油菜蜂花粉黄酮的研究进展

薛茗阁，温苗苗，祁梦雅，卜翠萍，3*，赵祥祥，3，纪丽莲，3　(1.扬州大学食品科学与工程学院，江苏扬州 517；.淮阴师范学院生命科学学院，江苏省环洪泽湖生态农业生物技术重点实验室，江苏淮安 3300；3.淮阴师范学院，江苏省高校区域现代农业与环境保护协同创新中心，江苏淮安 3300)



油菜蜂花粉黄酮的研究进展

薛茗阁1，2，温苗苗2，祁梦雅2，卜翠萍2，3*，赵祥祥2，3，纪丽莲1，2，3(1.扬州大学食品科学与工程学院，江苏扬州 225127；2.淮阴师范学院生命科学学院，江苏省环洪泽湖生态农业生物技术重点实验室，江苏淮安 223300；3.淮阴师范学院，江苏省高校区域现代农业与环境保护协同创新中心，江苏淮安 223300)

摘要蜂花粉素有“微型营养库”的称号，具有抗氧化、护肝、抑菌、抗炎等多种药理活性。在此对油菜蜂花粉中黄酮类物质的提取工艺、已分离或检测到的成分及其生物活性进行综述，为今后其研究和开发利用提供参考。

关键词油菜蜂花粉；黄酮类；提取工艺；化学成分；生物活性

Research Progress on Flavonoids of Rape Bee Pollen

XUE Ming-ge1,2, WEN Miao-miao2, QI Meng-ya2, BU Cui-ping2,3*et al(1. College of Food Science and Engineering, Yangzhou University, Yangzhou, Jiangsu 225127; 2. Jiangsu Key Laboratory for Eco-agricultural Biotechnology around Hongze Lake, School of Life Sciences, Huaiyin Normal University, Huaian, Jiangsu 223300; 3. Jiangsu Collaborative Innovation Center of Regional Modern Agriculture & Environmental Protection, Huaiyin Normal University, Huaian, Jiangsu 223300)

AbstractRape bee pollen is called “micro-nutrition library”, with a variety of pharmacological activity, antioxidant, antibacterial, anti-inflammatory and hepatoprotective. The extraction techniques, isolated and detected components and the physiological activities of citrus flavonoids were introduced, which will provide a reference on research and exploitation in the future.

Key wordsRape bee pollen; Flavonoids; Extraction technique; Chemical components; Biological activity

蜂花粉是蜜蜂在采集的花粉中加入花蜜和唾液而形成的花粉团状物，种类多与蜜蜂采集花朵的种类相关，其中，油菜蜂花粉应用潜力大。油菜蜂花粉在我国分布广泛，产量丰富，居我国花粉贸易之首。营养价值方面，油菜蜂花粉因为含有人体所需的糖类、氨基酸、脂肪酸、维生素、微量元素以及大量的酚类、酶类等其他生物活性物质，被公认为天然的健康食品[1]。研究证明，油菜蜂花粉具有抗氧化、抗炎症、抗辐射、抑制肿瘤、调节免疫、抑菌、调节血脂等多种生物功效，在提高人体综合免疫功能、调节神经系统、改善肠胃功能、防治心脑血管疾病等方面发挥重要疗效[2-5]。

黄酮类化合物是一类重要的天然有机化合物，是植物在长期自然选择过程中产生的一类次生代谢产物。黄酮类化合物既有高度的化学反应性，又有很多重要的药理作用[6]。油菜花蜂花粉中总黄酮含量在玫瑰花、五味子花等15种蜂花粉中含量最高[7]，且与蜂花粉清除自由基、降血压、降血脂、糖尿病和前列腺炎治疗和预防的功效直接相关[8-11]。目前油菜蜂花粉中黄酮类化合物的研究主要集中在提取纯化、测定含量及成分、生物活性等方面。笔者在此对油菜蜂花粉中黄酮类化合物的提取工艺、化学成分和生物活性进行归纳综述，为今后的深入研究和开发利用提供参考。

1提取工艺

目前黄酮类化合物的传统提取方法主要有加热回流法、冷浸提取法、索式提取法，新型提取方法有超声波辅助提取法和微波辅助提取法。王小艳等[12]分析比较加热回流法、冷浸提取法、索式提取法和超声波辅助提取法4种方法发现，索式提取法得率最高，但不适合大量样品的制备；加热回流法得率次之，但溶剂需求量较大，操作较繁琐；冷浸法和超声法得率近似，但冷浸法耗时过长，同时有效成分不易完全浸出；超声法提取时间短、使用溶剂少、操作简单，是一种可推广的新型提取方法；经正交试验，确定超声辅助提取法的最佳工艺条件为40 ℃、100 W功率下用1∶12的料液比，提取25 min，测得含量为31.27 mg/g。党云刚[13]通过响应面法确定以上4种方法的最佳提取条件，综合比较得出水浴回流法黄酮得率相对较高，但超声法提取效率最高，作为提取方法更为合适；超声波法最佳提取条件为温度50 ℃、时间20 min、功率200 W、乙醇浓度80%、料液比1∶31，超声次数3次，黄酮得率为3.249%。

微波辅助提取法作为一种新型方法，提取效率也较高。在相同的条件下，微波辅助提取法提取油菜花中黄酮得率比索式提取法、冷浸法、加热回流法更高，槲皮素和山奈酚的含量分别可达1.37、23.44 mg/g[14]。这是因为微波法可同时作用细胞壁的内外两层结构[15]，使蜂花粉同时被加热，内部迅速升温，内压大大增加，超过细胞壁膨胀所能承受的压力时，细胞破裂，从而使有效成分溶解于萃取溶剂中[16-17]。

为了更好地利用超声波和微波的优势，孙岩等[18]采用超声-微波协同萃取法提取油菜蜂花粉中黄酮类物质，与热回流法、超声法、微波法相比，提取效率明显提高，同时具有节能、安全的优点；在乙醇体积分数90%、料液比1∶30、微波功率260 W、提取时间180 s条件下，提取得率最高，达3.36%。

2化学成分

已报道的油菜蜂花粉黄酮主要为黄酮醇苷类，主要包括槲皮素、山奈酚、异鼠李素、柚皮素、芦丁。其中经核磁鉴定的化合物有山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3，4′-双-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖-(2→1)-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-( 1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-O-新橙皮糖苷[19]、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-( 1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-(2→1)-β-D-葡萄糖苷、5，7，4′-三羟基-8-甲氧基黄酮醇-3-O-β-D-槐糖苷[20]、异鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-( 1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷[18]。

3生物活性

在还原力的评价结果中，黄酮类物质和其他酚类物质相互协同，一起发挥作用[31]。从地理角度分析，全国几个油菜主产区中，新疆、湖北油菜蜂花粉中总黄酮含量、还原力和DPPH自由基清除率显著高于其他产地[32]。可能与植物生长环境的昼夜温差、湿度以及光照时间等因素有关[33-34]。

3.2保肝作用黄酮醇苷类物质是油菜蜂花粉中主要的保肝活性成分。CCl4经肝微粒体细胞色素P450酶激活后，生成三氯甲烷自由基(·CCl3)和氯自由基(·Cl)，它们攻击肝细胞膜上磷脂分子引起脂质过氧化或肝微粒体脂质和蛋白质发生共价结合，可直接引发肝细胞脂质过氧化作用，诱发细胞死亡[35-37]。油菜蜂花粉黄酮醇苷类物质可以通过清除活性自由基，终止自由基链式反应，显著地降低CCl4造成的脂质过氧化小鼠苷匀浆和血清中MDA含量，提高SOD活性和总抗氧化能力(T-AOC)，改善CCl4诱导的脂质过氧化损伤[38-39]。彭定利等[9，20]建立以10 mmol/L CCl4诱导的体外肝细胞损伤模型中，通过MTT法测定细胞存活率并以其作为细胞活性筛选指标，正丁醇萃取组分在100 μg/ml剂量下活性可高于同剂量的水飞蓟宾，可为模型组的2.41倍，初步判断为黄酮醇苷类物质，并从作用机制验证了其对CCl4引起的肝损伤具有显著保护作用。

3.3抑菌作用Carpes[40]首先发现蜂花粉中的酚类物质具有抑菌作用。孙丽萍等[41]进而对油菜蜂花粉分离提取，以对枯草芽孢杆菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的抑菌能力为活性跟踪指标，以最小抑菌质量浓度(MIC)和最小杀菌质量浓度(MBC)为评价指标，进行活性追踪和结构鉴定，结果表明，乙醚萃取部分的抑菌活性最强，山奈酚是其中主要抑菌活性成分，效果显著，是油菜蜂花粉抑菌作用的主要物质基础。

3.4其他郭雪微等[42]选择确诊血脂紊乱、2型糖尿病、脑梗塞和健康者各30例，给与油菜蜂花粉黄酮类化合物口服40 mg，每日2次，持续2个月，结果发现，血脂紊乱组、糖尿病组和脑梗塞各组甘油三酯(TG)、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PCT)、高敏C反应蛋白(hsCRP)和丙二醛(MDA)明显下降，高密度脂蛋白胆固醇(HDL- C)显著升高，血糖(BG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)也有一定程度下降，说明油菜蜂花粉黄酮类化合物具有一定程度地调节血脂、抑制炎性因子、控制血糖作用，在临床的药理研究有很广阔前景[43]。

4结语

油菜蜂花粉含有大量黄酮类化合物，因其显著的药理特性和保健功能，具有很大的研发价值。但目前对油菜蜂花粉的主要研究停留在酚类化合物的生理活性上，在食品的应用上也主要侧重于蜂花粉整体的功能疗效，还没有完全科学地认识黄酮生物活性上的应用空间。另外，对黄酮的分离提取方法绝大多数还局限在试验室的操作阶段，与商业化大规模的生产开发上存在一定距离。相信随着相关试验的开展，油菜蜂花粉中黄酮类化合物更多的生物活性将被发现，被人们所开发利用。

参考文献

[1] 冯慧，焦士蓉，唐远谋，等.油菜花粉研究进展[J].食品工业，2011(9)：108-110.

[2] WAGENLEHNER F M，SCHNEIDER H，LUDWIG M，et al.A pollen extract(Cernilton)in patients with inflammatory chronic prostatitis-chronic pelvic pain syndrome：A multicentre，randomised，prospective，double-blind，placebo-controlled phase 3 study[J].European urology，2009，56：544-551.

[3] LEBLANC B W，DAVIS O K，BOUE S，et al.Antioxidant activity of Sonoran Desert bee pollen[J].Food chemistry，2009，115：1299-1305.

[4] MEDEIROS K C，FIGUEIREDO C A，FIGUEREDO T B，et al.Anti-allergic effect of bee pollen phenolic extract and myricetin in ovalbumin-sensitized mice[J].Journal of ethnopharmacology，2008，119：41-46.

[5] 汪磊，朱波，王国泽，等.油菜花粉保健功能研究进展[J].粮食与油脂，2012(11)：5-8.

[6] 延玺，刘会青，邹永青，等.黄酮类化合物生理活性及合成研究进展[J].有机化学，2008，28(9)：1534-1544.

[7] 胡晓岚，汤丽倩，张翀，等.蜂花粉总黄酮含量的品种和产地差异[J].食品工业科技，2013(3)：132-139.

[8] 陈南迪，方妙玉，吴锡鸿，等.不同品种蜂花粉总黄酮含量与抗氧化活性相关性的研究[J].食品工业科技，2013，34(1)：70-73.

[9] 彭定利，孙丽萍，庞杰，等.油菜蜂花粉保肝活性组分的分离及细胞学筛选[J].中国食品学报，2014，14(3)：100-105.

[10] 郭芳彬.蜂花粉防治前列腺增生的效果和机理探析[J].蜜蜂杂志，2004(10)：5-7.

[11] 韩慧英.前列康及其原料油菜花粉活性成分的研究[D].沈阳：沈阳药科大学，2004：105-107.

[12] 王小艳，王洪伦，刘永军，等.油菜蜂花粉总黄酮集中提取方法的研究[J].天然产物研究与开发，2007(19)：318-321.

[13] 党云刚.蜂花粉中黄酮类物质的提取及纯化工艺研究[D].西安：陕西科技大学，2010：58-59.

[14] LV H H，WANG X Y，HE Y F，et al.Identification and quantification of flavonoid aglycones in rape bee pollen from Qinghai-Tibetan Plateau by HPLC-DAD-APCI/MS[J].Journal of food composition and analysis，2015，38：49-54.

[15] BLACKMORE S，WORTLEY A H，SKVARLA J J，et al.Developmental origins of structural diversity in pollen walls of Compositae[J].Plant systematics and evolution，2009，284：17-32.

[16] 贾淑云.微波萃取技术在中药有效成分提取中的应用[J].中国处方药，2014，12(3)：34-35.

[17] MANDAL V，MOHAN Y，HEMALATHA S.Microwave assisted extraction-aninnovative and promising extraction tool for medicinal plant research[J].Pharmacognosy reviews，2007，1：7-18.

[18] 孙岩，郭庆兴，童群义.超声-微波协同萃取法提取油菜蜂花粉中黄酮类物质[J].食品与发酵工业，2014，40(10)：238-244.

[19] 杨开，叶兴乾，刘东红，等.油菜花粉中黄酮苷类的制备分离和鉴定[J].中国粮油学报，2010，25(8)：91-97.

[20] 彭定利.油菜蜂花粉保肝活性成分的分离及其保肝机制初探[D].福州：福建农林大学.2013：35.

[21] VINSON J A，DABBAGH Y A，SERRY M M，et al.Plant flavonoids，especially tea flavonols，are powerful antioxidants using an in vitro oxidation model for heart disease[J].Agric Food Chem，1995，43(11)：2800-2802.

[23] ENRIQUE M，GLORIA M.The anti-oxidant activity of Chilean honey and bee pollen produced in the llaima volcano’ s zones[J].Journal of food quality，2012，35：315-322.

[24] 石玉平，卢挺，王永宁.油菜蜂花粉中黄酮类物质清除羟基自由基的研究[J].食品科学，2004，11(25)：300-302.

[25] 陈南迪，方妙玉，吴锡鸿，等.不同品种蜂花粉总黄酮含量与抗氧化活性相关性的研究[J].食品工业科技，2013，34(1)：70-73.

[26] 杨佳林.油菜蜂花粉黄酮醇的测定及其抗氧化活性研究[J].食品科学，2010，31(3)：79-82.

[27] 饶剑，吴盼盼，徐德平.油菜蜂花粉的抗氧化活性[J].食品与发酵工业，2014，40(1)：139-142.

[28] 赵剑喜，卜令娜，刘晔玮，等.油菜蜂花粉抗氧化活性研究[J].天然产物研究与开发，2012，24(7)：959-962.

[29] 曹炜，赵长琦，尉亚辉.油菜花粉黄酮对氧自由基致鼠红细胞膜损伤的保护作用[J].食品科学，2002，23(9)：115-118.

[30] 魏永生，郑敏燕.油菜蜂花粉黄酮类物质的提取及抗氧化性研究[J].西北农业学报，2005，14(3)：123-126.

[31] 张红城，董捷，李慧，等.六中蜂花粉多酚和黄酮类物质含量测定及抗氧化性的研究[J].食品科学，2007，28(9)：500-504.

[32] 程妮，王毕妮，邓建军，等.不同产地油菜蜂花粉抗氧化活性比较研究[J].食品科学，2011，32(21)：34-36.

[33] SANTOS-GOMES P C，SEABRA R M，ANDRADE P B，et al.Phenolic antioxidant compounds produced byinvitroshoots of sage(SalviaofficinalisL.)[J].Plant science，2002，162(6)：981-987.

[34] COHEN S D，TARARA J M，KENNEDY J A.Assessing the impact of temperature on grape phenolic metabolism[J].Analytica chimica acta，2008，621(1)：57-67.

[35] BOLL M，WEBER L W D，BECKER E，et al.Mechanism of carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity.Hepatocellular damage by reactive carbon tetrachloride metabolites[J].Zeitschrift Fur Naturforschung C，2001，56(7/8)：649-659.

[36] WEBER L W，BOLL M，STAMPFL A.Hepatotoxicity and mechanism of action of haloalkanes：Carbon tetrachloride as a toxicological model[J].Crit Rev Toxicol，2003，33(2)：105-136.

[37] BERGER M L，BHATT H，COMBES B，et al.CCl4-induced toxicity in isolated hepatocytes：The importance of direct solvent injury[J].Hepatology，1986，6(1)：36-45.

[38] 孙丽萍，徐响，廖磊.油菜蜂花粉黄酮醇苷的体内外抗氧化研究[J].食品科学，2010，31(19)：359-362.

[39] 杨佳林，孙丽萍，徐响.油菜蜂花粉黄酮醇的测定及其抗氧化活性研究[J].食品科学，2010，31(3)：79-82.

[40] CARPES S T.Study of prepations of bee pollen extracts，antioxidant and antibacterial activity[J].Lavras，2007，31(6)：1818-1825.

[41] 孙丽萍，杜夏，陈有根，等.油菜蜂花粉中抑菌活性成分的分离纯化和结构鉴定[J].食品科学，2011，32(19)：75-78.

[42] 郭雪微，卢梃，鲍艳江，等.油菜蜂花粉黄酮类化合物抗氧化等作用的临床观察[J].北京中医药，2011，30(7)：488-492.

收稿日期2015-10-23

作者简介薛茗阁(1989- )，女，天津人，硕士研究生，研究方向：营养与食品卫生学。*通讯作者，副教授，博士，从事动物学、发育生物学、动物生物学研究。

基金项目国家自然科学基金(31300463)；江苏省自然科学基金(BK20130414)。

中图分类号S 609.9

文献标识码A

文章编号0517-6611(2015)33-165-03