野生沙杵菇菌株筛选试验

鲍红春，贾博渊，李小雷，何瑞超，李 慧，贾晓东，贾学宇，吴小燕 ( .内蒙古自治区园艺研究院，内蒙古呼和浩特 000；.内蒙古漠菇生物科技有限公司，内蒙古鄂尔多斯 07000；.内蒙古农业大学，内蒙古呼和浩特 0005 )

沙杵菇[(JIA)]又称“沙棒槌菇”“沙锤子菇”,隶属于菌伞纲，伞菌亚目，蘑菇科，鬼伞属。因其形似沙槌而得名，是一种珍稀的药食兼用野生真菌，广泛分布于内蒙古鄂尔多斯市准格尔旗部分地区，在雨后的沙蒿地、草沙地、杨树林及沙漠腐草滩地较为常见。近年来由于野生蘑菇含有多种氨基酸及生物活性酶类，有助消化、降血压、抗肿瘤、降血脂等功效，使其备受人们青睐。野生沙杵菇因其绿色无污染、味道鲜美、营养丰富，深受人们喜爱，市场需求越来越大，由于利益的驱使，导致人们掠夺性采摘，使得当地珍贵野生沙杵菇资源濒临灭绝。目前关于沙杵菇人工栽培研究甚少，因此，选育质优、高产新菌种进行人工栽培，是保护野生沙杵菇资源的一项有效措施，对当地野生食用菌资源的开发利用将具有巨大意义。

野生菌株是优良菌种选育和驯化的基础材料之一。笔者以采集到的野生沙杵菇菌丝团与菌蕾为试验材料，经组织分离得到菌株，对分离菌株进行菌丝生长情况观察评估，并对2个优选菌株进行栽培试验，以期选育出适合大面积推广的优良菌株，为最终实现沙杵菇人工规模化栽培奠定理论基础。

1 材料与方法

试验所用的沙杵菇菌丝团与菌蕾，采集于内蒙古鄂尔多斯市准格尔旗布尔陶亥乡尔圪濠村附近沙蒿地，经组织分离培养得到原始菌株。

母种采用常规PDA培养基(马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1 000 mL)；原种培养料配方：玉米秸丝35.0%，玉米芯35.0%，羊粪28.5%，石膏粉1.5%，含水量50.0%～55.0%；栽培料配方：玉米秸30.0%，玉米芯30.0%，沙蒿粉10.0%，羊粪26.2%，石膏粉2.0%，石灰粉1.8%，含水量65.0%，pH 7.5～8.0。

野生沙杵菇菌丝体的分离。将野外采集的沙杵菇菌丝团和菌蕾置于0～5 ℃条件下低温处理。待菌丝团紧缩致密，菌蕾变小而圆整、质硬时，取出28个菌丝团，分别编号为SHCHG(S)01～SHCHG(S)28， 43个菌蕾编号为SHCHG(L)01～SHCHG(L)43。迅速清除干净外围的腐草土，分别放入无菌培养皿中。在超净工作台上，先用0.1%的HgCl溶液消毒10 min，再用无菌水冲洗，然后剥离外围物质，直到露出菌丝团的核心和单一菌蕾，再用无菌水反复冲洗，剥取约1 mm组织分别接入装有PDA培养基的培养皿中。在温度18 ℃、湿度80%～85%的生物培养箱中培养150 h，备用。

野生沙杵菇再生菌丝体的提纯。从28个菌丝团培养皿中，通过趋中优选原则，选取3组。为防止菌丝体感染病毒，在培养基中加入0.35‰的5%EDTA抑毒剂脱毒，采用先端菌丝体分离提纯菌丝，变换培养基复壮菌种，利用“适培基”驯化。选取较好的菌丝体转接到试管斜面中。同样，从43个菌蕾培养皿中选取10组较好菌丝体进行转接。

原种、栽培种制作和出菇试验。按上述配方配料，将230 g原种发酵料装入250 mL三角瓶，常压灭菌后接入已活化的 PDA菌种。栽培种发酵料采用17 cm×33 cm×0.06 cm聚丙烯袋。常温灭菌后接种，置于25 ℃生物培养箱中培养，观测菌丝形态特征、长势，比较各处理菌丝生长速度。出菇试验采用内径规格为42 cm×42 cm×18 cm 塑料筐，试验以优选的2个菌株进行原种培养及出菇比较试验，每个处理设10个重复。设置3个处理，分别为T100%未经堆腐发酵的培养料，T2发酵料与未发酵料各占50%，T3 100%经堆腐发酵的培养料。

菌丝长势评分标准：5分为菌丝长势浓密，均匀；4分为菌丝长势浓密，较均匀；3分为菌丝长势较浓密，较均匀；2分为菌丝长势较稀疏，较均匀；1分为菌丝长势稀疏，不均匀。

2 结果与分析

在同种平板PDA培养基上，供试菌株菌丝均能够正常生长，但各菌株菌丝颜色、菌丝浓密度、均匀度、菌丝长势存在一定差异。通过观察比较，采用趋中优选原则，从28个菌丝团中，优选出3个菌株，分别为SHCHG(S)02、SHCHG(S)09、SHCHG(S)23。 同样从43个菌蕾中，优选出10个菌株，分别为SHCHG(L)07、SHCHG(L)09、SHCHG(L)22、SHCHG(L)24、SHCHG(L)25、SHCHG(L)31、SHCHG(L)34、SHCHG(L)36、SHCHG(L)40、SHCHG(L)42。13个菌株的菌丝生长情况见表1，SHCHG(S)02与SHCHG(L)07菌株菌丝浓白粗壮、均匀浓密、长势强，经过反复优选确定SHCHG(S)02和SHCHG(L)07为最佳菌株。

表1 部分野生沙杵菇菌株的菌丝在PDA培养皿中的生长情况(18 ℃)

从表2可以看出，在相同处理下SHCHG(J)02菌株菌丝生长速度均优于SHCHG(L)07。2个菌株菌丝生长速度为5.0～7.5 mm/d。在T3处理下SHCHG(J)02和SHCHG(L)07菌株菌丝萌发时间最短，分别为20和21 h；菌丝生长速度最快，为7.5和6.5 mm/d。T2处理下菌丝生长情况次之，T1处理下2个菌株菌丝萌发时间长，生长速度慢，菌丝体长势弱。由此可知，在经过堆腐发酵的栽培料上，2个沙杵菇菌株表现为生长速度快，菌丝体粗壮且浓白、长势强；未经堆腐发酵的培养料，不利于野生沙杵菇菌丝正常生长。

表2 2个菌株菌丝体在不同栽培料中的生长情况Table 2 The mycelium growth of the 2 strains in different cultivated cultures

由表3可知，2个沙杵菇菌株在栽培料3个处理中均出菇。在T3处理下SHCHG(J)02菌株岀菇所需时间为66 d，平均每筐产量为2 387 g，生物学转化率为39.78%；SHCHG(L)07菌株岀菇所需时间为71 d，平均每筐产量为2 123 g，生物学转化率为35.38%，均优于其他2个处理。在T3、T1处理下，SHCHG(J)02菌株平均每筐产量、生物学转化率均优于SHCHG(L)07；T2处理下SHCHG(L)07菌株平均每筐产量、生物学转化率则优于SHCHG(J)02。由此可知，2个菌株在堆腐发酵的栽培料上栽培均表现为出菇所需时间短、产量高、生物学转化率高；在未经堆腐发酵的栽培料上栽培出菇晚、产量低、生物学转化率低。

3 结论与讨论

在食用菌生产中，菌种的作用是首要的，其质量直接影响食用菌产业的发展。而菌丝生长特性是衡量菌种质量的重要指标，菌丝生长迅速、长势强且浓密的食用菌菌种是实际生产中优质菌株的表现之一。该试验采用组织分离法得到的71个菌株，通过比较各菌株菌丝体的菌丝颜色、菌丝浓密度、均匀度、菌丝长势，优选出10个菌株，对10个菌株进行反复优选，最终确定SHCHG(S)02和SHCHG(L)07为最佳菌株。SHCHG(S)02和SHCHG(L)07与其他菌株相比菌丝生长最佳，萌发时间短，菌丝生长浓密且均匀，长势评分为5分，是具有开发潜力的沙杵菇优良菌株，可作为遗传改良目标菌株，并进一步观察鉴定，以培育成产量高、质优的沙杵菇菌株。

表3 沙杵菇不同菌株的产量比较Table 3 Comparison of yields of different strains of Coprinus comatus

笔者结合多年试验结果及该地区的原料特点，以玉米芯、玉米秸、沙蒿粉、羊粪为主料，这些原料在当地资源丰富，成本低廉，而且非常适合沙杵菇栽培。该试验以玉米秸30%、玉米芯30%、沙蒿粉10%、羊粪26.2%、石膏粉2.0%、石灰粉1.8%为配方，同种原料设置3个不同的堆腐发酵处理。结果表明，100%熟料栽培2个沙杵菇菌株生长势强，生长速度快，菌丝体粗壮且浓白，产量高，岀菇时间短，生物学转化率高。