱图见图1。

A.对照品；B.供试品；1.哈巴苷；2.哈巴俄苷

2.2.2 对照品的制备

分别精密称定哈巴苷对照品、哈巴俄苷对照品适量，加甲醇制成含哈巴苷0.04977 mg/mL、哈巴俄苷0.01599 mg/mL的混合对照品储备溶液。

2.2.3 供试品的制备

取本品过40目筛的粉末约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称定重量，浸泡1 h，超声处理(功率500 W，频率40 kHz)45 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 标准曲线的制备

精密吸取“2.2.2”项下不同体积的对照品于10 mL定容瓶中定容，配制成一系列浓度的对照品混合溶液。在上述色谱条件下进样，测定各成分的峰面积。以浓度为X轴，峰面积为Y轴，绘制标准曲线，并计算出哈巴苷回归方程Y=7×106X+3328.5，哈巴俄苷回归方程Y=3×107X+2329.5，且哈巴苷和哈巴俄苷分别在0.0221～0.1327 mg/mL(r=0.9999)、0.0053～0.0320 mg/mL(r=0.9998)内具有良好的线性关系，结果见表3。

表3 哈巴苷和哈巴俄苷的标准曲线(n=6)

2.2.5 精密度试验

精密吸取浓度分别为0.169 mg/mL、0.1599 mg/mL的哈巴苷、哈巴俄苷的混合对照品溶液，连续进样6次，每次20 μL，测定各对照品峰面积。计算两种对照品峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为0.18%、0.39%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性试验

精密称取样品适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，配制好后，连续进样6次，每次20 μL。分别测定样品经过0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h中哈巴苷与哈巴俄苷的变化，记录结果。计算两种供试品峰面积的相对标准偏差分别为1.90%、0.21%，结果表明供试品在24 h内稳定性良好。

2.2.7 重复性试验

称取同一批药材6份，每份约0.5 g，精密称定，按“2.2.3”项下处理样品，在上述色谱条件下，其哈巴苷和哈巴俄苷含量分别为2.0696 μg、0.5427 μg，RSD分别为1.56%、1.35%，结果表明重复性良好。

2.2.8 加样回收率试验

称取同一批的样品药材约0.25 g，平行6份，精密称定，分别精密加入哈巴苷、哈巴俄苷如表4所示的量，按“2.2.3”项下供试品溶液的制备方法进行制备，按上述色谱条件进行测定。然后测定计算回收率，结果回收率均在95%至105%之内，表明试验过程可靠，结果见表4。

表4 哈巴苷加样回收实验结果(n=6)

2.2.9 样品含量测定

精密吸取供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪测定，根据线性回归方程计算即得，结果见表5。

表5 哈巴苷及哈巴俄苷含量(n=32)

2.3 综合评分法优选最佳产地加工方法

本实验采用综合分析法优化玄参产地加工方法，以浸出物、哈巴苷和哈巴俄苷含量为指标，以三个指标越高越好。在数据处理时引用指标隶属度，即指标隶属度=(指标最大值-指标值)/(指标最大值-指标最小值)。根据各指标在玄参中的重要性，考虑以浸出物占10%、哈巴苷占45%、哈巴俄苷占45%的权重，实验综合评分=浸出物隶属度×10%+哈巴苷占隶属度×45%+哈巴俄苷隶属度×45%，总分为1.00分。评分结果以综合分数作为总指标进行直观分析，结果见表6。

表6 综合评分

3 结论与讨论

32种产地加工方法中，加工方法为阴干时，浸出物含量少于60%，其余均大于60%，32种方法中哈巴苷、哈巴俄苷总含量在0.84%～1.39%之间，符合《中国药典》(2015版)标准规定。综合评分法优选出最佳的产地加工方法为：直接发汗6 d，80 ℃烘干，浸出物含量为63.49%，哈巴苷含量为0.65%，哈巴俄苷含量为0.47%，综合评分(0.6136)最高，表明其方法较好。

通过试验可知采取的产地加工方式不同对药材的质量影响极大，且是否采用“发汗”及“发汗”时间的长短对玄参药材的质量也均有影响，如浸出物及化学含量方面，这为玄参药材的产地加工提供了重要依据，同时间接表明了加工方法发汗对玄参药材的加工影响极大。传统认为，玄参“发汗”加工的药材质量好，但通过成分分析只是其验证的一方面，还需进行药理、药效等相关研究，来验证其“发汗”为玄参最适的产地加工方法。

中药材的产地加工是保证药材质量的关键一步，产地初加工方式较多，其中干燥方式和干燥温度的不同，会造成药材质量的差异明显，干燥方式如阴干、晒干、烘干、“发汗”等，干燥方式不同，会造成质量的差异；干燥温度的把控十分重要，过高或过低都会使药材质量大打折扣。对中药材的产地初加工方法的研究，更有利实现中药“安全、有效、稳定、可控”。