荔枝草生药学研究

李小平 邱俊铭

摘要 [目的]通过对荔枝草的生药学研究，为荔枝草的开发利用、质量标准的制定和生药学研究提供依据。[方法]采用性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定的方法进行研究，并对其主要成分黄酮进行含量测定。[结果]荔枝草茎的横切面和叶的横切面显微特征较为明显，可作为荔枝草鉴别特征。方法学考察表明，芦丁在0.005～0.105 mg/mL线性关系良好（r=0.999 9），平均加样回收率为93.38%（RSD=2.8%）。[结论]该研究结果可为荔枝草质量标准制定提供依据。

关键词 荔枝草；生药学；黄酮含量

中图分类号 R282.5文献标识码 A文章编号 0517-6611（2018）15-0158-02

Abstract [Objective] The research aimed to provide the basis for the development and utilization of Sebastiania herba， the establishment of quality standards and the research of pharmacognosy through the pharmacogenetic study of Sebastiania herba. [Method]The plants were identified by the methods of trait identification， microscopic identification and physicochemical identification，and its main component flavonoid content was determined.[Result]The microscopic features of the stem cross-sections and leaf cross-sections of Sebastiania herba were obvious， which could be used as the identification characteristics of Sebastiania herba.The methodological investigation showed that rutin had a good linear relationship between 0.005 and 0.105 mg/mL （r=0.999 9）， and the average recovery was 93.38% （RSD=2.8%）.[Conclusion]The results of this study can provide a basis for the quality standard of Sebastiania herba.

Key words Sebastiania herba；Pharmacognosy；Flavonoids content

荔枝草为大戟科地杨桃属植物地杨桃[Sebastiania chamaelea（L.）Muell.-Arg]的干燥全草，又名地杨桃、坡荔枝[1]，主要分布于广东、广西和海南等热带和亚热带省区。该植物生于山坡、草地、溪旁，海南各地常见[2]，根据《广西药用植物名录》记载，性味咸，寒，入肝经，民间广泛用全草入药[3]，治疗眩晕和头痛，尤其治疗美尼尔氏综合症效果明显，其汁液具有收敛、强壮之功效[4]。目前，关于荔枝草的报道有地杨桃酯类化学成分分析[5]和地楊桃中游离氨基酸分析[6]，而关于荔枝草相关质量标准的研究鲜见报道。为了更好地开发应用，笔者对荔枝草进行生药学的研究，并对其主要有效成分之一黄酮的测定方法进行考察，为荔枝草质量标准制定提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象。荔枝草采自海南省三亚地区，共3批，分别编号120301、120401、120501，经海南大学黄世满教授鉴定为大戟科地杨桃属植物地杨桃[Sebastiania chamaelea（L.）Muell.-Arg]的全草。分别于3、4、5月初采摘，清洗干净，阴干，粉碎，过筛，备用。以3月份采摘的荔枝草全草（编号120301）为主要对象进行研究。

1.1.2 主要仪器。粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；BP211D电子天平（德国Sartorious）；数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司）；OLYMPUS光学显微镜（奥林巴斯中国有限公司）；DHG-9071A电热恒温干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；箱式电阻炉（上海华联环境试验设备公司恒昌仪器厂）；紫外分光光度计（岛津UV-2401PC）。

1.1.3 主要试剂。芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号10080-200707）；乙醇（分析纯，广州化学试剂厂）；亚硝酸钠（广州化学试剂厂）；硝酸铝（广州化学试剂厂）；氢氧化钠（西陇化工股份有限公司）；水合氯醛试剂（国药集团化学试剂有限公司）；甘油（广州化学试剂厂）。

1.2 方法

1.2.1 显微鉴定方法。取荔枝草干燥药材在水中浸软后进行徒手切片，滴加水合氯醛透化，再滴加几滴甘油酒精，盖上盖玻片，制成临时切片，对茎和叶的横切面进行显微观察、描述、拍照。

1.2.2 对照品溶液的制备。精密称取芦丁对照品20 mg，置100 mL容量瓶中，加70%甲醇适量，超声微热溶解，冷却后加70%甲醇至刻度，摇匀，即得0.2 mg/mL芦丁，作为对照品溶液。

1.2.3 标准曲线溶液的制备。精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0 mL，分别置25 mL容量瓶中，各加70%甲醇至10 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min；再加4%氢氧化钠溶液10 mL，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，放置15 min待用。

1.2.4 供试品溶液的制备。取本品粉末（过四号筛）约1 g，精密测定，加70%甲醇30 mL，称定重量，加热回流提取1 h，放冷，补重，过滤，收集续滤液，精密量取续滤液1 mL至25 mL容量瓶中，按照“1.2.3”标准曲线制备项下的方法，自“各加70%甲醇稀释至10 mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量，计算，即得。

1.2.5 紫外光谱测定波长。取芦丁对照品溶液，置紫外扫描仪中，在400～800 nm进行扫描，确定最大吸收波长为508 nm（图1）。

1.2.6 方法学考察。

1.2.6.1 线性关系的考察。以相应的试剂为空白，取“1.2.3”项下的标准曲线溶液，按照紫外-可见分光光度法，在508 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线。

1.2.6.2 稳定性试验。取同一供试样品溶液，分别在0、5、10、20、30、40 min测定吸光度，连续测定6次，计算RSD。

1.2.6.3 精密度试验。取按“1.2.4”方法制备的供试品溶液，重复进样6次，计算吸光度的RSD值。

1.2.6.4 重复性试验。取同一批号的样品，按“1.2.4”方法制备供试品溶液6份（样品批号为120301），按“1.2.5”项下的条件测定吸光度，计算平均含量和RSD。

1.2.6.5 加样回收试验。取同一批号样品6份（样品批号为120301），精密加入分别与样品中黄酮含量相等的对照品，按“1.2.4”方法制备供试品溶液，再按“1.2.5”项下的条件测定吸光度，计算平均回收率和RSD。

1.2.7 样品的含量测定。按“1.2.4”方法分别精密称取3批不同时间段采集的药材进行含量测定。

2 结果与分析

2.1 药材性状

本品常互抱成团。根细长，为10～20 cm，稍弯曲，红褐色，质轻脆，易折断，断面黄白色。茎细圆形，长15～70 cm，直立或倾斜，多分枝，黄绿色。枝叶弯曲互抱呈团，叶片细长，呈披针形，干燥叶略皱缩或易破碎。气微，味淡。

2.2 显微鉴别

2.2.1 茎的横切面。直径约2 mm，具四棱。表皮细胞1裂，长方形，外壁常具乳突突起，有腺毛和非腺毛。茎四棱处表皮内侧有厚角组织。皮层为数列椭圆形薄细胞。内皮层不明显，中柱鞘纤维成束或散在，壁微木化，断续排列成环。韧部细胞较小。形成层不明显。木质部在四棱处发达，导管圆形，木纤维多角，射线宽狭不一。髓部由大型薄壁细胞组成，茎中央常有裂隙。

2.2.2 叶的横切面。下表皮细胞垂围壁，波状弯曲；气孔直轴式（图2）；非腺毛1～3个细胞，长32～282 μm，基部细胞较大，直径约64 μm，壁厚5～11 μm，有疣状突起（图3）；小腺毛头部单细胞，偶见多细胞；腺鳞头部为4细胞，直径40～64 μm，柄短，单细胞。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系的考察。按“1.2.6.1”方法操作，吸光度分别为0.057、0.122、0.249、0.494、0.985、1.233，以对照品浓度（mg/mL）为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，计算得线性回归方程Y=11.766 0X-0.002 2（R2=0.999 9），表明芦丁在0.005～0.105 mg/mL线性关系良好。

2.3.2 稳定性试验。按“1.2.6.2”方法操作，计算吸光度的RSD为2.9%（n=6），表明样品在40 min内基本稳定。

2.3.3 精密度试验。按“1.2.6.3”方法操作，计算吸光度的RSD为0.20%，表明在此试验条件下精密度良好。

2.3.4 重復性试验。按“1.2.6.4”方法操作，计算得平均含量为3.28%，RSD为2.40%，表明该方法重复性良好。

2.3.5 加样回收试验。按“1.2.6.5”方法操作，6组样品的平均回收率为93.38%，RSD为2.8%（n=6），表明该方法准确、可靠，可用于荔枝草药材中黄酮的含量测定。

2.4 含量测定

经测定，采集的3批荔枝草中黄酮含量分别为3.28%、3.46%、3.44%，平均值为3.39%。

3 结论与讨论

该研究对荔枝草的性状、茎的横切面、叶的横切面进行观察描述，因荔枝草茎的横切面和叶的横切面显微特征较为明显，如茎四棱处表皮内侧有厚角组织；皮层为数列椭圆形薄细胞；内皮层不明显，中柱鞘纤维成束或散在，壁微木化，断续排列成环；导管圆形，木纤维多角，射线宽狭不一；髓部由大型薄壁细胞组成，茎中央常有裂隙；叶横切面有气孔和非腺毛等，可作为荔枝草鉴别特征。

参考落地生根中黄酮物质的测定方法[7-8]，通过方法学考察，测定3个批次荔枝草中黄酮含量，最高含量为3.46%，最低含量为3.28%，按最低值的15%的规定下限浮度，规定本品按干燥品计算，含总黄酮以芦丁（C27H30O16）计不得少于2.80%。

参考文献

[1] 中国科学院华南植物研究所.海南植物志：第3卷[M].北京：科学出版社，1965：179.

[2] 中国科学院“中国植物志”编辑委员会.中国植物志：第44卷 第3分册[M].北京：科学出版社，1997.

[3] 广西壮族自治区中医药研究所.广西药用植物名录[M].南宁：广西人民出版社，1986.

[4] 中国中医研究院中药研究所.全国中草药名鉴：上册[M].北京：人民卫生出版社，1996：387.

[5] 郭玲，何萌，林连波.地杨桃酯类化学成分的GC-MS分析[J].中国热带医学，2005，5（6）：1205-1206.

[6] 艾朝辉，郭玲，何萌.地杨桃中游离氨基酸的分析[J].中国热带医学，2005，5（7）：1440-1441.

[7] 刘德胜，韩景田，吕志华，等.落地生根黄酮类成分分析及抗氧化活性研究[J].安徽农业科学，2011，39（32）：19747-19750.

[8] 庆伟霞，王勇，姚素梅，等.三波长-分光光度法测定大叶落地生根中总黄酮的含量[J].分析试验室，2010，29（10）：90-92.