乌苏里瓦韦抑菌作用研究

王丽红， 姜晓婷， 刘 畅， 姜春玲， 谭凤田， 梅思琪

(1.佳木斯大学药学院，黑龙江佳木斯 154007；2.黑龙江省第三医院，黑龙江黑河 164000；3.江苏万邦医药营销有限公司，江苏徐州 221004)



乌苏里瓦韦抑菌作用研究

王丽红1， 姜晓婷1， 刘 畅2， 姜春玲1， 谭凤田3， 梅思琪1

(1.佳木斯大学药学院，黑龙江佳木斯 154007；2.黑龙江省第三医院，黑龙江黑河 164000；3.江苏万邦医药营销有限公司，江苏徐州 221004)

[目的]探讨乌苏里瓦韦的抑菌作用。[方法]以乌苏里瓦韦为研究对象，在单因素的基础上，选用Na+浓度、蔗糖浓度、不同的有机溶剂萃取物，采用正交试验的原理，研究乌苏里瓦韦提取液对抑菌作用的影响。[结果]乌苏里瓦韦乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、粪球菌、枯草杆菌、沙门氏杆菌均有抑制作用，但对枯草杆菌的抑制作用最强。最佳抑菌作用的条件为蔗糖浓度20%、Na+浓度为30%、乌苏里瓦韦乙醇提取液的石油醚萃取物，测定对枯草杆菌的抑菌环直径为8.932 mm。[结论]乌苏里瓦韦提取液具有抑菌作用。

乌苏里瓦韦；抑菌作用；正交试验

乌苏里瓦韦[Lepisorusussuriensis(Regel et Maack) Ching]为蕨类水龙骨科瓦韦属植物，别名石茶、树茶、还阳草、大石韦等。据记载，该植物具有清热解毒、利尿、止咳、止血、消肿等功效[1]。在我国分布于安徽、河南、山东、河北、辽宁、吉林、黑龙江[2]。民间多用于茶饮，具有良好的消肿、抗炎的功效。其化学成分绿原酸是一类重要活性物质，该试验研究乌苏里瓦韦绿原酸提取液的体外抗菌作用，采用超声提取法[3]，研究乌苏里瓦韦的乙醇提取液对5种细菌的抑制效果，并通过单因素试验和正交试验研究最佳抑菌效果[4-9]，为其乌苏里瓦韦的抑菌作用研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 原料与试剂。乌苏里瓦韦，采自佳木斯市汤原县亮子河发电厂附近；牛肉膏、蛋白胨、琼脂粉(3 000～9 000)；生化试剂，北京澳博星生物技术有限责任公司；其他试剂均为分析纯，天津市恒兴化学试剂有限责任公司。

1.1.2 主要设备及仪器 。KQ-250DE型超声波清洗器(昆明市超声仪器有限公司)、RE-52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、SHB型循环水式多用真空泵(郑州杜甫仪器厂)、FA2004分析天平仪(上海恒平科学技术有限公司)。

1.1.3 试验菌种。金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、粪球菌、枯草杆菌、沙门氏杆菌，均由佳木斯大学临床医学院提供。

1.2 方法

1.2.1 溶液的配置。分别取乌苏里瓦韦粉末2.0 g，采用超声萃取法，用70%乙醇为提取溶剂，料液比1∶68，超声40 min，超声3次，合并滤液。将提取液浓缩定容至10 ml容量瓶中，备用。精密吸取40、50、100、200、250、400、500、1000 μl乌苏里瓦韦提取液，定容至10 ml容量瓶中。

1.2.2 筛选菌种试验。采用乌苏里瓦韦提取液，分别稀释至50、25、12.5、6.28、3.13、2.01 mg/ml溶液，制作不同浓度的直径为6 mm的药敏纸片，取不同的菌种1 ml，均匀地涂布于琼脂培养基上，当培养基表面干燥后，将纸片贴于培养基表面，将培养基倒置在37 ℃培养箱内24 h后，观察并测定抑菌环直径，重复3次。

1.2.3 单因素试验。

1.2.3.1 不同萃取物的抑菌试验。分别用石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇有机溶剂萃取乌苏里瓦韦醇提取液，挥干有机溶剂后用蒸馏水定容至10 ml，按“1.2.2”方法进行抑菌试验，筛选乌苏里瓦韦抑菌成分的分布。

1.2.3.2 不同浓度的Na+溶液对抑菌试验的影响。取乌苏里瓦韦醇提物1 ml，采用5%、10%、15%、20%、30% NaCl溶液将提取物定容至10 ml，制作6 mm的药敏纸片，按“1.2.2”方法进行抑菌试验。

1.2.3.3 不同浓度的蔗糖的抑菌试验。取乌苏里瓦韦醇提物1 ml，用5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%蔗糖溶液将提取物定容至10 ml，制作6 mm的药敏纸片，按照“1.2.2”方法进行抑菌试验。

1.2.3.4 不同的金属离子的抑菌试验。取乌苏里瓦韦醇提液1 ml，用Cu2+、Mg2+、Al3+、Zn2+离子溶液将提取物定容至10 ml，制作6 mm的药敏纸片，按照“1.2.2”方法进行抑菌试验。

1.2.4 乌苏里瓦韦抑菌作用正交试验。在单因素试验的基础上，以蔗糖浓度(A)、Na+浓度(B)、不同萃取物(C)为试验因素，以抑菌环直径为指标，选用L9(33)正交表设计3水平3因素正交试验。

2 结果与分析

2.1 筛选菌种试验

从图1可以看出，乌苏里瓦韦乙醇提取液对金黄色葡萄球菌、粪球菌、沙门氏杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌这5种细菌均有抑制作用。乌苏里瓦韦对枯草杆菌的抑制作用最佳浓度为2.010 mg/ml，对其他细菌的抑制作用较差，而在药液浓度为25.068 mg/ml时，对粪球菌的抑菌效果最佳。在高浓度条件下，乌苏里瓦韦提取液对粪球菌的抑制作用优于其对其他细菌的抑制作用，而浓度较低时对枯草杆菌的抑制作用优于其对其他细菌的抑制作用，但综合资源利用以及最低抑菌浓度，枯草杆菌可作为抑菌试验最终的菌种。

2.2 单因素试验对抑菌作用的影响2.2.1

不同萃取物的抑菌试验结果。有机溶剂正丁醇萃取物的抑菌效果最好，抑菌环直径为9.63 mm，石油醚萃取物次之，抑菌环直径为8.977 mm，二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯最弱，抑菌环直径分别为6.310、6.987、6.431 mm，说明抑菌成分易溶于正丁醇。因为有机溶剂极性不同，所以不同有机溶剂提取的有效成分可能存在差异，发现有机溶剂正丁醇萃取物的抑菌效果最好。

2.2.2 不同浓度的Na+溶液对抑菌试验的影响。当Na+溶液浓度为15%时抑菌效果最好，乌苏里瓦韦提取液的抑菌环直径为10.083 mm，Na+溶液浓度为5%抑菌效果次之，抑菌环直径为9.540 mm，Na+溶液浓度为30%时抑菌环直径最小，为7.902 mm，说明不同浓度的Na+溶液对抑菌效果有一定影响。

2.2.3 不同浓度的蔗糖的抑菌试验结果。当蔗糖浓度为5%时，乌苏里瓦韦提取液的抑菌效果最好，抑菌环直径为8.651 mm，随着蔗糖浓度逐渐增大，抑菌环直径降低为7.290 mm，说明蔗糖浓度继续增大，抑菌环直径没有明显增加，抑菌效果没有明显变化。

2.2.4 不同的金属离子的抑菌试验结果。当加入Cu2+、Mg2+抑菌效果较好，加入Cu2+后抑菌环直径为7.432 mm，加入Mg2+后抑菌环直径为7.674 mm，添加Al3+、Zn2+后抑菌环直径最小，分别为6.881、6.853 mm。

2.3 乌苏里瓦韦抑菌作用正交试验

由表1可知，单因素中不同萃取物对抑菌效果影响最大，其次是Na+浓度、蔗糖浓度。最优组合为A2B3C1，即采用石油醚进行萃取，Na+浓度为30%，蔗糖浓度为20%。

表1 乌苏里瓦韦抑菌试验的正交设计

根据乌苏里瓦韦抑菌试验正交表得出的最优试验条件进行添加各种因素，最终得抑制枯草杆菌的抑菌环直径为8.932 mm，抑菌效果高于试验中任何一个组合，表明蔗糖浓度为 20%、Na+浓度为 30%、乌苏里瓦韦采用石油醚萃取液具有最佳抑菌作用。

3 结论与讨论

试验结果表明乌苏里瓦韦的乙醇提取物具有抑菌作用，各因素中不同有机溶剂萃取乌苏里瓦韦的乙醇提取液对抑菌效果影响最大，其次是Na+浓度、蔗糖浓度。在此试验中，乌苏里瓦韦萃取物浓度与蔗糖浓度对抑菌效果相比，抑菌环直径最大可达9 mm以上，抑菌效果较明显，说明乌苏里瓦韦具有较强的抑菌作用，有待于进一步开发利用。

[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草：第二册[M].上海:上海科学技术出版社,1999:238.

[2] 中国科学院《中国植物志》编辑委员会.中国植物志：第6(2)卷[M].北京：科学出版社,2000.

[3] 王丽红,谭凤田,赵宏.等.Box-Behnken响应面分析法优化乌苏里瓦韦中绿原酸提取工艺[J].中国实验方剂学杂志，2014,20(17):24.

[4] 华波.重庆特有植物荷叶铁线藏Adiantumreniformevar.sinense多糖和黄酮的提取、抗氧化及抑菌特性研究[D].重庆：西南大学,2011.

[5] 钟爱清.三种蕨类醇提液抑菌性的初步研究[J].农业科技通讯,2011(9):66-68.

[6] 梁晓华,梁晓东,郎晓丽,等.6种药用蕨类植物提取液的抑菌试验[J].中药材,2011,34(7):1107-1110.

[7] 许柑叶,郑怡,陈晓清.8种蕨类植物多糖提取物抑菌效果的研究[J].福建师范大学学报(自然科学版),2005,21(2):99-102.

[8] 蔡建秀,吴文杰,葛清秀.20种药用蕨类植物提取液抑菌试验研究[J].亚热带植物科学,2004,33(1):22-25.

[9] 殷帅文,王庄先,聂森,等.几种蕨类植物抑菌活性的初步研究[J].安徽农业科学,2008,36(4):1492-1493.

Antibacterial Action ofLepisorusussuriensis(Regel et Maack) Ching

WANG Li-hong1,JIANG Xiao-ting1,LIU Chang2et al

(1.College of pharmacy,Jiamusi University,Jiamusi,Heilongjiang 154007;2.Third Hospital of Heilongjiang Province,Heihe,Heilongjiang 164000)

[Objective] The research aimed to approach antibacterial effect ofLepisorusussuriensis.[Method]WithLepisorusussuriensisas the research object,based on a single factor,using Na+concentration, sucrose concentration and different organic solvent extracts,the effect of the extract liquid ofLepisorusussuriensison bacteriostatic action was studied by the principle of orthogonal test.[Result]Ethanol extract liquid ofLepisorusussuriensishad a good inhibitory effect on staphylococcus aureus,escherichia coli,fecal bacteria,bacillus subtilis and salmonella,especially to the bacillus subtilis. When the sucrose concentration was 20%, and Na+concentration was 30%,Lepisorusussuriensisbacteriostatic had the best effect on petroleum ether extract, eventually, it turns out that the diameter of the bacteriostatic ring was 8.932 mm.[Conclusion]Lepisorusussuriensisextract liquid had bacteriostatic action.

Lepisorusussuriensis(Regel et Maack) Ching; Antibacterial action; Orthogonal test

佳木斯大学大学生创新创业训练项目(2014xj010);佳木斯大学研究生创新项目(LM2014_065);佳木斯大学博士基金项目(22zb201513)。

王丽红(1968- )，女，辽宁海城人，教授，博士，从事植物药的开发及利用研究。

2015-11-13

S 567

A

0517-6611(2015)35-215-02