牛胚胎移植效果的影响因素分析

时间：2024-05-22

高立芳，黄德均，蒋安，周鹏，张健

(重庆市畜牧科学院，重庆 400015)

牛胚胎移植效果的影响因素分析

高立芳，黄德均，蒋安，周鹏，张健*

(重庆市畜牧科学院，重庆 400015)

影响牛胚胎移植妊娠率的因素很多。从供体牛、受体牛、操作人员的技术熟练程度以及移植后受体牛的饲养管理等方面对牛胚胎移植效果的影响因素进行了分析。

牛；胚胎移植；妊娠率；影响因素

胚胎移植是指将优良母畜的胚胎移植到生理环境相同的同种母畜子宫内进行孕育的过程。胚胎移植技术在国外已经是一项比较成熟的动物快速繁育技术。在国内，由于技术和管理上的问题，胚胎移植技术仍未得到广泛应用。在国内，胚胎移植费用高、移植妊娠率低等问题严重影响此技术的应用和推广。笔者对牛胚胎移植效果的影响因素进行了简要分析。

1 供体牛

1.1 供体牛的选择

供体牛是生产胚胎的主要载体，因此供体牛的选择至关重要。选择供体牛看重的是供体牛的遗传学价值，有优良的基因，同时体况良好，繁殖性能强，无生殖疾病。选好供体牛后，应加强饲养管理，为其发情受孕生产胚胎做好体能储备。

1.2 超排处理

在胚胎移植中，获得大量可用胚胎的主要途径就是超数排卵(简称“超排”)。理论上，经超排处理后排出的卵子越多越好，而如果1次排出的卵子太多，往往会因为促性腺激素剂量过大而影响胚胎的质量，导致受精率降低，同时胚胎的回收率也会有所降低。一般认为，牛和羊1次排出10～15枚卵子的超排效果较为理想。影响超排反应的因素也有很多，如供体牛的品种、遗传特性、体况、年龄、季节、胎次、营养及超排使用的激素种类、超排程序、母牛卵巢所处的生理状态和卵泡发育情况等。在超排激素使用方面，许多学者做了大量研究，研究结果也不尽相同。目前，大多使用FSH进行超排，连续注射3～5 d，每天2次，剂量依次递减，效果较好。秦殿武等[1]使用不同厂家生产的FSH对草原红牛进行超排处理，结果发现进口FSH比国产FSH效果理想，但成本较高。李铭等[2]使用国产FSH和进口FSH对牛进行超排，发现超排效果无明显差异，但进口FSH的可用胚数和可用胚率都较高。王峰等[3]探讨了不同品种、供体牛经产与否、不同营养水平、重复超排间隔时间、FSH开始注射时间等因素对供体牛超排效果的影响，结果表明经产供体牛的超排效果优于青年牛；不同营养水平和FSH开始注射时间对供体牛超排效果的影响极显著，而供体牛品种和重复超排间隔时间对供体牛超排效果的影响不显著。权富生等[4]对青年母牛和经产母牛超排的研究表明青年牛超排平均回收胚胎总数和可用胚数稍低于成年牛，但差异不显著(P>0.05)，与王峰等[3]的研究结果不一致。超排效果主要决定于超排时卵巢上卵泡波所处的时间及可反应卵泡数量。供体牛超排是在发情周期的9～14 d，其中10～12 d超排效果较为理想。刘水涛等[5]研究表明由于注射FSH时卵泡波所处的阶段不同，使母牛的卵泡发育出现了不一致的情况，所以个体间存在很大差异。因此，不同的品种、不同个体对超排反应差异极大，超排效果很不稳定。这直接影响着胚胎移植技术的应用与推广。

1.3 精液和人工授精次数

精液对胚胎数量、胚胎质量有较大影响。为了得到较多发育正常的胚胎，要求使用活率高、密度大的精液。

供体牛经超排处理后，应认真观察母畜发情表现，当母牛接受其他牛爬跨时开始推算人工授精时间，一般在超排母牛发情后的12 h或24 h进行人工授精。关于授精次数，一般进行2～3次人工授精，2次授精时间间隔8～10 h可提高母牛卵子的受精率，从而可以提高可用胚胎的回收率。

1.4 胚胎因素

胚胎质量是决定胚胎移植成败的关键因素。目前，通过超排生产的体内胚胎的移植妊娠率为30%～60%，高于体外受精的体外胚胎的移植妊娠率(20%～40%)。同时，不同胚龄对移植的位置要求也不同。手术法移植时，将受精卵至16-细胞的胚胎移植到输卵管中，而将16-细胞到囊胚期的胚胎移植到子宫角内。目前，大多数采用非手术法移植胚胎，通常是在供体发情后的第7(6～8)天采集胚胎，受体的移植时间是在发情后的第7天。胚胎发育阶段应与受体牛的发情期相吻合，即桑椹胚、早期囊胚、囊胚分别移植给发情第6、7、8天的受体牛。大量研究表明，无论是体内生产的胚胎还是体外生产的胚胎，鲜胚的移植成功率比冷冻胚胎的移植成功率高10%左右。

2 受体牛

2.1 受体牛的选择

受体牛为移植的胚胎提供子宫环境，移植后的胚胎要在其体内完成附植过程，并依赖受体牛的营养供应生长发育直到分娩。因此，受体牛的选择与饲养管理对于提高受体牛的移植可利用率、移植后的妊娠率及产犊率方面起着至关重要的作用。付静涛等[6]对受体牛的品种、年龄、胎次、体况以及同期发情时卵巢状况进行了研究，结果发现这些因素影响着胚胎移植妊娠率，但无显著差异。他们认为，受体牛应尽量选择年龄2～6周岁、1～3胎经产牛、体况中等以上、无繁殖障碍的牛。

2.2 胚龄和受体的发情同步化程度

胚胎着床是一个复杂的生理过程，受体母畜排卵后为了受精卵着床，内分泌系统与子宫内环境发生相应的变化，为接纳胚胎做充分准备。在受体牛方面，植入胚胎时其子宫内环境是否与胚龄相同是保证移植成功的关键，而简单易行的判断方法就是观察受体牛是否处于发情期的第7天。

2.3 受体牛的黄体发育状况

关于受体牛黄体状况对胚胎移植妊娠率的影响报道很多，而国内外专家观点不尽一致。理论上，将胚胎移植于有孕向发育子宫的任何一侧均能正常妊娠，但是由于受黄体激素分泌因素的影响，以黄体侧移植时能获得较高的妊娠率。何光中等[7]研究了受体牛黄体等级和黄体位置对胚胎移植妊娠率的影响，结果发现左侧、右侧卵巢的黄体移植妊娠率存在差异，其中右侧卵巢的黄体移植妊娠率大于左侧，但差异无统计学意义。付静涛等[6]报道左侧黄体妊娠率高于右侧，且差异有统计学意义。笔者认为，若要提高胚胎移植妊娠率，在胚龄与受体发情同步化的前提下，尽量将质量好的胚胎移植到黄体质量好的受体牛。

3 操作人员的技术水平

胚胎移植工作中除了胚胎室内熟练操作的专业人员外，同样需要掌握专业技术的胚胎移植技术人员。操作人员的技术熟练程度也是影响胚胎移植妊娠率的重要因素之一。张震等[8]认为胚胎移植所用时间长短也会影响胚胎移植妊娠率。因此，操作人员在短时间内使移植枪顺利通过子宫颈，将胚胎移植到子宫角1/3～1/2处，使子宫颈尽可能减少刺激，也是提高妊娠率的措施之一。