正交试验法优选湿清颗粒提取工艺

杨 弦， 谢 珊

(1.贵阳中医学院，贵州贵阳 550002；2.贵阳中医学院第二附属医院，贵州贵阳 550003)



正交试验法优选湿清颗粒提取工艺

杨 弦1， 谢 珊2

(1.贵阳中医学院，贵州贵阳 550002；2.贵阳中医学院第二附属医院，贵州贵阳 550003)

[目的]优选湿清颗粒的最佳水提工艺。[方法]以干膏率和黄芩苷的含量为考察指标，以加水量、提取次数、提取时间为考察因素,采用L9(34)正交试验法优选最佳水提工艺。[结果]优选的最佳提取工艺为10倍量的水、煎煮提取2次、每次1 h。[结论]黄芩苷水提工艺条件稳定、方法简便、实用可行，适用于工艺大生产，为湿清颗粒的制备奠定了理论基础。

湿清颗粒剂；提取工艺；优化；正交试验

湿清颗粒是治疗湿疹的经验方，具有清热凉血、解毒透疹、利湿的功效，处方由马齿苋、黄芩、野菊花、紫荆皮、丹皮、苦参、龙骨、甘草等中药材组成。临床用于治疗风湿热外邪入侵、气血热通行不畅、热毒阻滞机体引起的湿疹[1]。本方中黄芩为君药，黄芩苷为其治疗湿疹的主要成分。现代药理学研究表明，其具有抗菌、抗病毒、解热镇痛等生物活性，广泛用于细菌性感染、皮肤湿疹等疾病[2]。笔者以干膏率和黄芩苷的含量为考察指标，采用水煎煮法提取，并以加水量、提取次数、提取时间为考察因素,采用正交试验法优选提取工艺。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要仪器。高效液相色谱仪(日本岛津LC-20AT型，SPD-20A型紫外可见检测器)；BT125D电子天平(赛多利斯科学仪器[北京]有限公司)；SHB-III型循环水真空泵(北京市泰和格润仪器有限公司)。

1.1.2 主要试剂。黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110715-200514)；马齿苋、黄芩、野菊花、紫荆皮、丹皮、苦参、龙骨、甘草(购自四川众仁药业有限公司)；磷酸(高液)、水(纯净水)；甲醇、其他试剂均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 对照品的制备。精密称取在60 ℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品6.0 mg，加甲醇溶解并定容至10 ml，制成浓度为0.60 mg/ml的对照品溶液。

1.2.2 供试品的制备。按处方比例称取马齿苋、黄芩、野菊花、紫荆皮、丹皮、苦参、龙骨、甘草等药材，按正交试验设计方案分别提取，制备干浸膏，取干浸膏适量，研细，精密称定0.3 g，加入70%乙醇40 ml，加热回流3 h，放冷，滤过，滤液移入100 ml量瓶中，用乙醇分次洗涤容器和残渣，至刻度，摇匀。精密量取1.0 ml，至10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液[3-5]。

1.2.3 色谱条件。色谱柱为DiamonsilC18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水-磷酸(45∶55∶0.2)；流速1.0 ml/min；柱温25 ℃；检测波长280 nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2 500[6-7]。

1.2.4 方法学考察。

1.2.4.1 专属性考察。分别吸取对照品溶液、黄芩药材溶液、复方供试品溶液及复方阴性对照溶液各10 μl，按“1.2.3”色谱条件注入液相色谱仪测定，记录色谱图，考察专属性。

1.2.4.2 线性关系考察。取“1.2.1”项下0.60 mg/ml的黄芩苷对照品溶液，分别精密吸取0.2、0.4、0.8、1.0、1.2、1.4 ml置10 ml容量瓶中，稀释至刻度，得一系列对照品溶液,浓度分别为0.012、0.024、0.048、0.060、0.072、0.084 mg/ml,分别进样10 μl，记录色谱图，以进样浓度X(mg/ml)为横坐标、峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，并计算线性回归方程。

1.2.4.3 精密度试验。按“1.2.2”制备供试品溶液，在“1.2.3”色谱条件下，连续进样6次，每次10 μl，测定黄芩苷的峰面积，计算RSD值。

1.2.4.4 稳定性试验。按“1.2.2”制备供试品溶液，在“1.2.3”色谱条件下于1、2、4、8、12 h分别进样，进样量为10 μl，测定峰面积,计算RSD值。

1.2.4.5 重复性试验。按“1.2.2”制备6份供试品溶液，按“1.2.3”色谱条件测定黄芩苷的平均含量和峰面积，计算RSD值。

1.2.4.6 加样回收试验。精密量取“1.2.2”项下的复方供试品溶液0.5 ml(黄芩苷含量为0.463 mg/ml)共6份，置10 ml容量瓶中，按所取供试品黄芩苷含量的100%加入对照品溶液1 ml(0.232 mg/ml)，用甲醇定容至10 ml容量瓶，在“1.2.3”色谱条件下测定峰面积，计算平均回收率和RSD值。

1.2.5 湿清颗粒的提取工艺。

1.2.5.1 正交试验。以水为溶剂对马齿苋、黄芩、野菊花、紫荆皮、丹皮、苦参、龙骨、甘草等药材进行煎煮提取，采用综合评分为考察指标，其中黄芩苷含量作为主指标(权重系数0.7)，浸膏得率为次指标(权重系数0.3)，即综合评分=黄芩苷含量/黄芩苷最大含量×70%+出膏率/出膏率最大值×30%，并以加水量(A)、煎煮时间(B)、提取次数(C)为影响因素，采用L9(34)进行正交试验。

表1 水提取工艺因素水平表

1.2.5.2 干膏率的测定。按处方量称取马齿苋、黄芩、野菊花、紫荆皮、丹皮、苦参、龙骨、甘草等药材，共9份，按正交因素表中的各因素水平，采用L9(34)进行正交试验，水煎煮提取，滤过，合并滤液，浓缩，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，70 ℃干燥至恒重，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量，计算干膏得率。干膏得率=干膏量/药材量×100%[8]。

1.2.5.3 样品含量测定。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，测定黄芩苷含量。

2 结果与分析

2.1 方法学考察

2.1.1 专属性考察。按“1.2.4.1”条件下，记录色谱图。由图1可知，黄芩苷对照品溶液在15～17 min有峰，黄芩药材和复方在相应时间均有峰与之对应，而阴性对照溶液在15～17 min无峰，表明其他成分对黄芩苷的测定无干扰。

2.1.2 线性范围考察。按“1.2.4.2”方法操作，峰面积分别为190 979、368 566、727 131、912 339、1 077 213、1 280 900，以进样浓度X(mg/ml)为横坐标、峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，计算得回归方程为Y=2×107X+7 830.5(r=0.999 7)，表明黄芩苷在0.012～0.084 mg/ml范围内线性关系良好。

2.1.3 精密度试验。按“1.2.4.3”方法操作，计算RSD值为1.84%，表明精密度良好。

2.1.4 稳定性试验。按“1.2.4.4”方法操作，计算得出12 h内峰面积值的RSD为0.82%，表明供试品溶液在12 h内稳定性较好。

2.1.5 重复性试验。按“1.2.4.5”方法操作，测得平均含量为1.12%，RSD值为1.98%，表明该方法重复性较好。

2.1.6 加样回收试验。按“1.2.4.6”方法操作，测得平均回收率为100.3%，RSD为2.8%。

2.2 湿清颗粒的提取工艺优化

2.2.1 正交试验结果。按“1.2.5”方法操作，计算干膏得率、黄芩苷含量及综合评分，由表2可见，各考察因素对浸出物重量和黄芩苷含量的影响大小顺序为B>C>A，最佳提取方案为A2B1C2，即10倍量的水，煎煮提取2次，每次1 h。

2.2.2 验证试验。平行称取3份处方药材，按照最佳工艺提取并制备相应的供试品，测定干膏得率分别为24.46%、24.38%、24.30%，黄芩苷的含量分别为2.96、2.93、2.99 mg/g，验证试验结果均接近正交试验中的最大值，说明优选工艺稳定。

3 结论与讨论

湿清颗粒为复方制剂，溶剂的选择是以药材中有效成分的性质与临床常用提取方法相结合，根据各药的有效成分及

表2 提取工艺正交试验结果

其溶解性，确定水为溶剂，煎煮提取，既能提高有效成分的溶出，又符合中药复方传统提取。徐丹阳等[9]研究指出影响复方提取的主要因素是溶剂的用量、煎煮次数和煎煮时间等。该试验研究表明，最佳水提取工艺为10倍量的水、煎煮提取2次、每次1 h。按最佳提取工艺经3次重复试验验证得到黄芩苷的平均含量为2.96 mg/g，证明该黄芩苷水提工艺条件稳定、方法简便、实用可行，适用于工艺大生产，为湿清颗粒的制备奠定了理论基础。

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[4] 周从辉,熊义涛.芩玄胶囊提取工艺研究[J].时珍国医国药,2007,18(10):2503-2504.

[5] 莫金钢,赵骥民,张黎丽.黄芩苷提取工艺的研究[J].长春师范学院学报,2008，27(2)：47-50.

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[7] 陈发奎.常用中草药有效成分含量测定[M].北京:人民卫生出版社,1997：616-617.

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Extraction Process Optimization of Shiqing Granules by Orthogonal Test

YANG Xian,XIE Shan

(1.Guiyang University of Traditional Chinese Medicine,Guiyang,GuiZhou 550002;2.The Second Affiliated Hospital of Guiyang University of Traditional Chinese Medicine,Guiyang,GuiZhou 550002)

[Objective] The research aimed to optimize the water extraction process of Shiqing granules.[Method]With dry paste rate and the content of baicalin as examining index,the add water, extracting times and extracting time as factors,the best water extraction process was optimized by L9(34)orthogonal experimental method.[Result]The best extraction process was 10 times the amount of water, decoction extract 2 times, each time 1 h.[Conclusion]Baicalin water extraction processing conditions were stable, the method was simple, practical and feasible, and was suitable for the mass production of the process,which provides the theoretical foundation for the preparation of Shiqing granules.

Shiqing granules;Extraction process;Optimization;Orthogonal test

贵州省科技厅联合基金课题“湿清颗粒制剂的质量标准的研究”。

杨弦(1988-)，女，土家族，贵州铜仁人，硕士研究生，研究方向：药物新制剂与新剂型。

2015-11-16

S 567；R 283.6

A

0517-6611(2015)35-205-03