类特异性分子印迹固相萃取/高效液相色谱法分析马尿泡果实中4种托烷类生物碱

曾绍梅，焦必宁，刘广洋，王珊珊，赵风年，张　超，王　静，

金茂俊1，金　芬1,邵　华1,郑鹭飞1,马兴斌4,吴金措姆4,

苏学素2*，佘永新1*

(1.中国农业科学院　农业质量标准与检测技术研究所，北京　100081；2.西南大学　化学化工学院，重庆

400715； 3.中国农业科学院　柑桔研究所，重庆　400712;4.西藏自治区农牧科学院

畜牧兽医研究所，西藏　拉萨　850006)

类特异性分子印迹固相萃取/高效液相色谱法分析马尿泡果实中4种托烷类生物碱

曾绍梅1,2，焦必宁3，刘广洋1，王珊珊1，赵风年1，张超1，王静1，

金茂俊1，金芬1,邵华1,郑鹭飞1,马兴斌4,吴金措姆4,

苏学素2*，佘永新1*

(1.中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，北京100081；2.西南大学化学化工学院，重庆

400715； 3.中国农业科学院柑桔研究所，重庆400712;4.西藏自治区农牧科学院

畜牧兽医研究所，西藏拉萨850006)

摘要：以樟柳碱(ASD)为模板分子，甲基丙烯酸(MAA)为功能单体，三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TRIM)为交联剂，乙腈为致孔剂，采用沉淀聚合法，合成了对4种托烷类生物碱(樟柳碱、东莨菪碱、山莨菪碱、阿托品)具有类特异性识别能力的聚合物。通过紫外光谱预测法筛选了最佳功能单体与配比。采用振荡平衡吸附实验对印迹和非印迹聚合物进行了吸附性能表征，结果表明，印迹聚合物对4种生物碱的饱和吸附量分别为7.53，10.90，24.27，11.04 μg/mg，相对选择性系数分别为3.58，1.49，1.62，2.25。以该分子印迹聚合物为固相萃取柱填料，采用分子印迹固相萃取/高效液相色谱法实现了藏药马尿泡中4种托烷类生物碱的高效富集和快速分离。该方法在2～250 μg/mL范围内具有较好的线性关系，相关系数(r2)为0.999 9，检出限为0.26～0.39 μg/mL，在10,50,100 μg/g加标浓度下的平均回收率为70.0%～96.3%，相对标准偏差(RSD)≤ 5.7%。该固相萃取柱重复使用率高，分离效果良好，有效去除了样品中杂质的干扰，大大提高了马尿泡果实中4种托烷类生物碱的萃取效率。

关键词：分子印迹聚合物；高效液相色谱；固相萃取；托烷类生物碱；马尿泡

马尿泡(PrzewalskiatanguticaMaxim.)又名唐古特马尿泡或矮莨菪[1]，属茄科马尿泡属多年生草本植物，具有消肿散痛等多种药理功效，临床主要用于各种因素引起的内脏、头部等疼痛及皮肤病等。马尿泡主要含有托品碱、红古豆碱、莨菪碱、东莨菪碱、樟柳碱、山莨菪碱、东莨菪碱内酯等多种活性成分，其中具有临床药效作用的主要是樟柳碱(Anisodine，ASD)、东莨菪碱(Scopolamine，SPM)、山莨菪碱(Anisodamine，ASM)和阿托品(Atropine，ATP) 4类托烷类生物碱(结构见图1)[2-4]。目前，该类生物碱的提取方法主要有超临界流体萃取(SFE)[5]、液液萃取(LLE)[6]、固相萃取(SPE)[7]、微波辅助提取[8]等技术。由于马尿泡全株中所含化学成分较多，基质复杂，影响了托烷类生物碱的选择性提取效率。因此，开发一种高效分离富集天然产物中托烷类生物碱的提取技术具有重要意义。

分子印迹聚合物(Molecularly imprinted polymers,MIPs)是一种具有较强分子识别能力的新型高分子仿生材料，具有“类抗体”的特异性、高选择性、高强度等优点，而且制备简单、成本低、可重复利用，非常适合作为固相萃取柱的填料[9]。目前，分子印迹技术在色谱分离、固相萃取、临床药物分析、食品检测等领域得到了广泛应用[10-12]，在天然产物如黄酮、生物碱、多酚等活性成分提取领域中的应用亦逐渐增多[13-15]。但大多数研究是针对单一成分作为提取目标物合成分子印迹聚合物。目前，分子印迹固相萃取/高效液相色谱法用于马尿泡果实中4种托烷类生物碱的分析研究报道较为鲜见。

托烷类生物碱中多数化合物的结构相似，其活性功能相近，在中草药治疗疾病过程中往往可发挥同步联合功效，因此，本研究合成了对4种托烷类生物碱具有类特异性识别能力的印迹聚合物，研究了印迹材料对4种生物碱的分子识别特性，研制了能同时富集4种托烷类生物碱的分子印迹固相萃取柱，建立了基于分子印迹固相萃取技术的高效液相色谱快速分离马尿泡中4种托烷类生物碱的检测方法。该方法前处理简便、高效且有机溶剂用量低，适用于天然植物中4种托烷类生物碱的提取与检测。

图1　4种托烷类生物碱的化学结构Fig.1　Chemical structures of four tropane alkaloids

1实验部分

1.1试剂与仪器

氢溴酸樟柳碱、氢溴酸东莨菪碱、硫酸阿托品、氢溴酸山莨菪碱和芦丁对照品(中国食品药品检定研究院)；乙腈、甲醇(色谱纯，德国Merck公司)；甲基丙烯酸(MAA)、4-乙烯基吡啶、4-乙烯基苯甲酸、偶氮二异丁腈(AIBN)、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TRIM)、乙二醇二甲基丙烯酸酯(分析纯，Sigma-Aldrich公司)；其他试剂均为分析纯(北京百汇佳兴科技有限公司)；藏药马尿泡(西藏金珠医药公司)。

NANODROP 2000C型紫外-可见分光光度计(Thermo Scientific)，美国 Waters 2695 型高效液相色谱仪，Waters 2998二极管阵列检测器；Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm ×150 mm,5 μm)。RH digital KT/C safety control加热磁力搅拌器(德国IKA公司)；NTS-4000BH恒温振荡机(日本东京理化株式会社)；DZG6020型真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；KQl00DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，Biofuge Stratos型离心机(德国Thermo公司)；BWX24-VSM-3旋涡振荡器(美国Scientific Industries公司)；Milli-Q纯水机(法国 Millipore 公司)，分析天平(赛多利斯科学仪器公司)。

1.2分子印迹聚合物的合成

采用沉淀聚合方法[16]，称取 40.0 mg模板分子樟柳碱和34.4 mg功能单体MAA，将两者混合溶于50 mL乙腈，20 ℃超声预聚合30 min。依次加入338.4 mg TRIM及 50 mg AIBN。通N2脱氧10 min，密封烧瓶，于60 ℃水浴恒温振荡聚合24 h，转速1 000 r/min，得白色悬浮液体。离心后将得到的聚合物用乙酸-甲醇(体积比2∶8)洗脱液洗脱模板分子，索氏提取至上清液无模板分子检出。用甲醇洗涤5 h以除去乙酸和未反应的物质。于70 ℃下真空干燥12 h，备用。非分子印迹聚合物(NIP)微球的制备方法同上，但在制备过程中不加入模板分子。按以上方法根据模板分子与交联剂的不同配比得到3种聚合物(MIP5，MIP10，MIP15)。

1.3聚合物的形态表征

将制备的 MIP10和NIP10 进行扫描电镜(SEM)观察，分析其表面形态特征。

1.4聚合物吸附性能实验

各称取 6份5 mg 分子印迹聚合物(MIP5，MIP10，MIP15)，分别置于6个10 mL 离心试管中，加入4 mL 含有4种混标的乙腈溶液(5 μg/mL)，室温下分别振荡 1.5，2.5，5，12，16，24 h，离心10 min(10 000 r/min)，取出上清液，氮气吹干后用甲醇溶解，过0.22 μm滤膜，用 HPLC 测定其浓度。采用相同方法，取2.5～100 μg/mL的混合溶液，以最优吸附时间恒温振荡。由公式(1)计算出聚合物对底物的吸附量Q(μg/mg)，绘出吸附量与溶液浓度关系的等温曲线。式中Q为聚合物对样品的结合量，Co和Ce分别为混合样品的初始浓度和吸附后的浓度(μg/mL)，V为吸附溶剂的体积(mL)，m为聚合物的质量(mg)。用同样方法计算NIPs的结合量。依据吸附速率和平衡吸附量，衡量不同聚合条件下分子印迹聚合物的特异性吸附性能。

Q=(Co-Ce)V/m

(1)

1.5选择性能评价实验

为研究ASD-MIP 和ASD-NIP 对ASD及其类似物(SPM，ASM，ATP)的选择性能，实验配制一定浓度的4种托烷类生物碱混合标准溶液,取25 mL 混合溶液于锥形瓶中,加入5 mg 分子印迹聚合物，在恒温振荡器中振荡5 h,使吸附达到平衡,离心分离,测定上清液中各物质的平衡浓度,按公式(2)和(3),计算各种物质的分配系数[17]，从而得到MIP和NIP对目标物的印迹因子IF。

Kd=Co/Ce

(2)

式(2)中，Kd(mL/g)为某物质的分配系数；Ce(mg/mL)为上清液中该物质的平衡浓度；Co(mg/g)为底物的初始浓度。

IF=KMIP/KNIP

(3)

式(3)中，KMIP和KNIP分别为印迹和非印迹聚合物对目标物吸附达平衡的分配系数，IF为印迹因子。

1.6马尿泡果实托烷类生物碱的分子印迹固相萃取

称取1 g马尿泡果实细粉于50 mL离心管中，以3 mL氨水溶解，涡旋2 min，加入10 mL乙腈，超声5 min，用脱脂棉过滤，重复2次，合并萃取液。旋蒸浓缩至近干后用氮气吹干，用2 mL甲醇超声溶解复溶，待MISPE净化。

用筛选所得最优MIP(100 mg)溶于1 mL丙酮填充SPE柱(Agilent公司)，用筛板压实。上样前依次用1 mL乙腈预淋洗，甲醇和水各2 mL活化。用1 mL浓度为50 μg/mL的4种生物碱标准品溶液上样，采用不同溶剂进行淋洗和洗脱，收集上样、淋洗、洗脱液，吹干后溶于1 mL甲醇中，用HPLC测定。

2结果与讨论

2.1聚合物合成条件的优化

以樟柳碱为模板分子，甲基丙烯酸为功能单体，三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯为交联剂，乙腈为致孔剂，采用紫外光谱预测法筛选了功能单体的种类和配比。如图2A所示，模板分子与MAA，4-乙烯基吡啶(4-VP)及4-乙烯基苯甲酸(4-VA)相互作用后，吸收波长发生了不同程度的改变，其中ASD-MAA预聚合物的最大吸收波长发生红移的程度最大，这表明ASD与MAA的相互作用力较强，更容易形成新的聚合物[18]，这可能是由于模板分子显碱性，与MAA不仅具有π-π共轭相互作用、氢键作用力，还能形成稳定的离子键，因此实验选择MAA作为功能单体。同时，依据模板分子ASD与功能单体MAA在不同配比(1∶4，1∶6，1∶8)下所获得的紫外光谱图分析(如图2B)，当模板分子与功能单体的比例为1∶4时，聚合物的波长红移最显著，故确定其为模板分子与MAA的最佳比例。由于分子印迹聚合物的识别特性不仅与功能单体相互作用有关，其空间位点的形成还与交联剂、致孔剂等其他聚合物条件相关，因此，本实验分别对交联剂TRIM和乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)及其配比与用量进行了优化，合成了一系列聚合物。如表1所示，MIP5，MIP10和MIP15代表模板分子与交联剂的摩尔比分别为1∶5，1∶10，1∶15，以吸附量与底物量之比计算吸附效率。平衡吸附实验结果表明，MIP10具有最大的吸附量和吸附效率，因此后续实验中选择MIP10作为吸附材料。在模板分子、功能单体和交联剂的比例为1∶4∶10条件下，聚合物具有较好的识别能力和吸附特性，其识别机理见图3。

CompoundMIP5MIP10MIP15Adsorbance(μg/mg)Adsorptionefficiency(%)Adsorbance(μg/mg)Adsorptionefficiency(%)Adsorbance(μg/mg)Adsorptionefficiency(%)Anisodine1.0827.101.2932.261.0125.19Scopolamine0.6215.521.9949.781.2130.22Anisodamine1.0125.311.2831.920.8320.82Atropine1.0826.912.1353.361.4335.86

2.2樟柳碱分子印迹聚合物的形态分析

采用扫描电镜(SEM)对MIP和NIP的表面形态进行表征(如图4)，其中NIP表面粗糙，而MIP微粒为大小不一的球形，表面光滑。在同一标尺下进行比较，NIPs比MIPs小很多，可能是由于模板分子的存在占有一定的空间体积，洗脱之后留下大量孔穴，在微球数量基本相同的情况下，表现为粒径变大。同时，由于模板分子使分散介质的极性减小，对聚合物的溶解性增加，致使沉淀出的初级核颗粒变大，最终粒径增大[19-20]。

图3　樟柳碱分子印迹聚合物的合成机理示意图Fig.3　Schematic illustration of the fabrication mechanism of ASD MIP

图4　非印迹聚合物(NIP，A)和樟柳碱分子印迹聚合物(MIP10，B)的扫描电镜图Fig.4　Scanning electron micrographs of the non-imprinted polymer(NIP，A)and ASD molecularly imprinted polymer(MIP10，B)

2.3聚合物的吸附性能

为研究聚合物的结合特性，在吸附达到平衡后测定了室温下MIP及NIP的结合量Q，并对平衡浓度(Ce)作图。结果表明，印迹聚合物对结构类似物的吸附性能有一定差异，各分析物在MIP上的吸附率顺序为:ASM>ATP>SPM>ASD。其中因樟柳碱、阿托品和东莨菪碱的分子结构更为相近，具有相同趋势的吸附曲线，表明其结合位点与结合方式类似。在结合吸附实验中，聚合物对山莨菪碱的吸附量最高，这可能是由于山莨菪碱的莨菪醇部分桥环上多1个羟基，从而增加了氢键结合位点；因此，当结构类似物存在时，该化合物在竞争吸附过程中具有一定优势，这与彭畅等[21]的研究一致。当山莨菪碱浓度高于100 μg/mL，吸附量仍趋于上升。MIP对樟柳碱、东莨菪碱、山莨菪碱和阿托品的饱和吸附量分别为 7.53，10.90，24.27，11.04 μg/mg。而相应条件下,NIP的饱和吸附量分别为2.10，7.31，15.00,4.9 μg/mg。当浓度高于60 μg/mL时，MIP对4种生物碱的吸附量均明显高于NIP，随着浓度增大，MIP的吸附量依然有升高趋势，说明超过一定浓度时，MIP的吸附能力主要来自于特异性结合位点，而NIP的吸附为非特异性结合，不具有规律性。

2.4分子印迹聚合物的选择性识别性能

选择性是印迹聚合物最显著特征之一，MIP在去除模板分子后会留下与其形状以及结合部位相互匹配的孔穴，此孔穴可对模板分子进行选择性识别。以吸附分配系数Kd和印迹因子IF来表征印迹聚合物的选择特性。本实验选择SPM，ASM及ATP为结构类似物,考察了 MIP 的吸附选择性。由实验测得吸附量(Qe),根据公式(2)和(3)分别计算Kd和IF，IF值越大，表明MIP及NIP对该底物的选择吸附性越强。实验结果表明，MIP 对模板分子ASD的选择性大于其他3种物质，MIP对各种结构类似物的分配系数均高于NIP，而MIP和NIP对于结构相差较大的黄酮类化合物芦丁(RU)的吸附量较低且无选择性。以上结果表明，制备的印迹聚合物对4种托烷类生物碱结构类似物具有一定的类特异选择性。

2.5分子印迹固相萃取柱的条件优化

考察了4种托烷类生物碱在MISPE柱的保留特性。为了保留分析物，样品溶剂相对固定相的极性必须较弱或相当，若溶剂极性太强，分析物将不易被保留，吸附量降低。分别比较了二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇和乙腈为上样溶剂时，分子印迹固相萃取柱对目标物的吸附效果，结果表明，当乙腈为上样溶剂时，对模板分子的吸附率最高，这与合成MIP时选择乙腈为致孔剂有关,MIP在乙腈中的溶胀性最小，不会影响MIP识别位点与模板分子中功能基团的结合。以乙腈饱和的正己烷为最佳淋洗液，乙酸-甲醇混合液(2∶8)作为洗脱液，MISPE对4种生物碱具有良好的富集净化能力。该柱使用30次后，以50 μg/mL的4种生物碱标准品上样过柱检测，其回收率仍达82.2%(ASD)，88.8%(SPM)，77.4%(ASM)，82.8%(ATP)，表明该印迹柱具有良好的再生性能。

2.6分子印迹固相萃取/高效液相色谱方法的建立

图5　混合标准溶液的高效液相色谱图(100 μg/mL)Fig.5　Chromatogram of four tropane alkaloids(100 μg/mL)mixed standard solution

在MISPE萃取优化的条件下,分别对4种生物碱系列混合标准溶液进行萃取和HPLC分析，对其精密度、重现性、线性、回收率、检出限等方法学进行评价。

配制不同浓度的4种生物碱混合标准溶液，以峰面积对其浓度进行线性回归。结果表明，ASD，SPM，ASM和ATP 4种生物碱在5～250 μg/mL范围内，浓度(x,μg/mL)与对应峰面积(y)呈良好的线性关系，其线性方程分别为y=10 778x-5 907.3，y=11 019x+350 14，y=15 348x-2 003.6和y=14 096x-14 884，相关系数(r2)均为0.999 9，检出限(LOD,S/N=3)为0.26～0.39 μg/mL。通过添加标准溶液，测定加标回收率，每个加标浓度进行3次平行实验。在不同加标浓度下(10,50,100 μg/g)的平均回收率为70.0%～96.3%，相对标准偏差(RSD)不大于 5.7%(如表2)。图5为100 μg/mL 混合标准溶液的高效液相色谱图。

表2　马尿泡果实中4种生物碱的测定结果和回收率 (n=3)

2.7实际样品的分析

将本方法用于马尿泡果实中 ASD，SPM，ASM和ATP的测定。由图6可知，马尿泡样品的乙腈萃取液经固相萃取柱净化后，其基质干扰被有效去除。图6A为马尿泡果实提取液的色谱图，经MISPE柱净化后得到纯净色谱峰(图6B)，其杂峰被有效去除，同时得到难以通过全合成途径制得的消旋山莨菪碱[22]。样品中4种生物碱获得较好的萃取与回收，含量分别达到0.12，0.21，0.30，2.61 mg/g。

3结论

本文以樟柳碱为模板分子，甲基丙烯酸为功能单体，三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯为交联剂，乙腈为致孔剂，在模板分子、功能单体和交联剂的比例为1∶4∶10的合成条件下，聚合物对4种托烷类生物碱具有较好的识别能力和类特异性吸附性能。筛选和优化了分子印迹固相萃取条件，建立了基于MISPE技术的快速检测4种生物碱的高效液相色谱方法，实现了马尿泡果实中4种生物碱的富集、分离和检测，为研究天然植物的分离富集和中药制品中生物碱的质量控制提供了技术支撑。

参考文献：

[1]Lin R C.ChineseMedicineStandardLists.Beijing:Science Press(林瑞超.中国药材标准名录.北京：科学出版社),2011:60-61.

[2]Chinese Academy of Sciences.ChinaFloraEditorialBoard.67(1).Beijing:Science Press(中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志.第67卷 第1分册.北京：科学出版社),1978:28-31.

[3]Wang H,Pan L,Zhang X F.NorthwestPharm.J.(王环，潘莉，张晓峰.西北药学杂志),2002,17(1):9-11.[4]Ren X N,Ma Y J,Zhou M,Huo S H,Yao J L,Chen H.Chin.J.Chromatogr.,2008,26(2):223-227.

[5]Choi Y H,Chin Y W,Kim J,Jeon S H,Yoo K P.J.Chromatogr.A,1999,863(1):47-55.

[6]Qin G F,Li H X,Li Y B,Shen N M,Wang F.Chin.J.FoodHyg.(秦国富,李恒新,李永波,沈讷敏,王芳.中国食品卫生杂志)，2014,26(4):351-354.

[7]Li P,Wang H F,Shi W F,Liu L L,Liu W.ChongqingMed.(李萍，王化芬，史卫峰，刘兰兰，刘卫.重庆医学),2013，36(42):4405-4407.

[8]Lan C B.Chin.J.Pharm.Anal.(蓝长波.药物分析杂志),2014,34(12):2251-2256.

[9]Tan T W.MolecularlyImprintingTechniqueandApplication.Beijing:Chemical Industry Press(谭天伟.分子印迹技术及应用.北京:化学工业出版社)，2010:1-4.

[10]Wulff G.Chem.Rev.,2002,102(1)：1-27.

[11]Piletska E V，Bums R，Terry L A，Piletsky S A.J.Agric.FoodChem.,2012,60(1):95-99.

[12]Wang X X,Yang J,Xie S Y,Chen Y,Liu F L,Shen H Y,Xia Q H.J.Instrum.Anal.(王新鑫，杨军，谢晟瑜，陈扬，刘芳伶,沈昊宇，夏清华.分析测试学报)，2015,34(11):1213-1219.

[13]Lopez C,Claude B,Morin P,Max J P,Pena R,Ribet J P.Anal.Chim.Acta,2011,683(2):198-205.

[14]Qiu X Z,Peng C H,Wang S L,Guo H S,Lu L Q.J.Instrum.Anal.(丘秀珍，彭翠红，王少玲，郭会时，卢吕泉.分析测试学报),2015,34(12):1403-1407.

[15]Ji W H,Ma X L,Zhang J H,Xie H K,Liu F,Wang X.J.Chromatogr.A,2015,1387(27):24-31.

[16]She Y X,Cao W Q,Shi X M,Lv X L,Liu J J,Wang R Y,Jin F,Wang J,Xiao H.J.Chromatogr.B,2010,878(23):2047-2053.

[17]Spivak D A.Adv.Drug.Deliver.Rev.,2005,57(12):1779-1794.

[18]Ebru Oral,Nicholas A.Peppas,Polymer.,2004,45(18):6163-6173.

[19]Zhang Y,Dong X C.J.Instrum.Anal.(张毅,董襄朝.分析测试学报),2008,27(10):1025-1030.

[20]Su T T,Liu J B,Tang S S,Jin R F.Chem.J.Chin.Univ.(苏婷婷,刘俊渤,唐珊珊,靳瑞发.高等学校化学学报),2014,35(10):2146-2155.

[21]Peng C,Liu W J,Zhang C T,Zhang L,Zhang Z C.Chem.J.Chin.Univ.(彭畅,刘维娟,张春涛,张玲,张智超.高等学校化学学报),2009,30(11):2159-2164.

[22]Ng S W,Ching C K,Chan A Y,Mak T W.J.Chromatogr.B,2013,942:63-69.

Analysis of Four Tropane Alkaloids inPrzewalskiaTanguticaMaxim. by Analogous-specific Molecularly Imprinted Solid-phase Extraction Combined with High Performance Liquid Chromatography

ZENG Shao-mei1,2,JIAO Bi-ning3,LIU Guang-yang1,WANG Shan-shan1,ZHAO Feng-nian1,ZHANG Chao1,WANG Jing1,JIN Mao-jun1,JIN Fen1,SHAO Hua1,ZHENG Lu-fei1,MA Xing-bin4,WUJIN Dromu4,SU Xue-su2*,SHE Yong-xin1*

(1.Institute of Quality Standards & Testing Technology for Agri-Products,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing100081,China；2.School of Chemistry and Chemical Engineering,Southwest University,Chongqing400715,China;3.Citrus Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Chongqing400712,China;4.Institute of Veterinary and Animal Husbandry,Tibet Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences,Lhasa850006,China)

Abstract：New molecularly imprinted polymers(MIPs)for recognizing four tropane alkaloids(anisodine,scopolamine,anisodamine,atropine) were synthesized by precipitation polymerization using anisodine(ASD)as template,methacrylic(MAA)as functional monomer,trimethylolpropane trimethacrylate(TRIM)as crosslinker and acetonitrile as porogen.The optimal functional monomer and the ratio were selected by UV spectrum method.Comparative determination of the prepared MIP and NIP were carried out by equilibrium adsorption experiment.The results showed that the MIPs possessed the analogous-specific adsorptivity toward four TAs.Scatchard anilysis displayed that the apparent maximum binding capacities(Qmax) are 7.53,10.90,24.27,11.04 μg/mg,respectively,and relative selectivity coefficients(IF) are 3.58，1.49，1.62，2.25,respectively.By using the MIPs as sorbent in solid-phase extraction column,a molecularly imprinted solid-phase extraction combined with high performance liquid chromatographic(MISPE-HPLC) method was developed for the high performance enrichment and fast separations of four TAs in Przewalskia tangutica Maxim..Good linear calibration curves were obtained in the concentration range of 2-250 μg/mL(r2≥0.999 9) with LODs of 0.26-0.39 μg/mL.The method gave excellent recoveries(70.0%-96.3%)and precision(RSDs≤5.7%,n=3) at 10,50,100 μg/g spiked levels.The results indicated that the molecularly imprinted solid-phase extraction(MISPE)with slight matrix interference,highly repeated usage and expectant separation effect,greatly improved extraction efficiencies for four TAs in Przewalskia tangutica Maxim..

Key words：molecularly imprinted polymer(MIP);HPLC;solid-phase extraction(SPE);tropane alkaloids;Przewalskia tangutica Maxim.

收稿日期：2015-09-15；修回日期：2015-10-21

基金项目：国家自然科学基金项目(31260620;31471654)；农业公益性行业科研专项(201303040-13)

*通讯作者：佘永新，研究员，研究方向：仿生识别材料与检测技术，Tel:010-82106513，E-mail:0891syx@163.com

doi:10.3969/j.issn.1004-4957.2016.04.001

中图分类号：O657.72;TQ460.72

文献标识码:A

文章编号：1004-4957(2016)04-0373-07

苏学素，副教授，研究方向：生物有机药物合成，Tel:023-68349603，E-mail:suxuesu@163.com

研究报告