安徽大别山区金寨产灵芝子实体质量分析

徐茂红 赵克霞 许应生 薛晓辉 屠后为 陈莉莉 赵学群 吴茂林

摘要 [目的]分析安徽大别山区金寨人工种植灵芝的质量。[方法]依据2015版《中国药典》，采用薄层色谱法（TLC法）鉴别灵芝子实体，采用灰分测定法、浸出物测定法分别测定其灰分、浸出物含量，采用紫外分光光度法（UV法）测定其中多糖、三萜及甾醇含量。[结果]灵芝子实体供试品与对照品在色谱相应位置显现相同颜色荧光斑点；灰分和浸出物含量分别小于3.2%、大于3.0%；多糖、三萜含量分别大于0.90%、0.50%。[结论]安徽大别山区金寨人工种植灵芝质量符合2015版《中国药典》要求，可用于开发保健品或疾病辅助治疗药物。

关键词 灵芝子实体；质量分析；安徽大别山区金寨

中图分类号 S567.3+1文献标识码 A文章编号 0517-6611（2018）15-0160-03

Abstract [Objective]The research aimed to study the quality of cultivated Ganoderma lucidum in Anhui Jinzhai Dabie Mountain area.[Method ]According to the Chinese Pharmacopoeia 2015， using TLC method to determine Ganoderma lucidum fruit body， the contents of ash and extract were measured by ash determination and extract determination， and the contents of Ganoderma lucidum polysaccharides and triterpenes were measured by UV method. [Result] Ganoderma lucidum fruit body for the test product and the reference substance in the corresponding position of the chromatogram showed the same color fluorescent spots.The contents of ash and extract were less than 3.2% and greater than 3.0%， andpolysaccharides and triterpenes were greater than 0.90% and 0.50%. [Conclusion]The quality of cultivated Ganoderma lucidum in Anhui Jinzhai Dabie Mountain area was satisfied with the Chinese Pharmacopoeia 2015， and it can be uesd to health care products and adjuvant treatments.

Key words Ganoderma lucidum fruit body；Quality analysis；Anhui Jinzhai Dabie Mountain area

大別山区是目前国家11个集中连片特殊困难地区之一[1]，位于大别山区的金寨县地处安徽省西部（115°22′19″～116°11′52″E、31°06′41″～31°48′51″N），大别山主脉北坡，属亚热带湿润性季风气候，该地气候条件较适合灵芝的人工种植。为促进地方经济发展，当地政府积极给予政策和资金支持，引导企业和农户大力种植灵芝。目前，该地灵芝产品的种植、加工、研发及销售已成为当地经济发展的重要支柱之一[2]。

灵芝（Ganoderma lucidum）是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，《中国药典》2015年版一部中将赤芝[Ganoderma lucidum（Leyss.ex Fr.）Karst.]或紫芝（Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang）的干燥子实体作为药材来源。长期以来我国传统医学一直视其为滋补强壮、固本扶正的名贵中药。现代研究表明，灵芝多糖、三萜类等主要活性成分具有抗肿瘤[3]、抗氧化[4-5]、调节免疫功能[6]等生物活性。笔者对安徽大别山区金寨产灵芝子实体粗粉进行鉴别，并对其总灰分、浸出物、多糖和三萜含量等进行测定和研究，以期为灵芝产品的开发利用提供依据。

1 材料与方法

1.1 仪器

Xiangyi L-550离心机（长沙湘仪仪器有限公司）；AB135-S分析天平（瑞士梅特勒公司）；ZMT型数显马弗炉（长沙市秋龙仪器设备有限公司）。

1.2 材料

灵芝子实体，安徽利民生物科技股份有限公司提供；葡萄糖标准品（上海安谱实验科技股份有限公司）；甘露糖标准品（德国Dr.Ehrenslorfer公司）；木糖标准品（德国Dr.Ehrenslorfer公司）；半乳糖标准品（德国Dr.Ehrenslorfer公司）；三氟乙酸（EU公司）。

1.3 方法

1.3.1 灰分测定法。测定用的供试品粉碎，通过二号筛，混均匀后，取供试品2～3 g（如测定酸不溶性灰分，可取供试品 3～5 g），置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至0.01 g），缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600 ℃，使完全灰化并至恒重。根据残重，计算供试品中灰分含量（%）。

1.3.2 浸出物测定法。取供试品2～4 g，精密称定，置100～250 mL的锥形瓶中，加水50～100 mL，密塞，称定重量，静置1 h后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1 h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25 mL，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥 3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量。除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（%）。

1.3.3 灵芝子实体多糖溶液制备。

1.3.3.1 对照品溶液制备。取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成0.12 mg/mL的溶液，即得。

1.3.3.2 标准曲线绘制。精密量取“1.3.3.1”中对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，各加水至2.0 mL，迅速精密加入硫酸蔥酮溶液（精密称取蔥酮0.1 g，加硫酸100 mL使溶解，摇匀）6 mL，立即摇匀，放置15 min后，立即置冰浴中冷却15 min，取出，以相应的试剂为空白，用紫外-可见分光光度法在625 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线。

1.3.3.3 供试品溶液的制备。取本品粉末约2 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水60 mL静置1 h，加热固流4 h，趁热滤过，用少量热水洗涤滤器和滤渣，将滤渣及滤纸置烧瓶中，加水60 mL，加热回流3 h，趁热滤过，合并滤液，置水浴上蒸干，残渣用水5 mL溶解，边搅拌边缓慢滴加乙醇75 mL，摇匀，在4 ℃放置12 h，离心，弃去上清液，沉淀物用热水溶解并转移至50 mL容量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，取溶液适量，离心，精密量取上清液3 mL，置25 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

1.3.4 灵芝子实体三萜溶液制备。

1.3.4.1 对照品溶液制备。取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.2 mg/mL的溶液，即得。

1.3.4.2 标准曲线绘制。精密量取“1.3.4.1”中对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，分别置15 mL具塞试管中，挥干，放冷，精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液（精密称取香草醛0.5 g，加冰醋酸使溶解成10 mL，即得）0.2 mL、高氯酸0.8 mL，摇匀，在70 ℃水浴中加热15 min，立即置冰浴中冷却5 min，取出，精密加入乙酸乙酯4 mL，摇匀，以相应试剂为空白，按照紫外-可见分光光度法在546 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线。

1.3.4.3 供试品溶液的制备。取本品粉末约2 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水60 mL静置1 h，加热固流4 h，趁热滤过，用少量热水洗涤滤器和滤渣，将滤渣及滤纸置烧瓶中，加水60 mL，加热回流3 h，趁热滤过，合并滤液，置水浴上蒸干，残渣用水5 mL溶解，边搅拌边缓慢滴加乙醇75 mL，摇匀，在4 ℃放置12 h，离心，弃去上清液，沉淀物用热水溶解并转移至50 mL容量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，取溶液适量，离心，精密量取上清液3 mL，置25 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

1.3.5 样品含量测定。分别精密称取6份灵芝子实体粉末，按照“1.3.1”和“1.3.2”方法，计算总灰分和浸出物含量。按照“1.3.3.3”和“1.3.4.3”方法制备供试品溶液，分别计算多糖和三萜含量。

2 结果与分析

2.1 灵芝子实体的鉴别

按照2015年版《中国药典》第一部灵芝【鉴别】项（2）法进行，结果见图1。结果表明，供试品薄层色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，比移值（Rf）相同，且出现相同颜色的荧光斑点。

2.2 灵芝子实体的总灰分含量

取供试品能通过二号筛的粉末2～3 g，精密稱定，平行6份，按照2015年版《中国药典》第四部【通则2302】法进行。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量，检测结果见表1。检测结果显示，重复性较好，且符合2015年版《中国药典》不超过3.2%的限量要求。

2.3 灵芝子实体的浸出物含量

取供试品粉末2～4 g，精密称定，平行6份，按照2015年版《中国药典》第四部【通则2201浸出物测定法】项热浸法进行。根据浸出物重量，计算供试品中浸出物的含量，检测结果见表2。检测结果显示，重复性较好，且符合2015年版《中国药典》不得少于3.0%的要求。

2.4 灵芝子实体的多糖含量

精密量取供试品溶液2 mL，置10 mL具塞试管中，按照“1.3.3.2”标准曲线制备项下的方法，自“迅速精密加入硫酸蔥酮溶液6 mL”起，同法操作，测定吸光度为0.027 2。根据标准曲线（图2），得出回归方程y=0.573 8x+0.014 1，再根据回归方程计算得出供试品溶液中无水葡萄糖的含量为2.28%，满足2015版《中国药典》不得少于0.90%的限量要求。

2.5 灵芝子实体的三萜含量

精密量取供试品溶液0.2 mL，置15 mL具塞试管中，按照“1.3.4.2”标准曲线制备项下的方法，自“挥干”起，同法操作，测定吸光度为0.013 0。根据标准曲线（图3），得出回归方程y=1.573 7x-0.001 1，再根据回归方程计算得出供试品溶液中齐墩果酸的含量为0.89%，满足2015版《中国药典》不得少于0.50%的限量要求。

3 结论与讨论

已有研究表明，灵芝及其提取物抗氧化、抗肿瘤、调节免疫功能等药理作用与其灵芝多糖、三萜含量密切相关[7-8]。该研究采用蒸馏水、乙醇溶液浸提，应用UV法测定灵芝多糖、三萜含量，结果表明，灵芝子实体供试品与对照品在色谱相应位置显现相同颜色荧光斑点；灰分和浸出物含量分别小于3.2%、大于3.0%；多糖、三萜含量分别大于0.90%、0.50%。可见，安徽大别山区金寨人工种植灵芝质量符合2015版《中国药典》限量要求，可为灵芝系列产品开发提供试验依据。

参考文献

[1] 中共中央，国务院.中国农村扶贫开发纲要（2011-2020年）[A].2011.

[2] 六安市人民政府.2016-2020年六安市国民经济和社会发展第十三个五年规划纲要[A].2016.

[3] 闫征，王宏旭，刘莉莹，等.灵芝三萜类化合物的体外抗肿瘤活性研究[J].国际检验医学杂志，2017，38（5）：633-634，637.

[4] 陈杰，董扬，鲁吉珂，等.3种不同产地灵芝子实体粗多糖体外抗氧化活性比较研究[J].食品工业科技，2016，37（21）：100-104.

[5] 陈杰.不同产地灵芝子实体化学成分及抗氧化活性研究[D].天津：天津科技大学，2016.

[6] WANG Y Y， KHOO K H， CHEN S T， et al.Studies on the immuno-modulating and antitumor activities of Ganoderma lucidum（Reishi）polysaccharides：Functional and proteomic analyses of a fucose-containing glycoprotein fraction responsible for the activities[J].Bioorg Med Chem，2002，10：1057-1062.

[7] LIU J，SHIMIZU K，KONISHI F，et al.Anti-androgenic activities of the triterpenoids fraction of Ganoderma lucidum[J].Food chemistry，2007，100：1691-1696.

[8] ZHOU X W， LI L Q， YIN Y Z， et al.Identification of medicinal Ganoderma species based on PCR with specific primers and PCR-RFLP[J].Planta medica，2008，74（2）：197-200.